HEMATIMETRIA

El estudio de la sangre perifrica es de suma

importancia en el diagnstico y tratamiento de las
enfermedades hematolgicas (y no
hematolgicas).

Tejido ms fcilmente accesible.

HEMATIMETRIA

Estudio cuantitativo (propiamente dicho).

Estudio cualitativo.

Permite:

Diagnstico de enfermedades especficas.

Da perspectivas en la fisiopatologa de determinado
proceso.
Medicin de respuesta al tratamiento.

Para qu?

Est produciendo la MO suficiente cantidad de

clulas maduras para todas las estirpes celulares?

El desarrollo de cada una de las series es

cualitativamente normal?

Las medidas cuantitativas obtenidas por los

contadores automticos son bastante fiables y
permiten de una manera eficiente identificar
alteraciones groseras en la hematopoyesis.

Sin embargo

El estudio morfolgico es esencial para

confirmar ciertos hallazgos cuantitativos y
cualitativos, e investigar cualitativamente las
posibles diferenciaciones anormales de las estirpes
celulares.

Guiado en el estudio morfolgico, el mdico

puede concentrarse ms en la mdula sea o en las
enfermedades sistmicas que de forma secundaria
afectan al sistema hematopoytico

AUTOMATIZACION EN EL LABORATORIO
DE HEMATOLOGIA

Analizadores automticos en Hematologia: 1950

Principio de la electroconductividad Wallace
Coulter

Surge por la necesidad de dar solucin al nmero

cada vez mayor de solicitudes recibidas y al
aumento del nmero de sustancias a determinar,
as como por la necesidad de controlar mejor
todos los pasos y manipulaciones realizadas de
forma manual y para que los resultados sean
emitidos con mayor objetividad y fiabilidad

EVOLUCION DIAGNOSTICA
Primera Generacin:
C.H. MANUAL (CAMARA NEUBAUER)
Segunda Generacin:
C.H. SEMIAUTOMATICO
Tercera Generacin:
C.H. AUTOMATIZADO,
HISTOGRAMA ( GR,GB,PLT )
RECUENTO % GB
Cuarta Generacin:
C.H. AUTOMATIZADO,
PERFORACION TAPA,
HISTOGRAMA ( GR, PLT )
DISPERSOGRAMA ( GB ) EN
5 PARTES

MEDIDAS CUANTITATIVAS DE LOS ELEMENTOS

HEMATOPOYTICOS DE LA SANGRE
(HEMATIMETRIA)

CONTADOR AUTOMTICO TPICO:

Sangre aspirada es dividida en dos:

Una es lisada y diluida para permitir medir la

concentracin de hemoglobina y el recuento de
leucocitos (RDL);
La otra es diluida, pero sin lisis, para el recuento y
medida de las clulas rojas y las plaquetas (tambin
reticulocitos).

Componentes de los autoanalizadores

Sistema de aspiracin y dilucin de la muestra:

cantidad precisa y dilucin en solucin isotnica con
capacidad conductora
Sistema de bombeo y distribucin de las
muestras y reactivos: fraccionamiento, distribucin,
mezcla y conduccin a dispositivos de medida

Componentes de los autoanalizadores

Dispositivos de medida: parte fundamental.

Diferentes mtodos: conductividad elctrica,
dispersin de luz laser o campo oscuro,
colorimtricos, espectrofotomtricos, reacciones
citoqumicas, tinciones, centrifugado, reconocimiento
morfolgico, etc. EL DISPOSITIVO DE MEDIDA
DEPENDE DEL TIPO DE PARAMETRO
ANALIZADO Y SU DISEO A SU VEZ DEPENDE
DEL MODELO DE AUTOANALIZADOR

Componentes de los autoanalizadores

Sistema de transduccin y discriminacin de

datos: Interpretacin. Transforma seales en
impulsos elctricos clasificados
Lector y registrado de datos: Procesamiento de
datos por sistemas de transduccin (procesador
informtico, pantalla, impresin)

ELEMENTOS DE LO
AUTOANALIZADORE
S

Sistema de conductividad elctrica

(resistencia, impedancia elctrica)
El nmero de seales
elctricas generadas indica
el numero de clulas, y la
amplitud de la seal
elctrica es directamente
proporcional al tamao o
volumen de las clulas

