Sunteți pe pagina 1din 182

TOXICITATEA MEDIILOR

AGRESIVE I SUBSTANE
ANTIDOT
CAPITOLUL 1

NOIUNI I CONCEPTE
FUNDAMENTALE N
TOXICOLOGIE
Conf. univ. dr. ing. Paul Ctlin BALAURE
An universitar 2014 - 2015

Obiectul de studiu al toxicologiei

Toxicologia studiaz toate aspectele legate de modul n care


substanele chimice naturale sau cele produse de om provoac
efecte adverse nedorite, duntoare asupra sistemelor vii (tiina
otrvurilor i a toxinelor). Sunt studiate fazele evoluiei unui toxic
n organism, mecanismele aciunii toxice, simptomele i
tratamentele otrvirii, metodele de determinare a substanelor toxice
ntr-un mediu, n aer, ap, sol sau n alimente, sunt evaluate riscurile
i sunt elaborate acte normative cu scopul reducerii efectelor nocive
ale acestor substane asupra sntii oamenilor i a mediului
nconjurtor.
Toxicul este orice substan chimic care ptruns n organism
pe diferite ci altereaz structural i funcional materia vie la
diferitele ei nivele de organizare, modificrile manifestndu-se din
punct de vedere clinic prin apariia unei stri patologice sau chiar a
morii.

Obiectul de studiu al toxicologiei

Efecte adverse - acele efecte produse de toxic care


pericliteaz fie supravieiurea, fie funcionarea normal a unui
individ.
Toxicitate - termenul se refer la msura n care o
substan chimic este otrvitoare sau poate produce vtmri
organismului. Termenul poate fi folosit pentru a descrie
efectul substanei asupra ntregului organism sau asupra unei
substructuri a organismului, precum o celul (citotoxicitate)
sau un organ, de exemplu ficatul (hepatotoxicitate). Termenul
include i descriea condiiilor necesare pentru apariia
efectelor adverse.
Intoxicaia este starea patologic reversibil sau nu
provocat de ptrunderea unui toxic n organism i reprezint
rspunsul organismului la substana toxic.

Obiectul de studiu al toxicologiei


Toxicologia este o tiin interdisciplinar necesitnd
cunotiine de:
- chimie (chimie anorganic, chimie organic, chimie
fizic, chimie analitic, chimia mediului)
- biochimie
- biologie celular i molecular
- fiziologie
- patologie
- ecologie
- statistic
Exist mai multe ramuri ale toxicologiei. Dup
Hodgson i Levi (1997) [1], principalele domenii de
interes ale acestei tiine sunt:

Obiectul de studiu al toxicologiei


1. Mecanismele de aciune ale toxicelor:
Toxicologia biochimic: studiaz efectele toxicelor la nivel

molecular, enzimele ce metabolizeaz xenobioticele, generarea


intermediarilor reactivi, interaciunea cu componenii moleculari ai
materiei vii, aspecte de biologie molecular.
Carcinogeneza: studiaz evenimentele chimice i biochimice care
conduc la apariia cancerului.
Teratogeneza: studiaz evenimentele chimice i biochimice care
conduc la apariia anomaliilor fetale prin afectarea proceselelor de
dezvoltare intrauterin .
Mutageneza: studiaz afectarea materialului genetic de ctre
toxice.
Toxicitatea la nivelul organelor: studiul efectelor toxicelor asupra
diferitelor organe.
Toxicologia nutriional: studiaz efectele dietei asupra toxicitii.
Toxicologia comportamental: studiaz efectele toxicelor asupra
comportamentului uman i animal.

Obiectul de studiu al toxicologiei


2. Msurarea substanelor toxice i a toxicitii:
analitic: se ocup cu determinarea calitativ i
cantitativ a toxicelor i a metaboliilor substanelor toxice n produse
biologice i n probe de mediu.
Patologia toxicologic: studiaz modificrile morfologice produse de
toxice asupra diferitelor subsisteme ale unui organism: organe,
esuturi, celule, structuri subcelulare.
Evaluarea toxicologic: efectuarea testelor toxicologice n vederea
estimrii efectelor toxice asupra unor organisme vii (animale de
laborator).
Studii structur-activitate (QSAR din lb. Englez Quantitative
Structure Activity Relationship): urmresc stabilirea unor relaii
cantitative de corelare a proprietilor fizico-chimice ale substanelor
toxice cu toxicitatea acestora n special n vederea realizrii unor
predicii cu privire la toxicitatea unor substane noi, netestate nc.
Toxicologia

Obiectul de studiu al toxicologiei


3. Toxicologia aplicat:
Toxicologia clinic: se ocup cu diagnosticarea i tratamentul

intoxiciilor la om.
Toxicologia veterinar: se ocup cu diagnosticarea i tratamentul
intoxiciilor la animale.
Toxicologia medico-legal: se ocup cu diagnosticarea intoxicaiilor
letale prin studiul modificrilor anatomopatologice produse de toxic i
prin detectarea otrvurilor n probe biologice prelevate de la
intoxicai.
Ecotoxicologia: studiaz mecanismele de contaminare a mediului
nconjurtor cu poluani, transformrile poluanilor n biosfer i
efectele lor nefaste asupra ecosistemelor.
Toxicologia industrial: studiaz etiologia i patogenia intoxicaiilor
cu toxice prezente ntr-un mediu de munc industrial, evaluarea
riscului toxic, stabilirea unor limite maxime de expunere admise i a
unor reglementri de siguran a muncii.

Obiectul de studiu al toxicologiei


4. Toxicologia unor substane chimice produse n vederea

comercializrii i utilizrii lor n diferite scopuri:

Substane utilizate n agricultur: insecticide, ierbicide, fungicide,

rodenticide.
Medicamente
Aditivi alimentari
Substane chimice industriale i substane chimice casnice
Produii de combustie , n special hidrocarburi aromatice
policiclice (PAH), ce sunt asociai cu arderea incomplet a unor
materiale organice ca lemnul, crbunii, uleiurile, tutunul.
Unii produi naturali tot mai des utilizai ca remedii naturiste
sau n suplimentele alimentare
Drogurile

Obiectul de studiu al toxicologiei


5. Toxicologia reglementar se ocup cu dou
aspecte foarte importante:
Evaluarea riscului toxicologic identificarea
riscurilor poteniale i estimarea raportului
beneficiu/risc n vederea adoptrii unor norme
legislative.
Aspectele legale se refer la elaborarea de legi
i norme care s maximizeze gradul de siguran
i s minimizeze efectele substanelor toxice
asupra sntii oamenilor i a mediului
nconjurtor.

Factori ce influeneaz toxicitatea


Toxicitatea unei substane depinde de o varietate de factori, cum ar fi:

a)

Doza

b)

Durata expunerii, numrul de expuneri i frecvena acestora

c)

Calea de ptrundere a toxicului n organism sau calea de administrare (substana


este aplicat pe piele, inhalat, ingerat, injectat)

d)

Structura chimic a substanei (inclusiv forma geometric tridimensional,


stereoizomerii i chiar enantiomerii, ca n cazul talidomidei ce a fost administrat
sub form de racemat ca medicament pentru ameliorarea strilor de grea la
gravide, dar s-a dovedit ulterior c determin apariia malformaiilor congenitale)
i poprietile fizico-chimice ale substanei (stare de agregare, solubilitate,
constanta de aciditate, coeficient de partiie etc).

S-(-)-talidomida
teratogenic

R-(+)-talidomida
amelioreaz
strile de grea
la gravide

e)

Mrimea particulelor substanei

f)

Factori individuali specifici organismului (specia, rasa, sexul, vrsta, factori


genetici, starea general de sntate a organismului)

g)

Factori de mediu (prezena altor substane n mediu, temperatura, radiaiile


ionizante, lumina, umiditatea, altitudinea)

Izomeria compuilor organici

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
Toxicitatea este, n primul rnd, un concept cantitativ.

Paracelsus (1493-1541) este cel care a pus bazele


tiinifice pentru dezvoltarea ulterioar a toxicologiei
moderne.
Afirmaia sa: Toate substanele sunt otrvuri; nu
exist nici una care s nu fie otrav. Doza
potrivit difereniaz o otrav de un remediu.,
sintetizeaz principiul de baz al toxicologiei moderne,
acela al relaiei doz-efect toxic sau doz- rspuns
toxic. Rspunsul este o msur a intensitii efectului
produs de toxic. Pe conceptul relaiei doz-efect se
ntemeiaz i alte noiuni importante specifice
toxicologiei, dar i farmacologiei moderne, cum ar fi
conceptul de indice terapeutic.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Cele mai inofensive, sau chiar indispensabile vieii dintre
substane, ca de ex., apa, prezint efecte toxice cnd sunt
administrate n doze mari sau foarte mari, iar, pe de alt parte,
chiar i cele mai toxice substane cunoscute, apar ca fiind
inofensive sau chiar benefice organismului n doze extrem de
mici. Ferul, cuprul, magneziul, zincul, cobaltul manganul i
nichelul sunt necesare organismului uman, fiind prezente drept
cofactori n anumite metaloproteine cu roluri eseniale n
organism. De aceea este recomandat un anumit aport din fiecare
dintre aceste elemente metalice n dieta zilnic pentru a nu se
ajunge la o deficien a acestora n organism i, drept
consecin, la apariia anumitor boli. Pe de alt parte,
administrate n cantiti prea mari, aceste elemente produc
efecte toxice asupra organismului. Prin urmare, relaia dozefect sau doz-rspuns este esenial n toxicologie.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
este cantitatea de substan care
ptruns n organism produce ntr-un anumit
interval de timp (de ex., 24 de ore) un anumit
efect. De obicei, cantitatea absolut de substan
toxic nu este relevant pentru apariia unui
anumit efect toxic, acesta din urm corelndu-se
mai degrab cu concentraia de toxic n
organism. Ca atare, cel mai adesea doza nu se
exprim n uniti absolute de mas (mg), ci n
uniti relative (mg/kg corp).
Doza

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Totui, nu se poate presupune c ntrega doz administrat este
absorbit de organism, i de aceea o estimare mult mai precis a expunerii la
substana toxic o reprezint concentraia de toxic n plasma sangvin. Aceast
concentraie poate fi corelat cu concentraia de substan toxic n esuturi i
organe i, n consecin, este un biomarker al expunerii. n unele cazuri,
responabil pentru aciunea toxic este un metabolit al substanei administrate,
caz n care ne intereseaz concentraia n snge a acestui metabolit. Similar,
pentru a putea msura rspunsul organismului la toxic, suntem interesai n
identificarea unor biomarkeri ai rspunsului. Acetia sunt de regul modificri
ale unor parametri biochimici, funcionali sau histologici survenite ca urmare a
expunerii la substana toxic. Menionm cteva exemple din fiecare categorie.
Apariia n snge a anumitor enzime ca urmare a vtmarii unui organ,
modificarea compoziiei urinei ca urmare a apariiei unor disfuncionaliti
metabolice sau modificarea activitii enzimatice reprezint exemple de
modificri biochimice. Afectarea capacitii respiratorii, a reflexelor sau a
diurezei sunt tot attea exemple de modificri ale unor funcii fiziologice.
Evidenierea unor modificri patologice la nivelul esuturilor i celulelor sunt
exemple de biomarkeri histologici ai rspunsului.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)


Rspunsurile observate pot fi de dou tipuri: cuantale i
gradate.
Rspunsurile cuantale sunt de genul totul sau nimic. Ex.:
supravieuirea sau moartea, apariia sau nu a unei tumori. Ele se
msoar raportnd numrul de indivizi care rspund la toxic la
numrul total de indivizi dintr-un grup care au fost expui
toxicului n mod egal. n cazul rspunsurilor cuantale mrirea
dozei duce la o cretere a numrului de indivizi care rspund i
nu la o intensificare a efectului toxicului.
Rspunsurile gradate sunt acele rspunsuri care pot fi
msurate pe o scal continu, de la un rspuns minim la unul
maxim. Ex: modificarea tensiunii arteriale, modificarea ritmului
cardiac, modificarea ritmului respirator, modificarea activitii
unei anumite enzime, modificarea nivelului unui hormon etc.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Pentru determinarea toxicicitii unei substane se
poate proceda n mai multe moduri.

1. Epidemiologic, prin observarea unei populaii


de organisme (plante, animale sau oameni) expuse la
un toxic.
2. In vivo, prin administrea toxicului unei
populaii de plante sau animale, n condiii bine
controlate, i nregistrarea efectelor.
3. In vitro, prin expunerea celulelor sau a unor
fracii subcelulare ale organismelor la toxicul testat.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n 1927, farmacologul britanic J. W. Trevan a
conceput un test in vivo pentru a compara toxicitatea
diferitelor medicamente, introducnd noiunea de
doz medie letal 50 (DL50) [2]. n descrierea
cantitativ a relaiei doz-rspuns, Trevan a ales un
rspuns de tip cuantal, moartea animalelor de
laborator testate, deoarece aceasta este cel mai uor
de msurat rspuns toxic, evitndu-se astfel
posibilele ambiguiti i erori de msurare la
extremele scalei n cazul rspunsurilor gradate. n
plus, letalitatea permite s fie comparate, din punct
de vedere al toxicitii, substane ale cror
mecanisme de aciune toxic pot fi foarte diferite.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
doz-efect se bazeaz pe
urmtoarele ipoteze:
1. Rspunsul se datoreaz substanei chimice
administrate.
2. Exist o structur molecular int sau
molecul receptor cu care substana toxic
interacioneaz pentru a produce rspunsul.
3. Rspunsul depinde de concentraia
substanei toxice la locul su de aciune.
4. Concentraia compusului toxic la locul de
aciune este corelat cu doza administrat.
Conceptul

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

2. Legarea toxicului de reptorul su molecular.

Efectul toxic apare n urma legrii substanei toxice de o


molecul int din organism sau un receptor molecular fa de care
aceasta are afinitate. Legarea toxicului de inta sa molecular se
poate face fie prin legturi covalente, fie prin legturi
intermoleculare necovalente (legturi de hidrogen, atracii
electrostatice, legturi van der Waals, interaciuni hidrofobe).
intele moleculare ale substanelor toxice sunt n general proteinele
(cu rol structural sau funcional), coenzimele, lipidele i acizii
nucleici. Deoarece aceste molecule au roluri eseniale pentru buna
funcionare a celulei vii, modificarea acestora n urma interaciunii
cu substana toxic are ca rezultat afectarea celulei din punct de
vedere structural i/sau funcional. Ca urmare a dialogului complex
ntre celule i a funcionrii lor corelate i integrate i, eventual, ca
urmare a absorbiei toxicului n arborele circulator i ulterior a
distribuiei sale ctre toate esuturile i organele, efectele pot fi
resimite la nivelul ntregului organism (efect toxic sistemic).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

n cazul unei asocieri necovalente, toxicul i inta sa molecular


trebuie s fie complementare att din punct de vedere geometric (steric, ca
form i dimensiuni modelul lact-cheie) ct i din punct de vedere
interacional, n special complementaritatea hrilor potenialului
electrostatic molecular al celor dou suprafee care interacioneaz.

E4
E3

E1

E2

E5

E4
E6
Toxic

Molecul
int
(receptor
molecular)

Receptor Rspuns la Rspuns la Rspuns la Rspuns la


molecular
nivel
nivel
nivelul
nivelul
alterat
molecular celular unui organ ntregului
organism

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
3. Cum depinde rspunsul de concentraia
toxicului la locul aciunii sale.
Legarea toxicului de receptorul su
molecular poate fi reversibil sau ireversibil. n
cazul unei legri reversibile se poate scrie
echilibrul:
k
R+T
RT, caracterizat de constanta de
k
disociere a complexului toxic-receptor, KT,

R T k1 ; R = receptor; T = toxic; RT = complex toxic-receptor;


KT

, k = constantele de vitez pentru disocierea, respectiv


RT k2 kformarea
complexului toxic-receptor
2

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)


Dac se noteaz cu [Rt] concentraia total de receptori, atunci se
poate scrie:

Rt R RT
Rt T RT T K ;
T
RT
RT KT T Rt T ;
RT T
Rt KT T

Considernd c efectul toxic, E, este proporional cu concentraia


complexului toxic-receptor i c efectul maxim, Emax, se obine atunci
cnd toi receptorii moleculari sunt ocupai, adic atunci cnd [Rt] = [RT],
se poate scrie:

E k3 RT

Emax k3 Rt ;
E Emax

RT sau E E T
R
K T
max

(1)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cnd [T] = 0, E = 0
Cnd E = Emax/2, KT = [T], deci constanta de

disociere a complexului toxic-receptor reprezint


concentraia toxicului la care efectul su este egal
cu jumtate din efectul maxim.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)


n funcie de caracterul reversibil sau ireversibil al interaciunii
toxic-receptor, rspunsurile obinute pot s difere foarte mult. n
cazul interaciunilor reversibile, la concentraii mici de toxic,
ocuparea receptorilor poate fi neglijabil i, ca atare, este posibil ca
aparent s nu existe niciun rspuns, ceea ce duce la apariia unui prag
al dozei sub care nu exist niciun efect observabil. De asemenea,
rspunsul poate fi unul de foarte scurt durat, deoarece concentraia
ce produce efecte este posibil s fie atins doar tranzitoriu. Este
posibil ca doze mici de toxic, chiar n cazul unor expuneri repetate
sau continue, s nu produc efecte msurabile.
n cazul unei interaciuni ireversibile toxic-receptor, teoretic, o
singur interaciune este suficient pentru apariia efectului. Expuneri
continue sau repetate ntr-un anumit interval de timp pot avea un
efect cumulativ care depinde de viteza cu care organismul poate
resintetiza receptorul R, de exemplu o enzim, n acel interval de
timp.
Relaia (1) exprim dependena efectului toxic, E, de concentraia
toxicului, [T]. ntr-o reprezentare grafic normal (rspuns n funcie
de doz) a ecuaiei (1), curba obinut are urmtoarea alur:

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

De obicei, se apeleaz la reprezentarea rspunsului n


funcie de logaritmul dozei, deoarece aceasta se preteaz mult
mai bine la liniarizare, aa cum se va vedea mai departe. n
acest mod de reprezentare curba doz-rspuns ia forma unei
sigmoide.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

4.
Concentraia toxicului la locul su de aciune depinde
de doza de toxic administrat. Doza medie letal, DL50.
Doza medie letal 50, DL50, este doza care, fiind
administrat unei populaii de animale de laborator, se
estimeaz c va provoca moartea a 50% dintre indivizii
respectivei populaii, ntr-un anumit interval de timp.
Observm de la nceput c DL50 nu este o constant biologic,
ci o mrime virtual, determinat statistic. n orice populaie
testat, vor exista indivizi care vor muri n urma administrrii
unor doze de toxic mai mici dect DL50, precum i indivizi
care vor supravieui administrrii unor doze mai mari dect
DL50, aceasta fiind o consecin a variabilitii biologice.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
ntr-un experiment clasic de determinare a DL50 se
procedeaz n felul urmtor: un eantion de animalele de
laborator, cel mai adesea oareci sau obolani, pe care se
testeaz toxicitatea unui compus, este mprit n mai multe
grupe, fiecare grup fiind format dintr-un numr de indivizi
(de preferin acelai) ce au acelai acelai sex i aproximativ
aceeai greutate i vrst. Tuturor animalelor din fiecare
grup li se administreaz pe aceeai cale (de ex.
intraperitoneal) aceeai doz, progresiv cresctoare de la o
grup la alta, de compus testat i se nregistreaz numrul de
decese nregistrate ntr-un anumit interval de timp (de ex. 1h
n cazul unei administrri intraperitoneale la oareci) din
fiecare grup.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Datele experimentale obinute pot fi reprezenate grafic n mai multe moduri [3]. Figura din dreapta sus este
o histogram reprezentnd distribuia frecvenei deceselor, exprimat procentual, pe grupele de animale
supuse testului, mai exact pe intervale (numite clase) ale dozelor de compus testat administrate. Histograma
este alctuit din n dreptunghiuri cu baze egale care reprezint clasele. nalimile dreptunghiurilor
reprezint frecvenele mortalitii fiind egale cu procentul de decese din fiecare grup (procentul de decese
la o anumit doz administrat) minus procentul de decese din grupa imediat precedent (procentul de
decese la doza imediat inferioar). Dac bazele dreptunghiurilor se ngusteaz foarte mult (la limit
tinznd ctre zero), respectiv dac numrul de dreptunghiuri (de clase) crete foarte mult (la limit tinznd
ctre infinit), se obine curba desenat peste histogram. Dac mrimea eantionului este suficient de mare,
distribuia frecvenei deceselor pe intervale de doze administrate este o distribuie normal (sau Gauss),
n form de clopot. Exist un numr mic de indivizi sensibili care mor la doze mici de toxic, un numr mic

de indivizi rezisteni care mor doar la doze mari de toxic, iar cei mai muli indivizi mor la o valoare medie a
dozei. Valoarea abscisei pentru care curba atinge maximul corespunde valorii DL50. Figura din dreapta
mijloc reprezint aceleai date, dar este o reprezentare a mortalitii cumulate n funcie de doza
administrat i are alura unei sigmoide. Diferena dintre reprezentarea prin histogram i cea prin sigmoid
este urmtoarea. Dac n grupa creia i s-a administrat doza de 50 mg/kg corp mor 30% dintre animale, iar
n grupa creia i-au fost administrate 100 mg/kg corp mor 50% dintre animale, nseamn c n intervalul de
doze 50<D100 mg/kg corp mor 20% dintre animale. Acesta este modul de reprezentare a datelor
din histogram. n schimb, curba sigmoid reprezint mortalitatea cumulat, adic unei doze de
50 mg/kg corp i corespunde o mortalitate de 30%, iar unei doze de 100 mg/kg corp, o mortalitate
de 50%. Doza letal 50, DL50, poate fi determinat folosind curba sigmoid, dar pentru acurateea
determinrii se prefer liniarizarea curbei sigmoide prin transformarea procentelor de
mortalitate cumulat n uniti probit (figura din dreapta jos). n toate cele trei moduri diferite de prezentare
a datelor experimentale, axa absciselor este gradat pe o scal logaritmic.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

La dimensiuni mari ale eantionului, distribuia frecvenei mortalitii pe


intervale de doze administrate este o distribuie normal.
n teoria probabilitilor, o distribuie normal (Gauss) a unei variabile
aleatoare continue (aparinnd mulimii numerelor reale), x, este descris de
funcia:
2
x

1
f x
e 2
2
2

(2)

caracterizat de dou mrimi,


valoarea medie sau valoarea ateptat a distribuiei i
- deviaia standard care este o msur a gradului de mprtiere a valorilor n
jurul valorii medii.
Relaii de calcul pentru mrimile i .
Valoarea ateptat a distribuiei este media aritmetic a valorilor pe care le ia
variabila aleatoare, x. Se noteaz cu cnd se refer la media aritmetic a
valorilor variabilei aleatoare x calculat pentru ntrega
N
1

xi (3) populaie i, respectiv, cu x atunci cnd se refer la


media aritmetica a valorilor variabilei aleatoare
N i 1
dintr-un eantion extras din respectiva populaie; N
dimensiunea populaiei sau, respectiv, a eantionului

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

Deviaia standard, , pentru ntrega populaie se


calculeaz cu relaia (4), iar pentru un eantion, deviaia
standard se noteaz cu s i se calculeaz cu relaia (5).

x
N

i 1

x x
N

(4)

i 1

N 1

(5)

Deviaia standard este rdcina ptrat a varianei, deci:

variana populaiei = 2 (6)


variana eantionului = s2 (7)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Dac setul de date este prezentat sub forma unei serii de


distribuie cu grupare de date, cum este cazul distribuiei frecvenei
mortalitii pe grupe de doze, formulele pentru calculul valorii
medii a distribuiei i a deviaiei standard (deci, implicit, i a
varianei) se modific [4]. Astfel, valoarea medie a distribuiei se
calculeaz cu formula (8) n care:
- xi reprezint marca clasei i, calculat ca media aritmetic
dintre limita inferioar i cea superioar a clasei (mijlocul
intrevalului i);
- fi este frecvena corespunztoare clasei i, adic numrul de
valori din distribuia de date care se ncadereaz n intervalul i;
- nsumarea se face pe numrul de clase i, evident, este egal
cu numrul total de valori din distribuia de date respectiv, ceea ce
se exprim matematic prin relaia (9).
f x
m

i 1

f
i 1

N fi
i 1

(8)

(9)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Deviaia standard se calculeaz cu formula (10).

x
m

i 1

x fi

N 1

(10)

n continuare vom da un exemplu numeric pentru a


clarifica modul n care se folosesc aceste formule.
Un eantion compus din 30 de brbai prezint
urmtoarea distribuie a nlimii indivizilor din eantion.
Clasa (intervalul) de nlimi (cm) Marca clasei (xi)

Nr. de indivizi (fi) din clas

158-163

160,5

164-169

166,5

170-175

172,5

11

176-181

178,5

182-187

184,5

188-193

190,5

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Calculnd media nlimilor brbailor din eantion cu
relaia (8), obinem:
x

160,5 3 166,5 5 172,5 11 178,5 2 184,5 6 190,5 3 5247

174,9 cm
3 5 11 2 6 3
30

Reinem c, ntruct nu sunt cunoscute nlimile indivizilor


din eantion, ci doar numrul de indivizi avnd nlimile
cuprinse ntr-un anumit interval de nlimi, rezultatul obinut
este doar o estimare a valorii reale a mediei de nalime a
eantionului respectiv.
Similar, folosind formula (10), se poate estima deviaia
standard a distribuiei nalimii indivizilor din eantion.
160,5 174,9

3 166,5 174,9 5 172,5 174,9 11 178,5 174,9 2 184,5 174,9 6 190,5 174,9 3
9 cm
30 1
2

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

n cazul unei distribuii normale, aproape toate


valorile (99,7%) pe care le ia variabila aleatoare se afl n
intervalul a trei deviaii standard fa de valoarea medie. Aria
total de sub curb reprezint 100%.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
De ex., dac nlimea medie a populaiei adulte
dintr-o ar este 178 cm, iar deviaia standard este de 8
cm, rezult c, presupunnd o distribuie normal a
nlimilor, 68% din populaie va avea nlimi cuprinse
n intervalul (170-186) cm i c nlimea a peste 95%
dintre oameni va fi cuprins n intervalul (162-194) cm
(adic dou deviaii standard de o parte i de alta a
mediei). Trei deviaii standard (154-202) cm vor
cuprinde nlimile ale aproape ntregii populaii
(99,73%). Cu ct valoarea deviaiei standard este mai
mare cu att valorile variabilei aleatorii prezint o
mprtiere mai mare fa de medie, sunt distribuite pe
un interval mai larg. Cu ct deviaia standard este mai
mic, cu att distribuia este mai ngust. Dac deviaia
standard ar fi zero, toi indivizii populaiei ar avea exact
aceeai nlime i anume 178 cm .