Mtodo de dispersin de luz: rayo de luz

LASER

El grado de interferencia es
directamente proporcional al
tamao de la clula, y el
nmero de interferencias
indica el nmero de clulas
presentes en la muestra

Mtodo de dispersin de luz: campo oscuro

(luz halgena)
El nmero de seales luminosas
indica el nmero de clulas
presentes en la muestra, y la
intensidad de las dispersiones o
desviaciones de los rayos
luminosos es directamente
proporcional al tamao de las
clulas

Recuento de eritrocitos

Recin nacido

A los 3 meses

De 4,2 a 5,2 millones/ml

Hombre adulto

De 4 a 5,3 millones/ml

Entre 5 y 15 aos

De 3,6 a 5 millones/ml

Entre los 3 y 5 aos

De 3,2 a 4,8 millones/ml

Con 1 ao

De 4 a 5 millones/ml

De 4,5 a 5 millones/ml

Mujer adulta

De 4,2 a 5,2 millones/ml

Parmetros normales de las clulas

sanguneas

N de hemates:

Hemoglobina:

Hombre: 4,5 - 6,2 millones / mm3

Mujer: 4,2 - 5,4 millones / mm3
Hombre: 14 - 18 gr. /dl
Mujer: 12- 16 gr. /dl

Hematocrito

Hombre: 42 - 52 %
Mujer: 37 -48 %

Parmetros normales de las clulas

sanguneas

VCM

HCM

27-3l pg

CHCM

Hombre: 80-94 fL
Mujer: 81 -99 fL

33-37gr. /dl

IDH (RDW) INDICE DE ANISOCITOSIS

11,5 - 14,5

Parmetros normales de las clulas

sanguneas

N leucocitos

Neutrfilos
Linfocitos
Monocitos
Eosinfilos
Basfilos

4 - 10,5 x 103 /mL

30-70 %
1,3 - 7,4 x 103 mL
20-50 %
0,9-5,2 x 103 / mL
2- 10%
0,16- 1,00 x 103 / mL
1- 5 %
0,00-0,20 x l03 / mL
0,0- 1,5 % 0,00-0,20 x 103 / mL

Parmetros normales de las clulas

sanguneas

N plaquetas
VPM

130 - 400 x l03 / mL

7,4- 10,4 fL

CELULAS ROJAS

Medicin directa:

Recuento de eritrocitos
VCM
Hemoglobina

Todos los parmetros de la serie roja son extrados

de estos (ej. Hto).

Mtodo: IMPEDANCIA ELCTRICA (sangre diluida

por solucin electroltica, pase a travs de orificio
con impedancia cuantificable, salto de impedancia
por bicapa lipdica, impedancia es proporcional al
tamao).

Hematocrito

Hto = Hemates x VCM/10

VCM falsamente elevados y recuento de hemates

disminuido cuando existen anticuerpos frente a
hemates y mantienen su capacidad de unin a
temperatura ambiente (ej. Aglutininas fras)
agregacin de hemates.

Antes: Hto medido directamente (centrfuga), pero

este microhematocrito incluye plasma atrapado
entre hemates (2-3%).

Hematocrito

Otros factores de error:

Eritrocitos anormales (anemia falciforme, talasemias,

ferropenia, esferocitosis): atrapamiento de plasma por la
rigidez del hemate.
Sangre completamente oxigenada tiene Hto 2% menor
que la totalmente desoxigenada.
Policitemia (Hto>55%): mayor plasma atrapado.

Hto obtenido por centrifugacin puede estar

artefactualmente elevado (hasta 6%), por lo que se
prefiere la medicin directa de la hemoglobina.

HEMOGLOBINA

Hb intensamente captada

Hematies contienen una mezcla de:

Hemoglobina,
Oxihemoglobina,
Carboxihemoglobina,
Metahemoglobina, etc.

Clulas son lisadas y las variantes de Hb son

convertidas a un compuesto estable de
cianohemoglobina para la cuantificacin por absorcin a
540 nm (menos la sulfhemoglobina).

Mayor fuente de interferencia: Quilomicronemia.

INDICES ERITROCITARIOS

VCM (principal).