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)

Normarea
distribuiei
se
realizeaz
reprezennd grafic pe axa absciselor valorile
xx
s

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)


n cazul DL50, aceasta reprezint chiar valoarea medie a distribuiei frecvenei
mortalitii pe intervale de doze administrate. Prin urmare, DL50 minus o deviaie standard
reprezint DL15,9 (doza care omoar 16% dintre indivizii populaiei testate), iar DL50 plus o
deviaie standard reprezint DL84,1 (doza care omoar 84% dintre indivizii populaiei
testate). Pe curba sigmoid, n intervalul DL16 DL84 (o deviaie standard de o parte i de
alta a DL50) variaia mortalitii cumulate cu doza administrat este aproape liniar. Prin
intermediul deviaiei
standard, mortalitatea
cumulat (exprimat
n procente) poate fi
transformat n uniti
probit (de la
probability units n
limba englez). Pentru
a evita lucrul cu valori
negative, s-a convenit s
se atribuie dozei letale
50 probitul 5. Apoi, se
adaug, respectiv se
scade cte o unitate de
probit, pentru fiecare
deviaie standard situat la
dreapta, respectiv la stnga
dozei letale medii 50.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Se poate realiza astfel un tabel [5-8] care


coreleaz, prin intermediul deviaiei standard,
procentul de indivizi dintr-o populaie care
rspund la o anumit doz de toxic administrat,
cu unitile de probit.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)
De ex., dac o doz administrat produce
moartea a 47% dintre indivizii unei populaii
(DL47), acelei doze i corespunde o valoare probit
de 4,92.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Dac n locul mortalitii cumulate procentuale se
reprezint grafic, n funcie de logaritmul dozei
administrate, unitile probit, se obine o linie dreapt n
locul curbei sigmoide. Deoarece, frecvena mortalitii
prezint o distribuie normal n raport cu logaritmul
dozelor, iar unitile probit sunt corelate cu procentul
cumulat al deceselor tocmai prin intermediul aceleiai
distribuii normale, este normal ca unitile probit s
prezinte o variaie liniar n raport cu logaritmul dozei.
De ex.,
x k log y ; o relaie neliniar

z k ' log y ; o alt relaie neliniar

dar,
x k

z k'
k
x z
k'

; o relaie liniar

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Reprezentarea grafic probit n funcie de logaritmul dozei este deci o dreapt de


ecuaie:
y unitati probit a b x ; unde x lg Doz din care se poate determina DL50, ca:
DL50 10

5 a
b

(11)

n relaia de mai sus, a este ordonata la origine, iar b este panta dreptei. Aceste valori
pot fi uor determinate dac se reprezint datele experimentale cu ajutorul unui
program, ca de ex. Excel.
Doza medie letal 50 este deci o mrime determinat statistic. Mrimile statistice
caracterizeaz eantioane i sunt estimri ale parametrilor unei populaii. De ex., dac
se determin DL50 pe un eantion de animale de laborator, i se repet experimentul pe
un alt eantion, este foarte probabil s se obin valori diferite, din cauza variabilitii
biologice a indivizilor din cele dou eantioane. Se poate obine astfel o distribuie a
valorilor DL50 a eantioanelor. Dac ne imaginm c putem obine toate eantioanele
posibile, de o anumit mrime, dintr-o populaie dat, distribuia valorilor DL50 ce
caracterizeaz aceste eantioane va fi o distribuie normal, iar valoarea medie a
distribuiei valorilor DL50 ale tuturor eantioanelor va fi valoarea DL50 pentru ntrega
populaie, un rezultat cunoscut n statistic sub numele de teorema limitei centrale. De
obicei, se utilizeaz un singur eantion [3], se determin DL50 pentru acel eantion i se
estimeaz valoarea DL50 pentru ntreaga populaie cu un anumit nivel de ncredere.
Valoarea DL50 pentru ntreaga populaie va fi cuprins ntr-un interval de ncredere
avnd o limit inferioar i una superioar, de tipul urmtor:
DL50 esantion t x , DL50 esantion t x sau DL50 populatie DL50 esantion t x (12)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)

Relaia (12) este aplicarea relaiei statistice


generale de definire a intervalului de estimare a
valorii unui anumit parametru, n cazul nostru DL50,
al unei populaii. n aceast relaie, x reprezint
deviaia standard a distribuiei valorii medii a
eantioanelor, numit i eroarea standard a mediei, i
se calculeaz fie cu relaia (13), fie cu relaia (14), n
funcie de faptul dac se cunoate deviaia standard a
ntregii populaii, , sau, aa cum se ntmpl cel mai
adesea,
numai deviaia standard, s, a eantionului

(13)
N
s
x
(14)
N
N dimensiunea eantionului (de ex, n cazul determinrii DL50 numrul total
al indivizilor din eantionul pe care se efectueaz testul).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
innd cont de relaiile (12) i (14), rezult c dimensiunea
intervalului de ncredere este dat de (15),
dimensiune a intervalul ui de ncredere

2t s
N

(15)

n cazul DL50, deviaia standard, s, a eantionului poate fi


calculat prin mai multe metode, toate aproximative,
folosindu-ne
de ecuaia corelaiei liniare stabilite ntre unitile probit i logaritmul
dozelor. Astfel o formul pentru s [6-13] este:
slg DL 50

2
b

(16)

n relaia (16), b reprezint panta dreptei uniti probit n funcie de


logaritmul dozei i poate fi calculat cu relaia:
b

probit2 probit1
lg Doza 2 lg Doza 1

(17)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Consultnd
tabelul care coreleaz mortalitatea
procentual cumulat cu unitile probit, se observ c la o
mortalitate de 84% corespunde un probit de 5,99, pe care l
vom aproxima cu 6, iar la o mortalitate de 16% corespunde
un probit de 4,01, valoare pe care o vom aproxima cu 4.
innd cont de acestea, relaia (17) se poate rescrie sub forma
relaiei (18). Cu aceast aproximaie, relaia (16), pentru
calculul deviaiei standard a logaritmului dozei medii letale
50, ia forma relaiei (19) [11].
b

64
lg D84 lg D16

(18) slg DL50 2

lg DL

84

lg DL16 lg DL84 lg DL16


(19)

2
2

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
O formul mai precis [6,7,9,12] pentru
calculul deviaiei standard a logaritmului dozei
medii letale 50, este urmtoarea,
lg Doz

m 2 lg DL50

2
m

s lg DL50
1
2
2
b
m lg Doz lg Doz
2

(20)

n care m reprezint numrul de grupe n care


a fost mprit eantionul de animale folosit
pentru testarea toxicului.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Parametrul DL50 al ntregii populaii poate fi estimat cu diferite nivele


de ncredere. Un nivel de ncredere de 90% al intervalului de estimare,
numit n acest caz i interval de ncredere de 90%, trebuie neles n
modul urmtor: dac toxicul este testat pe mai multe eantioane de
animale de laborator i, calculndu-se valorile DL50 pentru fiecare
eantion n parte, se construiesc folosindu-se relaia (12) intervale de
estimare a parametrului DL50, atunci nou din zece astfel de intervale,
ceea ce corespunde unei probabiliti de 90%, sau 0,9 notat cu (1-), vor
conine valoarea real a DL50 a ntregii populaii care rmne n continuare
necunoscut. Complementar, unul din zece astfel de intervale de estimare,
ceea ce corespunde unei probabiliti de 10% sau 0,1 notat cu i numit
i nivel de nencredere, nu va conine valoarea real DL50 a ntregii
populaii. Cu alte cuvinte, nivelul de nencredere,
, este probabilitatea ca statistica cunoscut, a
unui eantion extras la ntmplare din
populaie, s se afle n afara intervalului de
estimare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Distribuia eantioanelor, in cazul unei dimensiuni
mici a acestora nu este o distribuie normal, ci o
distribuie de tip t sau distribuie Student. Distribuia
Student este simetric fa de medie ca i distribuia
normal, dar este mai aplatizat dect o distribuie
normal. Distribuia t este sub distribuia normal n
jurul mediei i este peste distribuia normal departe de
medie sau cu alte cuvinte procentual avem mai multe
valori situate la marginile distribuiei i mai puine valori
situate n zona central comparativ cu o distribuie
normal. Forma distribuiei Student se apropie de cea a
distribuiei normale, pe msur ce dimensiunea
eantionului crete.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dac eantionul folosit pentru estimarea valorii
DL50 pentru ntreaga populaie este de dimensiuni
mici, deci este caracterizat de o distribuie de tip t,
atunci valoarea coeficientului t, numit i valoare
critic, din relaia de calcul a intervalului de
ncredere (12), se determin din tabele [14] n funcie
de numrul de grade de libertate, df (degree of
freedom) i de nivelul de ncredere (1-) dorit. n
cazul estimrii valorii medii a distribuiei, cum este
i DL50, df = N 1 (N dimensiunea eantionului).

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
De ex., dac eantionul este format din 30 de
indivizi i se dorete un nivel de ncredere de 95%
pentru intervalul de estimare a DL50, din tabel se
gsete valoarea critic t = 2,045. Dac pentru
acelai eantion (avnd deci aceeai dimensiune, N i
aceeai deviaie standard, s) se dorete un nivel de
ncredere de 99% pentru intervalul de estimare a
DL50, atunci valoarea critic t crete la 2,756, iar
intervalul de ncredere se mrete (vezi i relaia (15)
pentru dimensiunea intervalului de ncredere).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cu alte cuvinte, cu ct se impune un nivel
de ncredere mai mare pentru estimarea valorii
DL50 pentru ntrega populaie cu att,
probabilitatea ca valoarea DL50 a unui
eantion oarecare extras din populaie s se
afle n afara intervalului de estimare scade,
dar n acelai timp intervalul de ncredere se
lrgete, deci devine mai puin precis.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Pentru reducerea dimensiunii intervalului de
ncredere i, deci, creterea preciziei estimrii meninnd
n acelai timp nivelul de ncredere dorit, se poate mri
dimensiunea N a eantionului. Din tabelul caracteristic
distribuiei Student prezentat anterior se vede c valoarea
critic t pentru un anumit nivel de ncredere (1 ) scade
pe msur ce numrul de grade de libertate crete. De
s
asemenea, termenul N din relaia (15) pentru dimensiunea
intervalului de ncredere scade odat cu creterea lui N.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia dozrspuns (efect)

O alt metod de estimare a unui interval de ncredere de 95%


pentru DL50 este metoda Litchfield-Wilcoxon [15-17]. Dup ce se
realizeaz analiza probit i se determin valorile pentru DL50, DL84
i DL16 din ecuaia dreptei uniti de probit n funcie de logaritmul
dozei, se parcurg urmtorii pai:
1. se calculeaz aa numita funcie pant (slope), notat cu S, cu
relaia (21).
DL84 DL50

DL50 DL16
S
2

(21)