Principio de Coulter: el rea transversal de una

partcula no conductiva, sumergida en una solucin
electroltica, es directamente proporcional al
aumento de impedancia elctrica provocado por la
partcula cuando pasa por un orificio estrecho.

VCM: diagnstico diferencial de anemias.

HCM, CHCM: menor valor clnico, pero si importancia,

como aviso de potenciales interferencias en la medida
del VCM y recuento de hemates.

INDICES ERITROCITARIOS

VCM, HC, CHCM: obtenidas como medias y pueden no

detectar anomalas en poblaciones mixtas de hemates
(ej. Anemias sideroblsticas, transfundidos, etc).

ADE/IDH/RDW: (Amplitud de Distribucin Eritrocitaria):

especficamente diseado para reflejar las variaciones
de tamao de los hemates Amplitud de la curva de
distribucin del volumen de los hemates.

ADE puede emplearse como indicador que permita

seleccionar que muestras, de las remitidas para estudio
automatizado, deberan ser revisados manualmente para
el estudio de la morfologa.

Distribucin de hematies segn VCM, HCM

y CHCM

LEUCOCITOS

Muestras de sangre diluidas con solucin que lisa

los hemates (cido o detergente) pero preserva la
integridad leucocitaria.

Los recuentos manuales estn sujetos a ms

variabilidad tcnica que los automatizados, debido a
factores estadsticos o tcnicos.

Recuentos leucocitarios falsamente elevados:

por crioglobulinas, criofibringeno, plaquetas
agregadas o fibrina, agregacin plaquetaria inducida
por EDTA, hemates nucleados o hemates no
lisados.

Recuento diferencial leucocitario (RDL)

Parmetros para identificar y enumerar los 3, y

luego 5, tipos morfolgicos principales en sangre
perifrica (x dispersin de luz desde diferentes
ngulos o ola conductividad elctrica).

Algoritmos complejos: poblaciones celulares

anormales (granulocitos inmaduros, linfocitos
activados).

Falsos negativos en deteccin de clulas anormales:

1-20%.

Recuento Diferencial Leucocitario (RDL)

Recuento Diferencial Leucocitario (RDL)

Recuento Diferencial Leucocitario (RDL)

PLAQUETAS

Son enumeradas electrnicamente al contar partculas de

una muestra, no lisada, de una ventana a un volumen
especificado (2-20fl).

Mayor dificultad de automatizar por pequeo tamao,

tendencia de agregarse y potencial solapamiento con las
clulas rojas ms numerosas.

Sin embargo, el conteo plaquetario, con los mtodos

automticos actuales, es fiable y preciso, incluso en el
rango trombocitopnico.

Pueden estar falsamente disminuidos si la muestra no esta

completamente anticoagulada (presencia de cogulos o
fibrina).

PLAQUETAS

Posibles interferencias:

Fragmentacin celular intensa,

Microcitosis,
Satelitismo plaquetario.

Algunos contadores actuales: tincin con Ac anti GPIIIa.

VPM: propuesto para ayuda al diagnstico diferencial de

trombocitopenias y factor de riesgo de los procesos
trombticos: Trombocitopenias de consumo.

Pero gran variabilidad, y tendencia de las plaquetas a

inflarse en un medio anticoagulante.

Distribucin de plaquetas segn VPM

EXAMEN MORFOLOGICO DE LA SANGRE

PERIFERICA

El examen microscpico de la extensin de sangre

perifrica sobre un portaobjetos ofrece informacin muy
valiosa sobre todos los elementos formes de la sangre.

Considerar dao mecnico de las clulas.

Secado, fijacin y tincin suponen exposicin al agua y

metanol.

Evaluacin de diferentes zonas del frotis.

rea ptima de estudio es examinada con 50x-100x.