2. se determin N numrul total de animale supuse testului la

acele doze sau concentraii la care rspund ntre 16% i 84%


dintre indivizi.
3. se calculeaz valoarea exponentului din ecuaia (23) a
factorului f LD cu relaia (22).
50

exponent

2,77
N'

(22)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
4. se gsete valoarea factorului f LD

50

(23).
f LD S
50

2 , 77
N'

cu relaia

(23)

5. se calculeaz limitele superioar i inferioar

ale intervalului de ncredere de 95% cu


relaiile (24) i, respectiv (25).
limita superioar LD50 f LD
limita inferioar

LD50
f LD
50

50

(24)
(25)

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)
Ilustrm modul de calcul al dozei medii letale 50 i al
unui interval de ncredere de 95%, prin urmtorul exemplu.
Un toxicolog a efectuat o serie de teste pentru a determina
toxicitatea acut a toxicului X asupra petelui zebr (unul
dintre cei mai comuni petiori de acvariu). Doze diferite de
toxic X au fost administrate la cinci grupuri de petiori (cte
o sut n fiecare grup) i toxicologul a notat ci petiori au
murit n fiecare grup, obinnd rezultatele tabelate mai jos.
Doza de toxic Numrul de petiori mori
X
n fiecare grup (dintr-o sut)
(mg/kg corp)
5,4
1
7,1
12
8,2
34
10,1
81
11,9
98

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns


(efect)

Mai nti verificm c distribuia frecvenei mortaliii pe intervale de


dozaj este o distribuie normal. Pentru acesta construim o histogram
care ilustreaz frecvena mortalitii n funcie de logaritmul dozelor
administrate.
Numrul de petiori mori n fiecare grup
(dintr-o sut)

Doza de toxic X
(mg/kg corp)
5,4
7,1
8,2
10,1
11,9

Interval de dozaj
logD0,732394
0,732394<logD0,851258
0,851258<logD0,913814
0,913814<logD1,004321
1,004321<logD1,075547
logD>1,075547

Log Doz
1
12
34
81
98

Frecvena
mortaliii(%)
1
11
22
47
17
2

0,732394
0,851258
0,913814
1,004321
1,075547

Probit
2,67
3,82
4,59
5,88
7,05

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cu ajutorul histogramei putem estima valoarea
dozei medii letale DL50, folosind relaia (8) pentru
estimarea valorii medii a distribuiei.
x lg DL50

0,732394 0,851258 11/ 2 (0,851258 0,913814) 22 / 2 (0,913814 1,0043214) 47 / 2


97

(1,0043214 1,075547) 17 / 2
0,9369169
97
DL50 10 x 100 , 9369169 8,648 mg/kg corp

Folosind aceste date experimentale se poate trasa


curba sigmoid i aceasta poate fi liniarizat prin
transformarea mortalitii cumulate n uniti probit.

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia doz-rspuns (efect)

Uniti probit

Determinarea dozei medii letale DL50


8
7
6
5
4
3
2
1
0

y = 12.779x - 6.8965
R = 0.9873

0.7

0.8

0.9

Logaritmul dozei

1.1

Dup liniarizarea curbei sigmoide se calculeaz doza medie letal 50, cu


relaia (10). Similar se calculeaz lgDL84 i lgDL16 i valorile
corespunztoare DL84 i DL16.
lg DL50

5 6,8965
0,93094; DL50 100,93094 8,53 mg/kg corp
12,779

6 6,8965
1,009195; DL84 101, 009195 10,2134 mg/kg corp
12,779
4 6,8965
lg DL16
0,852688; DL16 100 ,852688 7,1234 mg/kg corp
12,779
lg DL84

n continuare, vom estima valoarea DL50 pentru ntreaga populaie,


calculnd un interval de ncredere de 95% al acestei valori prin cele dou
metode prezentate.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Vom calcula mai nti deviaia standard a
logaritmului dozei medii letale, DL50, cu
formulele (16), (19) i (20) i apoi intervalele de
ncredere de 95% corespunztoare cu relaia (12).
Rezultatele obinute sunt tabelate mai jos.

s(lgDL50) cu
formula (16)

s(lgDL50) cu
formula (19)

s(lgDL50) cu
formula (20)

limita
inferioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
lgDL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formulele
(16) i (19)

limita
inferioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
DL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formulele
(16) i (19)

limita
superioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
lgDL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formulele
(16) i (19)

limita
superioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
DL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formulele
(16) i (19)

limita
inferioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
lgDL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formula (20)

limita
inferioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
DL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formula(20)

limita
superioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
lgDL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formula (20)

limita
superioar a
intervalului
de ncredere
95% pentru
DL50 pentru
s(lgDL50)
calculat cu
formula (20)

0.110666998

0.110666998

0.111594104

0.921240998

8.341439384

0.940641778

8.72251607

0.921159734

8.339878693

0.940723043

8.724148366

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Deoarece dimensiunea eantionului, N = 500, este mare, distribuia t
devine o distribuie normal i n relaia de calcul a intervalului de ncredere
95% s-a folosit valorea critic t = 1,96, corespunztoare unei distribuii
normale. n cazul unei distribuii normale, 1,96 deviaii standard de o parte i
de alta a valorii medii cuprind 95 de procente din aria total de sub curba
Gauss. n general, pentru un numr de grade de libertate df > 200 i pentru un
nivel de ncredere (1 ) = 0,95, valoarea critic din relaia (12) de definire a
intervalului de ncredere este t = 1,96.
Intervalul de ncredere poate fi calculat i cu ajutorul funciei
CONFIDENCE din programul Excel. Sintaxa utilizat este urmtoarea:
=CONFIDENCE(nivelul de nencredere , deviaia standard s, dimensiunea
eantionului N). Se apas tasta Enter i programul returneaz valoarea funciei
CONFIDENCE.
n
cazul
nostru
concret
pentru
=CONFIDENCE(0.05,0.1116,500), programul returneaz valoarea 0,009782.
Apoi se calculeaz limitele superioar i, respectiv, inferioar ale intervalului
de ncredere 95%, mai nti pentru logaritmul dozei medii letale 50 i, apoi,
pentru DL50, dup cum urmeaz.
limita inferioar lg DL50 lg DL50 0,009782 0,93094 0,009782 0,921158; limita inferioar DL50 100,921158 8,34 mg/kg corp
limita superioar lg DL50 lg DL50 0,009782 0,93094 0,009782 0,940722; limita superioar DL 50 100,940722 8,724 mg/kg corp

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Am estimat astfel doza medie letal 50 pentru ntreaga populaie
i un interval de ncredere de 95% sub forma:
DL50 populatie 8,53 0,19 mg/kg corp .
Dup cum se poate observa dimensiunea intervalului de ncredere
95% pentru deviaia standard a logaritmului dozei letale medii 50 este
egal cu:
2 t slg DL 50 2 1,96 0,111594104

0,019563 0,940723043 0,921159734


N
500

Mai departe, vom construi un interval de ncredere de 95% pentru


doza medie letal 50, aplicnd metoda Litchfield-Wilcoxon. Pentru
aceasta, calculm mai nti funcia slope, S, cu relaia (21), utiliznd
valorile valorile DL84 i DL16, calculate anterior.
10,2134
8,53

8,53
7,1234 1,19735 1,19746
S

1,1974
2
2

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Deoarece numrul de animale testate n
intervalul DL16 DL84 este N = 200, valoarea
exponentului calculat cu relaia (22) este:
exponent

2,77
0,19586
200

Atunci, calculnd valoarea factorului


relaia (23), obinem:
f LD 1,19740,19586 1,0359
50

f LD

50

cu

Aspectul cantitativ al toxicitii. Relaia


doz-rspuns (efect)

Acum putem calcula limitele superioar i


inferioar ale intervalului de ncredere de 95% cu
relaiile (24) i, respectiv (25).
limita superioar DL50 8,53 1,0359 8,836 mg/kg corp
limita inferioar DL50

8,53
8,234 mg/kg corp
1,0359

Intervalul de ncredere 95% pentru valoarea dozei


medii letale DL50 pentru ntrega populaie este deci
(8,23 8,83) mg/kg corp.
Observm c intervalul de ncredere 95% obinut
prin metoda Litchfield-Wilcoxon este mai larg dect
cel calculat prin metoda precedent, deci metoda
Litchfield-Wilcoxon este mai puin precis.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Estimarea dozei medii letale 50 este util
pentru
compararea
toxicitii
diferitelor
substane. Toxicitatea unei substane este cu att
mai mare cu ct valoarea DL50 este mai mic (cu
ct este necesar o cantitate mai mic dintr-o
anume substan pentru a produce un anumit
rspuns, precum moartea a 50% dintre indivizii
unei populaii ntr-un anumit interval de timp, cu
att substana respectiv este mai toxic).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Din acest punct de vedere al potenialului lor
toxic reflectat prin valoarea DL50, substanele pot
fi mprite n ase clase de la practic netoxice
pn la supertoxice [18, 3].
Toxicitate

Practic netoxice

Cu toxicitate redus
Moderat toxice
Foarte toxice
Extrem de toxice

Supertoxice

Valoarea DL50 estimat pentru om n


cazul unei administrri orale (mg/kg
corp)
> 15000

5000 - 15000
500 - 5000
50 500
5 50

<5

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Tabelul urmtor prezint valorile DL50 pentru
diferite substane, preciznd calea de administrare i
animalul pe care s-a testat toxicitatea substanei [19].
Nr.crt.

Substana

Animal

Referina
bibliografic

oarece
obolan

Calea
de Doza
administrare
medie
letal
DL50
(mg/kg
corp)
intraperitoneal 0,000001
oral
0,02

1
2

Toxin botulinic A nefracionat


Dioxin

Sarin (substan toxic de lupt)

oarece

subcutanat

0,172

[22]

Cianur de potasiu, KCN

obolan

oral

[23]

[20]
[21]

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
5

Paration
organofosforic)

(insecticid obolan,
mascul

Endrin (insecticid organic clorurat)

Nicotin sulfat (insecticid natural)

oral

13

[19]

obolan,
mascul

oral

17,8

[19]

obolan,
femel

oral

83

[19]

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
8

Cafein

obolan,
femel

oral

192

[24]

Paraquat (ierbicid)

oarece

oral

196

[25]

10

Acid
acetilsalicilic
(aspirin, obolan
medicament
antitermic,
antiinflamator,
analgezic,
antiagregant plachetar)

oral

200

[26]

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
11

Carbaril (insecticid carbamic)

obolan

oral

250

[27]

12

Acid
2,4-dicloro-fenoxiacetic obolan
(ierbicid)

oral

375

[28]

13

Acid 2,4-diclorofenoxipropionic obolan,


(ierbicid)
mascul

oral

700

[29]

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
14

Malation
organofosforic)

(insecticid obolan,
mascul

oral

1375

[19]

15

Sare de buctrie, clorura de obolan


sodiu, NaCl
Glifosfat (ierbicid sistemic cu obolan
spectru larg)

oral

3000

[30]

oral

4900

[31]

Vitamina B3, acidul nicotinic sau obolan


niacina

oral

7000

[32]

16

17

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
18
19

Alcool etilic (etanol,


alimentar)
Sucroz (zahrul)

20

Ap, H2O

alcool obolan

oral

7060

[33]

obolan

oral

29700

[34]

obolan

oral

> 80000

[35]

Intrrile 1-3 n tabel corespund unor substane supertoxice, 4-6 unor


substane extrem de toxice, 7-12 unor substane foarte toxice, 13-16 unor
substane moderat toxice, intrrile 17 i 18 unor substane cu toxicitate redus,
iar intrrile 19 i 20 unor substane lipsite practic de toxicitate. O astfel de
clasificare, dei util din punct de vedere al normelor de ambalare, etichetare
i avertizare asupra potenialului toxic al diferitelor substane, este mai
degrab general, grosier i, neaducnd informaii specifice, adeseori
irelevant. Doza medie letal 50 singur nu este suficient pentru realizarea
unei comparaii corecte ntre toxicitatea a dou sau mai multe substane. Un
factor esenial pentru o astfel de comparaie este i panta curbei doz-rspuns
despre care valoarea DL50 nu furnizeaz niciun fel de informaie.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Panta curbei doz-rspuns poate furniza informaii cu privire
la mecanismul de aciune a toxicului. O pant foarte abrupt
reflect un singur efect deosebit de intens, cum ar fi blocarea
ireversibil a unei enzime sau interferena cu o funcie
metabolic vital, ca de ex., n cazul ionului cianur care
interacioneaz specific cu citocromul a3, o enzim a lanului
transportor de electroni. Legndu-se foarte puternic de aceast
enzim, ionul cian ntrerupe lanul transportor de elctroni care
este parte integrant a funciei vitale de respiraie celular. Din
contr, un efect toxic mult mai puin specific, deci depinznd
inerent de mai multe variabile, se reflect ntr-o valoare mai
mic a pantei. Dac dou substane diferite prezint aceeai
valoare pentru panta curbei doz-rspuns, atunci aceasta poate fi
un indiciu al faptului c cele dou substane diferite acioneaz
prin acelai mecanism sau prin mecanisme similare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Mortalitatea (%)

Cnd curbele doz-rspuns a dou substane


diferite au pante paralele, atunci, n mod evident,
substana cu valoare DL50 mai mare este mai puin
toxic (n figur substana A mai toxic dect
substana B).