IMPORTANCIA DEL FROTIS DE SANGRE

PERIFERICA
ENFERMEDAD

HALLAZGOS FROTIS SP

ANEMIA HEMOLITICA ADQUIRIDA

COMPENSADA

ESFEROCITOS, POLICROMATOFILIA,
AGLUTINACIN ERITTROCITARIA (INMUNE)

ESFEROCITOSIS HEREDITARIA

ESFEROCITOS, POLICROMATOFILIA

HEMOGLOBINA C/TALASEMIAS

CELULAS DIANA

ELIPTOCITOSIS

ELIPTOCITOS

INTOXICACIN POR PLOMO

PUNTEADO BASFILO (NO ESP)

MIELOMA MULTIPLE, MACROGLOBULINEMIA

ROULEAUX

MALARIA, BABESIOSIS

PARASITOS EN HEMATIES

COAGULOPATIA DE CONSUMO

ESQUISTOCITOS (NO ESP)

HEMOLISIS MECANICA

ESQUISTOCITOS

INFECCION SEVERA

NEUTROFILIA CON NEUTROFILOS

INMADUROS, CUERPOS DE DOHLE,
VACUOLAS EN NEUTROFILOS

MONONUCLEOSIS INFECCIOSA

LINFOCITOS ATPICOS

LEUCEMIA AGUDA (RECAIDA TEMPRANA)

BLASTOS

CBC NORMAL

CBC ANEMIA FERROPENICA

CBC ANEMIA MEGALOBLASTICA

CBC TRANFUSION

ANALIZADOR DE HEMATOLOGIA
ADVIA 120
SIEMENS
HOSPITAL III EMERGENCIAS GRAU

ANALIZADOR DE HEMATOLOGIA
ADVIA 120

OPTICA
RBC/BASO/
RET

OPTICA
PEROX

UFC

DIFF TIMEPAC

MUESTREO
MANUAL

CBC TIMEPAC

TAMAO CELULAS
SANGUINEAS
Linfocitos: 50 100 fL
Monocitos: 100 150 fL
Granulocitos:150 380
fL
Eritrocitos: 60 110 fL

Plaquetas: 2 20 fL

HISTOGRAMA GLOBULOS ROJOS

RBC ( 3.80 5.80 )

HGB ( 11.0 16.5 )
HCT ( 35.0 50.0 )
MCV ( 80 97 )
MCH ( 26.5 33.5 )
MCHC ( 31.5 35.0 )
RDW ( 10.0 15.0 )

HISTOGRAMA G. ROJOS

ADE: Ancho Distribucin

Eritrocitaria
Heterognea: A. Adquirida
Homognea: A. Gentica

VCM: Tamao
Macroctico
Normoctico
Microctico

HCM, CHCM: Cantidad

Normocrmica
Hipocrmica

RBC, HTO, Hb:

Poliglobulia
Normalidad
Anemia

SUBPOBLACIONES WBC
LINFOCITOS:
Variantes de Linfocitos y Linfocitos
maduros
CEL GRANDES
MONONUCLEARES: Monocitos,
Lnea Mieloide, Promonocitos,
Prolinfocitos
GRANULOCITOS: Todos los PMN
ms cayados o segmentados
Grfica Normal segn poblacin
predominante acorde a la edad:
NIOS ( LINFOCITOS )
ADULTOS ( PMN )

LINFOCITOS
GRANULOCITOS

CELULAS
MONONUCLEARES
GRANDES

HISTOGRAMAS
PLAQUETAS- PLT
VPM

VALORES DERIVADOS
VPM: 2-20 fL

ANISOCITOSIS
PLAQUETARIA: clulas
grandes y/o pequeas
PDW

http://www.scielo.br/pdf/spmj/v121n1/1
6129.pdf

U
V

Size (low angle scatter)

T
N

120L

41g/dL

IG

RDW

BLAST

Lobularity/Nuclear Density
(high angle scatter)
41g/Dl

HGB/RBC
HGB/RBCXMCV
MCVXCHCM

A
N
O
P
Q
R
S

M A C R O
H Y P O

RBCXMCV

120L

E
MCV
60L

M I C R
H CHCM

1
2
3
4

H Y P E R

A
B
C
D
E
F
G
H
I
J
K
L
M

4
3

RBC
Ghost

RBC
Frag

Mtodos RBC/PLT/RTC
Detector Escaneo Angulo Alto
Mide: Densidad/concHGB / Index Refractive

Laser

Angulo Cero :
Retic Absorption/Staining

Detector Escaneo Angulo Bajo

Mide: Tamao/Volumen

ADVIA 120 HEMOGLOBINA

El reactivo ADVIA 120 HGB contiene:

Cmara de reaccin de HGB

- Cianuro de potasio, 20 mmol/L

- Oxido de Dimethilaurilamina, 2.0%
Reaccin:
Lmpara
- Los eritrocitos son hemolizados para liberar la
hemoglobina.
- El grupo Hem se oxida de su forma ferrosa a
frrica
y se combina con el cianuro para formar:
HEMOGLOBINA+ reactivo HGB
HB.