Doza (scal logaritmic)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Mortalitatea (%)

Situaia se complic atunci cnd curbele doz-rspuns corespunztoare celor dou


substane au pante diferite.
Dac dou substane diferite,
A i B au aceeai doz medie
letal DL50, toxicitatea lor
relativ depinde de doza
administrat. n exemplul
urmtor se observ c dac se
compar valorile DL20 se
concluzioneaz c substana B
este mai toxic ca A, dar dac
comparm valorile DL70 concluzia este c
Doza (scal
substana A este mai toxic dect B.
logaritmic)
Cu ct curba doz-rspuns are o
pant mai mare, cu att deviaia standard a frecvenei mortalitii fa de valoarea medie
DL50 este mai mic i invers, cu ct panta este mai mic cu att deviaia standard este mai
mare. Cu alte cuvinte, intervalul DL20 DL70 din exemplul prezentat este mult mai ngust
pentru substana A dect acelai interval corespunztor substanei B.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Exprimarea cantitativ a toxicitii prin intermediul relaiei doz-rspuns permite
comparaii nu numai ntre substane diferite, ci i ntre rspunsuri diferite sau ntre
specii diferite de animale.
Un parametru foarte util n farmacologie este indicele terapeutic care se bazeaz
pe compararea rspunsurilor diferite pe care le produce aceeai substan administrat
n doze diferite. Indicele terapeutic al unei substane (IT) se calculeaz cu relaia (26) n
care DE50 este doza medie eficient din punct de vedere farmacologic [36, 37].

IT

DL50
DE50

(26)

Acest indice d indicaii cu privire la


posibilitatea utilizrii medicamentului
respectiv n condiii de siguran. Dup
cum se vede din figura alturat, cu ct
cele dou curbe pentru efectul
farmacologic i, respectiv, efectul letal,
sunt mai apropiate, cu att crete
probabilitatea apariiei unui efect advers
letal la unii indivizi sensibili n urma
administrrii dozei medii eficiente
terapeutic. Deci cu ct IT este mai mare,
cu att securitatea utilizrii medicamentului crete i riscul terapeutic se diminueaz. n
general, indicele terapautic trebuie s aib o valoare peste zece.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Un alt parametru al siguranei utilizrii unui medicament, mai drastic
dect IT, este marja de securitate (MS) sau factorul de securitate cert, definit
de relaia (27).

MS

DL1
(27)
DE99

Limita de securitate standard (Lss) se definete ca:

Lss MS 1 100 (28)

S considerm exemplul ipotetic al unei substane medicamentoase


pentru care DL1 = 100 mg, iar DE99 =10 mg.
Atunci avem:
100 10 100 900
Lss
10
, ceea ce nseamn c acea doz care este
eficient n proporie de 99%, trebuie
mrit cu 900% pentru a produce o
mortalitate de 1% n cadrul unei populaii.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Folosirea unor parametri de estimare a
gradului de securitate a unui medicament, mai
severi dect indicele terapeutic, cum sunt marja
de securitate i limita de securitate standard, este
justificat de faptul c estimrile bazate exclusiv
pe valoarea dozei medii letale DL50, fr
cunoaterea formei i a pantei curbei dozrspuns, ar putea conduce la concluzii eronate,
fiind astfel riscante.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Anumite efecte toxice pot fi observate doar peste o
anumit doz-prag. Nivelul maxim al dozei pentru care
nu se observ niciun efect se numete NOEL (din lb.
englez: no observed effect level). Conform conceptului
potrivit cruia efectul toxic apare n urma interaciunii
dintre toxic i un receptor molecular, intensitatea
efectului toxic (rspunsul) depinde de numrul de
receptori ocupai de ctre toxic i este posibil ca un efect
observabil s apar numai dup ce un numr minim de
receptori au fost ocupai, ceea ce explic existena unui
anumit prag al dozei sub care nu se observ niciun efect.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Un exemplu n acest sens, l reprezint intoxicaia cu
monoxid de carbon (CO). inta molecular a monoxidului de
carbon este hemoglobina, proteina transportoare a oxigenului n
snge. Hemoglobina este o metaloprotein conjugat avnd ca
grupare prostetic hemul. Hemul este o combinaie complex
coninnd fer. Combinaiile complexe conin un ion metalic (de
obicei al unui metal tranziional) central, nconjurat (coordinat)
de un numr bine definit de molecule sau ioni, denumii liganzi,
cu care acesta stabilete legturi covalente coordinative.
Numrul de coordinare depinde esenial de natura ionului
central, el putnd lua valori de la 2 la 12. Liganzii sunt direct
legai de ionul metalic central cruia i doneaz perechi de
electroni neparticipani. Liganzii monodentai ocup o singur
poziie coordinativ n jurul ionului central. Liganzii polidentai
se leag la acelai ion central prin mai muli atomi donori
ocupnd mai multe poziii coordinative.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

EDTA- acid etilendiaminotetraacetic


ligand hexadentat
Cation complex
Ion central Co3+, cifra de coordinare 6
NH3 ligand monodentat

Anion complex
Ion central Co2+, cifra de
coordinare 6
Ligand hexadentat, EDTA

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n cazul hemului, ionul central este un ion
feros (Fe2+), care are numrul de coordinare 6. n
hem, ionul central Fe2+ este tetracoordinat de
dianionul porfirinei care este un sistem ciclic
conjugat plan de 18 electroni , cu caracter
aromatic.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Hem b (ngroat ligandul tetradentat)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n hem, ferul central mai are la dipoziie dou poziii pentru
coordinare putnd s mai lege doi liganzi monodentai.
n hemoglobin, una dintre aceste poziii se ocup prin
coordinare cu atomul de azot al unui rest de histidin
din catena polipeptidic a proteinei globin, realizndu-se
astfel legtura dintre gruparea prostetic i protein.
Geometria hemului n hemoglobin este una piramidal.
n complexul pentacoordinat, ferul
ocup vrful piramidei, situndu-se n
afara planului inelului porfirinic.
Hemoglobina este o protein
heterotetramer constituit din dou
subuniti (catene polipeptidice
Geometrie piramidal (ferul este situat n vrful
distincte) i dou , ()2, asociate
prin fore intermoleculare necovalente. piramidei, n afara planului inelului porfirinic)
Fiecare subunitate are propria sa grupare prostetic, astfel c
n hemoglobin exist de fapt, 4 grupri prostetice de hem.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
n mod normal, cea de a asea poziie coordinativ a
ionului Fe2+ este ocupat reversibil de ctre oxigen. n
plmn, oxigenul difuzeaz prin membrana alveolelor
pulmonare i apoi prin membrana celulelor roii din
capilarele pulmonare. Cnd ntlnete hemoglobina,
oxigenul ocup i ultima poziie coordinativ a ferului
rmas liber n hem. Prin legarea oxigenului de hem se
formeaz oxihemoglobina, iar geometria hemului se
schimb. Spre deosebire de geometria piramidal a
ferului pentacoordinat din hemoglobina liber, n
oxihemoglobin, ferul hexacoordinat adopt o geometrie
octaedric, ionul Fe2+ situndu-se n planul inelului
porfirinic.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Geometrie octaedric (ferul n planul


inelului porfirinic)

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Modificarea geometric rezultat ca urmare a legrii oxigenului
de ctre o singur grupare hem, are ca rezultat modificarea
conformaiei ntregii proteine, astfel nct n noua form
geometric este mai uor pentru cele trei grupri prostetice de hem
rmase s lege i ele oxigenul [38]. Acest efect este cunoscut n
biochimie sub numele de cooperativitate. Astfel, hemoglobina
transport oxigenul n snge ctre esuturi i organe unde acesta
este cedat pentru a fi folosit n reaciile consumatoare de oxigen i
productoare de energie (catabolice) ale respiraiei celulare.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dac n aerul inspirat este prezent monoxid de
carbon, atunci acesta concur cu oxigenul la
ocuparea ultimei poziii coordinative rmas
liber n hem. Legarea monoxidului de carbon,
cu formarea carboxihemoglobinei, este
reversibil, la fel ca i legarea oxigenului, dar
monoxidul de carbon se leag mai puternic de
hem dect o face oxigenul. Aceasta crete riscul
unei intoxicaii cu monoxid de carbon,
deoarece unei concentraii relativ mici de
monoxid de carbon n aerul inspirat i
corespunde o concentraie mult mai mare de
carboxihemoglobin n snge.
Carboxihemoglobina

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Din punct de vedere toxicologic, nu se observ efecte toxice la
concentraii de carboxihemoglobin mai mici de 20% , cu alte cuvinte
efectele apar numai dup ce 20% din cantitatea total de hemoglobin
din snge a fost ocupat de monoxidul de carbon [36, pp. 18].
O alt situaie care poate conduce la existena unui prag pentru
toxicitate este aceea n care un receptor, precum o enzim, ajunge s
fie complet ocupat sau saturat. De exemplu, dac o enzim implicat n
detoxifierea organismului prin metabolizarea toxicului pe o anumit
cale este saturat, atunci ea las loc liber transformrii toxicului pe o
alt cale metabolic care este responsabil de toxicitatea acestuia. Cu
alte cuvinte, toxicitatea se manifest dup un anumit prag, cnd a fost
depit capacitatea de autoprotejare i autoreparare a organismului.
De asemenea, dac un sistem de transport activ implicat n excreia
toxicului este saturat, atunci la creterea dozei peste pragul de saturare
vor aprea efectele toxice.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Valoarea cea mai mare a dozei pentru care nu se observ o
cretere semnificativ a rspunsului toxic se numete NOAEL
(din lb. englez no observed adverse effect level). Nivelul cel
mai sczut al dozei la care apar efectele adverse se numete
LOAEL (din lb. englez lowest observed adverse effect
level).

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Cnd efectul expunerii la o substan este
apariia cancerului, unele autoriti precum
Agenia Guvernamental pentru Protecia
Mediului din Statele Unite (EPA) consider c nu
exist o doz-prag sigur, iar curba doz-rspuns
nu este o curb sigmoid, ca cele discutate pn
acum, ci trece perin zero. Cu alte cuvinte dozaprag este zero, i niciun nivel de expunere la
respectiva substan nu este sigur.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Conceptul de doz-prag are o importan deosebit n
toxicologie, fiind folosit n estimarea riscului la om prin
extrapolarea rezultatelor testelor toxicologice pe animale. De
exemplu, cunoscndu-se valoarea NOAEL determinat din
studii toxicologice pe animale, se poate calcula doza zilnic
admisibil (DZA), adic doza de substan care poate fi ingerat
zilnic de un individ uman, pe parcursul ntregii sale viei, n
condiii de siguran, conform cunotinelor actuale. DZA se
calculeaz mprind valoarea NOAEL la un factor de securitate
(FS). De obicei, factorul arbitrar FS are valoarea 100, inndu-se
cont de diferena dintre specii (factor 10) i de diferenele dintre
indivizii umani datorate variabilitii biologice (factor 10) [36,
pp. 423].
DZA

NOAEL NOAEL (29)

FS
100

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
DZA a fost introdus n 1962 de ctre experii
Organizaiei pentru Agricultur i Alimentaie a
Naiunilor Unite (FAO) i cei ai Organizaiei
Mondiale a Sntii (WHO) pentru aditivii
alimentari.
Pentu mediul nconjurtor se calculeaz cu relaia
(30) doza medie zilnic pe durata vieii LADD (din
lb. englez lifetime average daily dose) care este
aplicabil nu numai omului ci i altor specii din
mediu [37].
LADD

concentrat ia toxicului in mediu frecventa expunerii durata expunerii


(30)
greutatea corporala durata vietii

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Pentru mediul de munc, dar i pentru mediul comunal, se stabilete
concentraia maxim admisibil (CMA) care reprezint concentraia de
substan la care pot fi expui muncitorii, timp de 8 ore zilnic, pe perioade
lungi de timp, sau chiar pe ntrega via, fr ca s apar efecte adverse, cu
excepia persoanelor hipersensibile. Pe lng concentraia maxim admisibil,
pentru mediul de munc se mai calculeaz i anumite valori limit de
concentraii denumite i valori prag [37]. Exist trei tipuri de astfel de valori:
- valori prag ca medii ponderate care reprezint concentraiile medii
ponderate n timp i se calculeaz innd cont de concentraiile de substan la
care este supus lucrtorul n diferite momente ale zilei de lucru (de 8 ore) i de
durata expunerilor respective; se noteaz cu VL8.
- valori prag limit pe termen scurt reprezint concentraia de substan
la care lucrtorul nu trebuie s fie expus mai mult de 15 minute i care nu
trebuie s fie atins de mai mult de 4 ori pe zi sau la intervale mai mici de o
or; se noteaz cu VLs.
- valori plafon reprezint concentraiile ce nu trebuie s fie depite n
niciun moment pe parcursul zilei de lucru.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Curbe doz-rspuns n form de U.