META HEMOGLOBINA

UFC

Filtro +Fotodiodo

CIANOMETA

ADVIA 120
ERITROCITOS
Reaccin:
- El reactivo ADVIA 120 RBC/PLT contiene Sulfato de Dodecilsdico
(SDS) y glutaraldehdo que causa que los eritrocitos y las plaquetas se
hagan esfricos.
As la forma se elimina como un factor de variacin.
- Los eritrocitos y las plaquetas se fijan.

GLOBULOS ROJOS

Angulo Bajo / Volumen (fL)

Macrocrocytic

120L

60L

Microcrocytic
Angulo Alto / Concentracion
Hgb

28 gm/dL

41 gm/dL

CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA

MICROCITOSIS

MACROCITOSIS

HIPOCROMIA

HIPERCROMIA

ANISOCITOSIS
Se relaciona con el VCM: grande, mediano, pequeo

Aniso

HCVAR

ANISOCITOSIS

ANEMIA DIMORFA HETEROGENEA

LEUCOCITOS (Perox)
Reaccin:
- El Surfactante Sulfato dodecyl sdico y el Brij-35 en combinacin con
el calor, lisa las clulas rojas.
El formaldedo fija las clulas blancas. El medio hipertnico produce
crenacin y contraccin de las clulas blancas, lo cual incrementa el
ndice de refraccin y permite la mejor identificacin de los linfocitos
sobre el ruido.
Detector de absorcin

Filtro
Lmpara de tungsteno

Corriente Analtica

Detector de dispersin

Separador de luz
Campo
Obscuro

Citograma Perox
Clulas
Grandes
Sin teir

Monocitos

Neutrofilos

Linfocitos y
Basofilos

Eosinofilos

NRBC

Acumulos
Plaquetas
Ruido

Scatter / Volume

Scatter / Volume

METODO PEROXIDASA

Absorption / Staining

Absorption / Staining

Citograma Baso
Baso
Saturacion
Basofilos
Baso
Sospechosos

MN

PMN
Blastos

Ruido

Low Angle / Volume

Low Angle / Volume

METODO BASOLOBULARIDAD

High Angle / Density/Lobularity

High Angle / Density/Lobularity

BASOLOBULARIDAD
Indice de Lobularidad

1.- Mononucleares
2.- Polimorfonucleares
3- Valle
El ndice de lobularidad (LI)
proporciona una indicacin del grado
de maduracin de la curva
leucocitaria
Relacin 2:1

BASOLOBULARIDAD
Desviacin a la Izquierda

Citogramas: paciente con Bronquitis.

La alarma de LS encendi debido a que el ndice de lobularidad fue
menor a 1.9%
En el conteo manual se encontraron 15 bandas

BASOLOBULARIDAD
Granulocitos Inmaduros

1 Neutrfilos

2 Eosinfilos

3 Polimorfonucleares

Paciente con Leucemia mieloblstica aguda.

La alarma de GI apareci porque [(%NEUT+%EOS)-%PMN] fue mayor de 5.0%.

ADVIA 120
Mapa de plaquetas 2D
..
Plaquetas Gigantes

Microcitos.

RBC Fantasmas

Plaquetas

Detritus
Fragmentos de RBCs

ndice de Refraccin

RETICULOCITOS

Absorption

BENEFICIOS
RETICULOCITOS
La ferritina es una evaluacin indirecta de la
deficiencia funcional de hierro
Monitorear el porcentaje de clulas hipocrmicas
permite un monitoreo directo
El contenido de hemoglobina (CHr) de los reticulocitos
ha demostrado ser mas sensible que el porcentaje de
hipocromia

Despus de 4 das

El uso de CHr permite un monitoreo ms

eficiente, que nos da la optimizacin del
uso de EPO y tratamientos con hierro, lo
que como consecuencia tiene un mejor
manejo del paciente anmico

Inicio

Despus de 2 semanas

Despus de 1 mes

GRACIAS POR SU ATENCION