1. Nutrieni eseniali. Exist o serie de substane , ca de ex.


majoritatea vitaminelor i oligoelemente, precum seleniul i
anumite metale grele (cobalt, cupru), care sunt necesare n cantiti
mici pentru sntatea i buna funcionare a organismului, dar care
nu pot fi sintetizate de ctre organism i trebuie introduse n
organism prin alimentaie. Astfel de substane se numesc nutrieni
eseniali. Dac nivelul acestor substane n organism se reduce sub o
anumit limit, situaie denumit n general deficien sau caren,
funcionarea normal a organismului este afectat, deci apare un
efect advers, care n anumite situaii poate fi chiar letal. Dac din
contr, concentraiile acestor compui n organism cresc peste
concentraiile normale fiziologic, excesul din aceti compui
determin de asemenea efecte toxice care, n cazuri extreme, pot
provoca moartea organismului.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)

Rspuns (%)

Curba doz-rspuns are deci, n acest caz, o form de U,


existnd dou praguri, unul minim i altul maxim, pentru
apariia rspunsului toxic, concentraiile cuprinse ntre aceste
praguri fiind cele normale fiziologic [3, 39].

Deficien
Efect advers

Exces
Efect advers
Concentraii
normale

Doz

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
2. Fenomenul de hormesis reprezint un alt caz n care
curba doz-rspuns are o form deosebit de cea obinuit
de sigmoid. Exist anumite substane, unele chiar
supertoxice, care atunci cnd sunt administrate n doze
foarte mici nu prezint efecte adverse, ci dimpotriv efecte
benefice sau protectoare. Exist de exemplu indicii, c
animalele expuse la doze sczute de dioxin, prezint o
inciden mai mic a anumitor tipuri de cancer, comparativ
cu un grup martor de animale neexpuse la dioxin. O alt
substan care prezint fenomenul de hormesis este
alcoolul etilic. Este binecunoscut faptul c n doze mari,
consumul cronic de alcool, crete riscul apariiei cancerului
esofagian, cancerului hepatic, cirozei i duneaz
sistemului cardiovascular.

Aspectul cantitativ al toxicitii.


Relaia doz-rspuns (efect)
Dar, exist de asemenea, suficiente dovezi epidemiologice i clinice c,
atunci cnd este consumat n cantiti mici pn la moderate, alcoolul etilic
reduce incidena bolilor cardiovasculare i a atacului de cord [40]. Explicarea
fenomenului de hormesis se bazeaz pe premiza c un stres blnd provocat de
doze mici de toxic stimuleaz mecanismele protectoare i reparatoare ale
organismului [36, pp. 26].

Aspectul calitativ al toxicitii

Toxicitatea nu este un concept exclusiv cantitativ. Toxicitatea


unei substane nu depinde numai de doza administrat, ci, evident, i
de structura i proprietile substanei respective i de caracteristicile
organismului asupra cruia aceasta acioneaz. Pe aspectul calitativ al
toxicitii se bazeaz conceptul de toxicitate selectiv.
Toxicitatea selectiv se refer la caracteristica unei substane de a
fi puternic toxic fa de o specie biologic i relativ inofensiv
pentru o alt specie biologic [41]. Toxicitatea selectiv este extrem
de important n proiectarea unor substane destinate controlului unor
ageni patogeni, (cazul bolilor infecioase n care se dorete ca
medicamentul utilizat n tratamentul bolii s fie ct mai toxic pentru
agentul patogen int, dar ct mai puin toxic pentru organismul
tratat), al duntorilor din agricultur (n cazul unui ierbicid, de ex.,
se dorete eradicarea buruienilor, dar nu i a plantelor de cultur) sau
al unor parazii (cnd se urmrete distrugerea parazitului fr ca
organismul gazd s fie i el afectat).

Aspectul calitativ al toxicitii


Aciunea toxic se poate manifesta selectiv ntr-una

din urmtoarele dou situaii.


1. Toxicul se acumuleaz preferenial n anumite
celule i esuturi, acesta fiind motivul principal al
toxicitii selective a unei substane pentru un anumit tip
de esut n raport cu alte esuturi. De exemplu, eficiena
tratamentului hipertiroidiei cu iod radioactiv se bazeaz
tocmai pe abilitatea selectiv a glandei tiroide de a
acumula iod.
2. Toxicul interacioneaz specific fie cu o structur
citologic fie cu un sistem biochimic sau o cale
metabolic ce joac un rol esenial n cazul speciei
afectate, dar nu apare sau joac un rol minor n cazul
speciilor neafectate.

Aspectul calitativ al toxicitii


De ex., antibioticele -lactamice ca penicilinele i
cefalosporinele au efect bactericid prin inhibarea sintezei peretelui
celular al celulei bacteriene. Celulele umane nu au perete celular i,
deci, nu sunt afectate n acest mod de antibiotic.

Insecticidele organofosforice acioneaz asupra procesului de


transmitere a influxului nervos prin sinapse, i ca atare afecteaz
animalele i nu plantele, deoarere acestea din urm nu posed un
sistem nervos. Multe ierbicide acioneaz prin inhibarea selectiv a
procesului de fotosintez, i, prin urmare, efectele lor adverse
asupra animalelor care nu posed un astfel de sistem biochimic sunt
reduse.

Aspectul calitativ al toxicitii


Aciunea chimioterapic a sulfamidelor exploateaz diferenele
dintre specii n ceea ce privete metabolismul acidului folic (vitamina
B9). Acidul folic este redus n ficat la acidul tetrahidrofolic care este
un cofactor important n sinteza nucleotidelor purinice i pirimidinice
i, deci, a acizilor nucleici. Organismul oamenilor i al majoritii
vertebratelor nu pot ns sintetiza acidul folic i, de aceea, au nevoie
de un aport de acid folic din dieta zilnic. Pe de alt parte, anumite
bacterii gram-negative sunt incapabile s asimileze acidul folic din
nutrieni. n schimb, ele au capacitatea de a sintetiza un precursor al
acidului tetrahidrofolic, acidul dihidropteroic, din 6-hidroximetil-7,8dihidropteridin i acid p-aminobenzoic. Aceast reacie este
catalizat enzimatic de dihidropteroat sintetaz. Datorit asemnrii
structurale cu molecula de acid p-aminobenzoic, sulfonamidele inhib
aceast reacie enzimatic. n acest fel, bacteriile respective sunt
private de acid tetrahidrofolic i cum acesta este un cofactor esenial
n sinteza acizilor nucleici, replicarea acestor bacterii este inhibat.
Organismul uman nu este afectat, deoarece nu prezint aceast cale
metabolic.

Aspectul calitativ al toxicitii

Aspectul calitativ al toxicitii


Medicamentul biseptol conine dou substane medicamentoase: o
sulfamid (sulfametoxazolul) i trimetoprim.

Trimetoprimul inhib n bacterii enzima dihidrofolat reductaza care


catalizeaz ultima etap n sinteza acidului tehtrahidrofolic. Aceast enzim
este prezent i n organismul uman, fiind implicat n transformarea acidului
folic n acid tetrahidrofolic n ficat.

Acid folic

Aspectul calitativ al toxicitii


Totui, enzima uman este diferit de cea
bacterian i nu este inhibat de trimetoprim.
Astfel, dei reducerea dihidrofolatului la
tetrahidrofolat este o cale metabolic comun
att pentru organismul bacterian, ct i pentru
cel uman, enzimele implicate n aceast cale
difer i, ca atare, inhibarea acestei ci
metabolice se produce doar n celula
bacterian.

Aspectul calitativ al toxicitii


Dac, ntr-o specie biologic procesele biochimice implicate n detoxifiere i
n excreia toxicului sunt rapide, atunci aciunea toxic asupra acestei specii va fi
mult redus comparativ cu alte specii pentru care procesele mai sus menionate
sunt mai lente sau chiar absente. Un exemplu n acest sens este insecticidul
malation, care are o toxicitate relativ redus pentru mamifere. Malationul este
activat metabolic att n insecte, ct i n mamifere, prin transformare oxidativ de
ctre citocromul P450 n malaoxon, un metabolit inhibitor al colinesterazei mult
mai toxic dect malationul. Colinesteraza este enzima care catalizeaz hidroliza
neurotransmitorului acetilcolin, o reacie care permite unui neuron colinergic s
revin la starea de repaus de dinaintea stimulrii sale. Pe de alt parte, i insectele
i mamiferele dispun i de sisteme de detoxifiere, prin hidroliz enzimatic sub
aciunea esterazelor. Monoacidul format sufer apoi reacii de conjugare din care
rezult compui cu masa molecular mai mare i, n consecin, cu capacitate mai
redus de a traversa membranele biologice, dar cu polaritate mai mare, deci care
pot fi mai uor excretai (eliminai). Toxicitatea redus a malationului fa de
mamifere comparativ cu insectele, se explic prin faptul c n mamifere viteza
proceselor metabolice de deazactivare (detoxifiere) este superioar vitezei
proceselor de activare metabolic prin transformare n malaoxon, pe cnd la
insecte situaia este exact invers, si anume activarea oxidativ decurge mai repede
dect detoxifierea hidrolitic. Cu alte cuvinte, n insecte predomin activarea
metabolic fa de dezactivare (detoxifiere), pe cnd la mamifere procesele de
detoxifiere predomin fa de procesul de activare metabolic [38, pp.64, 42].

Aspectul calitativ al toxicitii


La mamifere, transformarea
metabolic A este mai rapid
dect transformarea metabolic B.
La insecte, transformarea
metabolic B este mai rapid
dect transformarea metabolic A.

Aspectul calitativ al toxicitii


Interaciunile. Chiar dac n teste de laborator, cum ar

fi de exemplu testul pentru determinarea DL50,


organismele sunt supuse aciunii toxice a unei singure
substane, acest lucru se ntmpl rareori n viaa de zi cu
zi. De exemplu, tratamentul unei boli poate necesita
administrarea simultan a mai multor substane
medicamentoase. Chiar i pacienii care primesc un
singur medicament sunt expui simultan i altor
substane chimice provenite din mediu sau din
alimentaie. Prin urmare o problem major n
prevederea efectului pe care administrarea simultan a
acestor substane l poate avea asupra organismului este
cunoaterea modului n care ele se influeneaz reciproc
i a tipului de interaciuni posibile ntre substane.

Aspectul calitativ al toxicitii


Efectul aditiv. Cea mai simpl situaie este aceea n care ntre dou sau
mai multe substane nu exist interaciuni, ceea ce nseamn c la o
administrare simultan a acestor substane efectul produs asupra
organismului va fi unul aditiv. Fiecare dintre substane are un anumit efect
toxic asupra organismului atunci cnd este administrat individual. Efectul
produs de administrarea simultan a substanelor este pur i simplu suma
efectelor lor individuale. Matematic, efectul aditiv se exprim prin relaii de
genul: 1 + 1 = 2 sau 1 + 5 = 6. Insecticidele organoclorurate prezint un efect
aditiv.

Efectul de sinergie se refer la situaia n care administrarea simultan a


dou substane ce prezint acelai tip de efect toxic, produce un efect mai
intens dect suma efectelor individuale ale substanelor. n termeni
matematici: 1 + 1 = 4 sau 1 + 5 = 10. De ex., att etanolul ct i tetraclorura
de carbon sunt hepatotoxice, dar administrate mpreun sunt mult mai toxice
dect administrate separat. Un alt caz este cel al azbestului i fumului de
igar, care amndou cresc incidena cancerului pulmonar. Azbestul crete
incidena cancerului pulmonar de 5 ori, iar fumul de igar de 11 ori.
Combinarea celor dou are ca rezultat o mrire de 40 de ori a riscului de a
dezvolta cancer pulmonar [21, pp. 8, 36, pp. 14].

Aspectul calitativ al toxicitii


Efectul de potenare se refer la situaia n care o substan
care ea nsi nu produce efecte adverse intensific efectul toxic
al unei alte substane. n termeni matematici: 0 + 1 = 5 sau 0 + 5
= 20. Un exemplu este cel al medicamentului disulfiram utilzat
n tratamentul alcoolismului cronic. Dei la dozele administrate
disulfiramul nu prezint efecte adverse, dac se combin cu
etanol apar efecte toxice ca urmare a interferenei disulfiramului
cu metabolismul etanolului.
Antagonismul se refer la situaia n care o substan
chimic contrabalanseaz efectul advers al altei substane, sau
cu alte cuvinte expunerea concomitent la dou substane
chimice produce un efect mai puin intens dect suma efectelor
pe care le-ar produce cele dou substane dac ar aciona
indepenedent una de alta. n termeni matematici: 1 + 1 = 0 sau
1 + 5 = 2. Pe efectul de antagonist se bazeaz aciunea
substanelor antidot.

Aspectul calitativ al toxicitii


Din punct de vedere al mecanismelor care stau la baza
interaciunilor, acestea pot fi grupate n patru clase:
1. Funcionale (fiziologice) sunt acele interaciuni n care
ambele substane acioneaz asupra aceluiai sistem al
organismului, eventual prin mecanisme diferite. De ex., scderea
drastic a tensiunii arteriale ca urmare a unei supradoze de
barbiturice poate fi contracarat prin administrarea unei
substane vasoconstrictoare care crete tensiunea arterial.
2. Chimice sunt acele interaciuni n care o substan se
combin chimic cu o alt substan astfel modificndu-i
toxicitatea fie n sensul creterii, fie n sensul descreterii ei. De
ex., EDTA-ul se folosete ca antidot n intoxicaia cu metale
grele, deoarece formeaz combinaii complexe (chelai), mai
puin toxice, cu aceste metale.

Aspectul calitativ al toxicitii


3. Metabolice. Una dintre substane interfer cu metabolismul
celeilalte substane modificndu-i astfel toxicitatea. Un exemplu este
mrirea toxicitii insecticidului malation (sinergism) atunci cnd este
administrat mpreun cu un alt insecticid organofosforic (EPN). EPN-ul
blocheaz detoxifierea malationului, mrindu-i astfel toxicitatea. Un alt
exemplu, este blocarea de ctre disulfiram a enzimei acetaldehiddehidrogenaza. n mod normal, alcoolul etilic este metabolizat n ficat,
mai nti la acetaldehid sub aciunea enzimei alcool-dehidrogenaza.
Acetaldehida este un metabolit toxic, detoxifierea producndu-se prin
oxidarea acesteia la acid acetic, reacie catalizat de enzima
acetaldehid-dehidrogenaza. Disulfiramul inhib aciunea acestei
enzime. Prin urmare, dei n tratamentul alcoolismului, disulfiramul se
administreaz la doze practic netoxice, ingerarea simultan de alcool l
face s produc efecte adverse (efect de potenare) ca urmare a
interferenei sale cu metabolismul alcoolului i a acumulrii n organism
de acetaldehid, metabolit toxic al etanolului.

EPN

Disulfiram

Aspectul calitativ al toxicitii


4. Interaciunile la nivelul receptorilor sunt ntlnite mai ales n cazul
antagonismului. Cele dou substane interacioneaz cu acelai receptor,
ca de exemplu, oxigenul i monoxidul de carbon care ambele se leag de
hemoblobin. De aceea, intoxicaiile cu monoxid de carbon se trateaz cu
oxigen care dislocuiete monoxidul de carbon din carboxihemoglobin.
Studiul interaciunilor este deosebit de important din mai multe
motive, cum ar fi:
- permite proiectarea unor substane antidot eficiente n tratamentul
diverselor intoxicaii
- permite utilizarea n condiii de siguran i eficien a
medicamentelor, dar i a pesticidelor, prin cunoaterea diferitelor tipuri de
interaciuni, de sinergism sau dimpotriv de antagonism, dintre
substanele medicamentoase, respectiv dintre substanele active din
diferitele pesticide.
- permite elaborarea unor reglementri mai eficiente n vederea
diminurii riscului toxicologic rezultat din expunerea simultan la diferite
substane provenite din mediu i/sau din alimentaie.

Clasificarea substanelor toxice


n general, exist trei tipuri de entiti toxice:
Chimice care includ substane anorganice (ex: plumb, mercur,

arsen, azbest, clor, acid cianhidric i sruri ale acestuia, nitrii,


oxizi de azot, oxizi de sulf etc.) i organice (ex: alcool metilic,
pesticide, majoritatea medicamentelor, otrvuri produse de unele
organisme vii etc.).
Biologice - includ acele bacterii i virusuri capabile s provoace
boli organismelor vii. Msurarea toxicitii biologice este
complicat de faptul c pragul limit (threshold dose) poate fi
reprezentat de un singur organism.
Fizice - se refer la factori crora nu le atribuim n mod uzual
atributul toxic, cum ar fi: ocuri fizice, vibraii, sunete, cldur,
frig, radiaii neionizante precum lumina vizibil i infraroie, dar
i radiaii ionizante ca razele X, , , .
Substanele toxice pot fi clasificate dup mai multe criterii.

Clasificarea substanelor toxice


1. Dup origine, substanele toxice pot fi:
-

Naturale (toxine)- Orice otrav de origine microbian (produs de


microorganisme patogene ca virusuri, bacterii, protozoare, fungi), vegetal
sau animal care interacioneaz specific cu anumite componente celulare,
biomacromolecule precum enzime sau receptori celulari provocnd
moartea celulei, alterarea dezvoltrii, creterii i funcionrii normale sau
moartea organismului. Ex. de toxine de origine animal: veninurile de
erpi, vipere, scorpioni, pianjeni, peti, albine; ex. de toxine de origine
microbian: toxina botulinic, o neurotoxin de natur proteic produs de
bacteria Clostridium botulinum, toxina tetanic produs de Clostridium
tetani etc.; ex. de toxine vegetale: alcaloizi precum stricnina, morfina,
papaverina, nicotina, glicozide cianogene (care ajunse n aparatul digestiv
elibereaz HCN), ricina (o glicoprotein din planta de ricin) etc.

Morfina (principalul agent


activ din opiu)

Clasificarea substanelor toxice


Atunci cnd sunt ingerate, glicozidele
cianogene precum amigdalina din smburii
de caise formeaz acid cianhidric sub
aciunea enzimelor din aparatul digestiv.

Rezultate ca produs principal sau


subprodus al unei activiti umane.Uneori
produse supertoxice,ca
2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina pot fi
rezultatul unor reacii secundare i pot
contamina n mod nedorit produsul principal
al unei sinteze chimice. De ex,
2,4,5-triclorofenoxidul, utilizat ca
intermediar n sinteza ierbicidului selectiv
2,4,5-T (acid 2,4,5-triclorofenoxiacetic),
poate reaciona cu el nsui la temperatur
nalt formnd 2,3,7,8-tetraclorodibenzop-dioxina. Aceast reacie secundar scpat
de sub control a dus la accidentul industrial
de la Seveso (Italia) n 1976. Atunci 6 tone
de substane chimice, coninnd i 1 kg de
dioxin au fost evacuate accidental n
atmosfer i rspndite pe o suprafa de
18 km2, rezultnd cea mai mare expunere
cunoscut vreodat a unei populaii la acest
compus deosebit de periculos.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Atragem atenia asupra faptului c termenul
de compus natural nu trebuie asociat automat cu
lipsa de toxicitate i sigurana n folosire sau
consum, dup cum nici termenul de compus de
sintez nu nseamn automat c acel compus este
toxic sau prezint riscuri atunci cnd este folosit
sau consumat. Exist substane naturale
supertoxice, de ex. toxina botulinic, i compui
de sintez practic inofensivi, de ex. etilvanilina
(aroma artificial de vanilie).
Etilvanilina

Clasificarea substanelor toxice


2. Dup celulele sau organul int asupra cruia
acioneaz; de exemplu, substanele pot fi hepatotoxice
(afecteaz ficatul), neurotoxice (afecteaz sistemul
nervos), nefrotoxice (afecteaz rinichiul) sau pot prezenta
toxicitate pulmonar.
3. Dup efectele speciale pe care le produc asupra
organismului, distingem mai multe categorii de substane,
i anume:
a) Carcinogenice acele substane care produc cancer,
de ex. hidrocarburile aromatice polinucleare (PAH).

Clasificarea substanelor toxice


b) Mutagenice substane care modific materialul genetic (ADN-ul) unui
organism.
c) Teratogenice substane care produc malformaii congenitale.
d) Perturbatori endocrini sau ageni activi hormonal (endocrine disruptors n
lb. englez) - substane chimice de natur exogen care interfer cu aciunea
hormonilor din sistemul endocrin i afecteaz funcionarea normal a
organismului uman sau animal provocnd efecte adverse. Comunicaiile
intercelulare din organismului uman sunt realizate n principal cu ajutorul a trei
sisteme: sistemul nervos, sistemul endocrin i sistemul imun. Sistemul nervos
transmite mesaje senzoriale ctre creier i permite un rspuns rapid la modificri
i evenimente brute din mediul nconjurtor. Sistemul endocrin utilizeaz
hormonii, care sunt mesageri chimici (molecule semnalizatoare) eliberai direct n
snge de glandele cu secreie intern, cu rolul de a regla, prin procese mai lente,
metabolismul, de a pstra echilibrul hemodinamic i echilibrul electrolitic, i de a
menine diferitele constante ale mediului interior (ansamblul fluidelor
organismului) cum ar fi pH-ul sngelui, concentraia de dioxid de carbon n
snge, concentraia de glucoz n snge, temperatura corpului ntre limitele
valorilor normale. Acest proces de reglare se numete homeostazie. Hormonii
joac un rol primordial n procesul de cretere i dezvoltarea, n transformrile
profunde ale pubertii prin care organismul copilului devine un organism adult
capabil de reproducere i joac de asemenea un rol n determinarea unei anumite
dispoziii.

Clasificarea substanelor toxice

Sistemul endocrin este format din:


- Glande
- Hormoni (mesageri chimici)
- Receptori
Secreia hormonal a unei glande este activat de un stimul. Stimulul poate fi
de exemplu apariia unei perturbaii precum abaterea de la valoarea normal a unei
constante a mediului interior, ca de exemplu nivelul de glucoz n snge. Glanda
posed receptori ce pot sesiza aceast variaie i rspunde la stimul prin eliberarea
n snge a unui hormon. Hormonii sunt molecule semnalizatoare (signaling
molecules in lb. englez) implicate n comunicarea i transmiterea de informaii
ntre celule. Ele poart n structura lor chimic un mesaj. Aceti mesageri chimici
circul prin snge pn cnd ntlnesc o celul int. Hormonii acioneaz deci la
distan fa de locul producerii lor. Celula int are anumii receptori specifici
pentru hormonul respectiv [43]. Receptorii sunt molecule proteice ncorporate n
membrana celular sau prezente n citoplasm (n cazul hormonilor liposolubili
care pot trece prin membrana plasmatic). Hormonii interacioneaz cu receptorii
lor specifici de care se leag prin fore intermoleculare necovalente formnd
complexul hormon-receptor. Formarea complexului supramolecular receptorhormon se bazeaz pe complementaritatea formei geometrice i a interaciunilor
(legturilor intermoleculare non-covalente) dintre grupele funcionale ale
ligandului (hormonului) i receptorului, asemntor complementaritii lactcheie.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice

n urma legrii hormonului, receptorul sufer o modificare a conformaiei sale.


Aceast modificare de conformaie reprezint semnalul chimic care declaneaz o
succesiune de evenimente biochimice (o cascad biochimic) ce reprezint calea de
transmitere (sau transducere) a semnalului pn la un efector situat n interiorul celulei
int. Odat ce semnalul ajunge la efector acesta execut un rspuns celular al crui
rezultat este modificarea fiziologic a stimulului iniial ce a determinat eliberarea
hormonului, n sensul diminurii perturbaiei i revenirii constantei mediului intern (n
exemplul ales, concentraia de glucoz n snge) la valoarea normal. Acesta este
mecanismul general de reglare hormonal a metabolismului i de meninere a
homeostaziei, prin feedback negativ (bucl de control nchis) [44]. Exist i un control
prin feedback pozitiv (bucl deschis), un mecanism n care rspunsul sistemului la
apariia unei perturbaii este amplificarea perturbaiei. n anumite situaii, organismul are
nevoie de un astfel de control prin feedback pozitiv, un exemplu fiind refelexul Ferguson
ce apare n timpul naterii i este un reflex neuroendocrin ce const n esen n faptul c
producerea unei contracii are ca rezultat amplificarea contraciilor. Totui, feedback-ul
pozitiv este tolerat de organism doar pe termen scurt, pe termen lung ducnd la instabilitate
[45].
Hormonii nu sunt singurele molecule semnalizatoare. Neurotransmitorii,
medicamentele sau substanele toxice sunt alte tipuri de mesageri chimici.

Clasificarea substanelor toxice


Hormonii steroizi conin un schelet hidrocarbonat, lipofil,
de gonan sau steran, format din trei inele ciclohexanice i un
inel ciclopentanic condensate, notate A D, n care
stereochimia jonciunilor dintre inele B i C i C i D este
trans, trans. Stereochimia jonciunii dintre inelele A i B este
trans n -steran i cis n -steran. Datorit caracterului
liposolubil al scheletului de steran, hormonii steroizi pot s
traverseze membrana plasmatic i anvelopa nuclear
ajungnd n nucleu, acolo unde se afl receptorii lor
specifici de care se leag.

-Steran

-Steran

Clasificarea substanelor toxice


Receptorii hormonilor steroizi sunt proteine cu rol de factori de transcriere
care, n stare inactiv, sunt formate din mai multe subuniti polipeptidice.
Legarea hormonului steroid de receptorul su induce o modificare
conformaional a receptorului n urma creia acesta pierde o parte dintre
subunitile proteice i totodat dimerizeaz. n noua sa conformaie, factorul de
transcriere este activat i dup ce mai ataeaz nc o protein, este capabil acum
s se lege de o secven regulatoare a ADN-ului, un promotor, n amonte de o
gen [46, 47]. n urma legrii factorului de transcriere de promotor, transcrierea
genei int respective este activat. Se sintetizeaz astfel o macromolecul de
ARN mesager care prsete nucleul i n citoplasm servete ca ablon pentru
sinteza unei proteine specifice ce se realizeaz n ribozomi. Acest proces prin
care informaia stocat n ADN duce la sinteza unei proteine se numete
expresie genetic. Astfel, rolul hormonilor steroizi este de regulatori ai expresiei
genetice. Deoarece proteinele joac roluri cheie n realizarea tuturor funciilor
celulare, prin sinteza unor proteine specifice se formeaz caracterele
morfologice i funcionale ale celulei (fenotipul celular). Expresia genetic a
unei celule determin deci fenotipul acesteia, funcia celulei i rspunsul pe care
aceasta l are la aciunea factorilor externi (mediului). Este clar, prin urmare, c
orice intervenie strin n mecanismul de reglare a expresiei genetice a unei
celule, va avea drept consecine alterarea metabolismului celular i a funcionrii
normale a celulei.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Hormonii steroizi au roluri multiple n organism, contribuind la
controlul metabolismului, proceselor inflamatorii, funciilor imune,
echilibrului hidro-electrolitic, dezvoltrii caracterelor sexuale.
Perturbatorii endocrini interfer cu aciunea hormonilor steroizi,
prin cel puin trei tipuri de mecanisme [47, 48].
d.1). Imit aciunea unui hormon natural, cum ar fi hormonii
estrogeni (estradiol, estriol, estron) sau androgeni (testosterona),
modificnd conformaia receptorului i iniiind astfel un rspuns.
Efectul toxic apare ca urmare a unui dezechilibru produs de formarea
n exces a unui produs al expresiei genetice sau, dimpotriv, din cauza
inhibrii transcrierii unei gene, ntr-un moment nepotrivit pentru
organism. De ex., prezena n organismul mascul a unei substane ce
imit aciunea hormonilor estrogeni duce la feminizarea masculilor i
incapacitatea lor de a se reproduce.

Clasificarea substanelor toxice

d.2). mpiedic aciunea normal a hormonilor prin blocarea situsului


activ al receptorilor. Toxicul se leag de receptorul hormonului natural i
mpiedic astfel accesul hormonului la situsul activ al receptorului. Spre
deosebire ns de legarea hormonului, legarea toxicului nu schimb
conformaia receptorului i nu iniiaz
niciun rspuns.

Clasificarea substanelor toxice


d.3). Afecteaz sinteza, transportul, metabolismul
i eliminarea hormonilor.
Perturbatorii endocrini sunt molecule de
dimensiuni mici, lipofile. Pot fi mprite n dou
categorii:
- hormoni de sintez, ca de ex. contraceptivele
orale sau hormonii de cretere folosii ca aditivi
alimentari n hrana animalelor.
- substane chimice produse industrial ce au
diverse utilizri pe scar larg (de ex. Bisfenolul A,
utilizat la fabricarea sticlelor din material plastic,
precum i a conservelor metalice pentru alimente i
buturi).

Clasificarea substanelor toxice


La femei perturbatorii endocrini pot provoca:
cancer ovarian i de sn, fibroz chistic la
nivelul snului, chisturi ovariene, endometrioz,
fibrom uterin, boli inflamatorii pelviene. La
brbai efectele provocate de perturbatorii
endocrini pot fi: calitate slab a materialului
seminal (numr redus de spermatozoizi,
mobilitate sczut), cancer testicular, boli de
prostat.

Clasificarea substanelor toxice


Exemple de perturbatori endocrini:

1,1,1-tricloro-2,2-bis(4-clorofenil)etanul (DDT-ul este un insecticid ce a


fost larg utilizat pentru combaterea pduchilor ce sunt vectori ai tifosului
exantematic. Actualmente este interzis utilizarea lui. Nu este biodegradabil; urme
de DDT au fost gsite chiar i n grsimea pinguinilor din regiunile arctice.)

Bifenili policlorurai (PCBs)

Difenileteri polibromurai (PBDE)

Clasificarea substanelor toxice


Ftalaii sunt compui utilizai pentru a face
materialele plastice mai flexibile (plastifiani). Se

regsesc n numeroase obiecte precum jucriile,


materiale medicale din plastic etc. Ex., bis (2etilhexil)ftalatul. Produce tulburri endocrine la
bebeluii de sex masculin.

Clasificarea substanelor toxice


Dietilstilbestrolul
(4,4-(3E)-hex-3-en-3,4diildifenolul). ntre anii 1940-1970, a fost
administrat femeilor gravide ca medicament pentru
prevenirea riscului de avort. Ulterior s-a constat c
utilizarea lui poate determina anomalii
uterine la feii de sex feminin, capabile
s antreneze sterilitatea i chiar s
creasc riscul apariiei tumorilor
vaginale dup pubertate. A fost retras
de pe pia n 1977.

Clasificarea substanelor toxice


Bisfenol A (BPA); 4,4'-(izopropililiden)difenol se folosete la sinteza
rinilor epoxidice. Se regsete n materialele plastice utilizate la fabricarea
sticlelor de buturi rcoritoare, a foliei de plastic din interiorul cutiilor de
conserve, a dopurilor din plastic, a cutiilor alimentare din plastic, a biberoanelor
i tetinelor din material plastic, a evilor de cauciuc din plastic, a jucriilor din
plastic, a cernelii de printer. Este periculos deoarece poate migra uor din
materialele plastice n ap, buturi sau alimente, proces care este accelerat de
prezena unui mediu acid (ca n buturile carbo-gazoase) sau bazic (praful de
copt).

Teoria perturbatorilor endocrini afirm c expunerea la doze mici de


substane chimice care pot s interacioneze cu receptorii hormonali poate s
afecteze creterea, reproducerea i alte procese mediate hormonal. Teoria susine
c ntruct hormonii endogeni sunt prezeni i acioneaz n organism n cantiti
extrem de mici (de ordinul nanogramelor), este posibil ca perturbatorii endocrini
s dezvolte efecte adverse ce afecteaz funcionarea normal a sistemului
endocrin la doze mult mai mici dect cele necesare pentru o alt substan toxic
ce acioneaz printr-un mecanism diferit.

Clasificarea substanelor toxice


De asemenea, momentul expunerii este presupus a fi
extrem de important, deoarece ci hormonale diferite sunt
active n momente diferite, n stadii diferite ale dezvoltrii
organismului. n mod deosebit n cazul organismelor tinere
care cresc rapid, interferena cu procesele hormonale de
comunicare poate avea efecte profunde asupra organismului.
Depinznd de stadiul dezvoltrii, interferena cu sistemul
hormonal poate avea ca rezultat efecte ireversibile
neobservate la indivizi aduli expui la aceeai doz pentru
aceeai perioad de timp. Experimente pe animale au
identificat momente critice n anumite perioade ale dezvoltrii
intrauterine i la un anumit timp dup natere, cnd
expunerea la substane chimice care fie interfer cu, fie
mimeaz aciunea hormonilor, are efecte adverse care persist
i la vrsta adult.

Clasificarea substanelor toxice


4. Dup mecanismul de aciune. De ex.:
blocheaz legarea neurotransmitorului
acetilcolina de receptorii muscarinici prezeni n membrana
celular a anumitor neuroni.
Inhibitor de colinesteraz

Anticolinergic

Decuplant al fosforilrii oxidative de catena respiratorie.

Pentru a menine i perpetua starea vie, organismele au nevoie de


un aport continuu de energie din mediu. Organismele vii au sisteme
specializate prin care extrag energia din mediul nconjurtor, o
convertesc n alte forme de energie mai potrivite cerinelor lor, o
stocheaz i apoi o folosesc pentru sinteza propriilor sisteme
biochimice complexe din precursori simpli precum i n alte procese
ce necesit aport de energie, cum ar fi locomoia i transportul activ
al diferitelor specii chimice n interiorul organismului.

Clasificarea substanelor toxice


Totalitatea transformrilor compuilor chimici i a energiei din
organismul viu poart numele de metabolism. Procesele biochimice de
transformare a materiei i energiei sunt organizate funcional n secvene
de reacii consecutive, catalizate enzimatic i numite ci metabolice, n
care produsul unei reacii enzimatice devine substrat pentru reacia
urmtoare. Metabolismul are dou laturi opuse care se desfoar simultan
i se afl ntr-un echilibru dinamic: catabolismul i anabolismul.
Procesele metabolice care se desfoar la nivel celular constituie
metabolismul intermediar. Catabolismul cuprinde procesele prin care
molecule complexe de dimensiuni mari (proteine, polizaharide, lipide)
sunt degradate la molecule mai simple, de dimensiuni mai reduse, i se
elibereaz energia chimic coninut n aceste macromolecule complexe
(molecule combustibil). Macromoleculele sunt mai nti degradate pn la
unitile lor monomere, aminoacizi n cazul proteinelor, monozaharide n
cazul polizaharidelor, iar trigliceridele (lipide complexe) la acizi grai.
Aceti compui sufer n continuare degradri oxidative cu consum de
oxigen, produii finali de degradare fiind dioxidul de carbon i apa.
Anabolismul reprezint latura sintetic a metabolismului, n care
organismul i sintetizeaz propriile structuri moleculare i
supramoleculare complexe (precum proteinele, acizii nucleici,
polizaharidele), pornind de la constituenii lor de baz i folosind energia
eliberat n procesele catabolice.

Clasificarea substanelor toxice


Problema care se pune este, deci, cea a modului n
care se realizeaz transferul energiei de la procesele
catabolice, generatoare de energie, la cele anabolice,
consumatoare de energie. n general, procesele
biochimice care decurg cu eliberare de energie sunt
denumite procese exergonice, iar cele care decurg cu
consum de energie, procese endergonice.
Transferul energiei n sisteme biologice, n care
temperatura este constant, nu se poate realiza dect prin
reacii cuplate. Dou reacii sunt cuplate atunci cnd
reacia exergonic determin desfurarea celeilalte
reacii care este endergonic. Exist dou variante de
cuplare a reaciilor biochimice.

Clasificarea substanelor toxice


4.1. Cuplarea printr-un intermediar chimic (metabolit) comun. Se ntlnete n
situaia a dou reacii succesive ntre care exist un intermediar comun. Dac una
dintre reacii este endergonic (G > 0), ea poate avea totui loc, prin cuplare cu o
reacie exergonic (G <0), cu o condiie i anume ca energia eliberat de reacia
exergonic s fie mai mare dect energia ce trebuie furnizat reaciei endergonice
pentru ca aceasta s se desfoare n sensul defavorizat termodinamic. Ex.: fosforilarea
glucozei. Reacia glucozei cu fosfatul (Pi) este o reacie endergonic, defavorizat
energetic i nu va avea loc. Hidroliza adenozin trifosfatului (ATP) la adenozin difosfat
(ADP) i fosfat anorganic (Pi) este o reacie puternic exergonic. Reacia total este
fosforilarea glucozei de ctre ATP (suma celor dou reacii pariale de mai sus) i are
loc cu uurin. Reacia exergonic furnizeaz energia necesar reaciei endergonice
(trage dup ea reacia endergonic). Intermediarul comun, n acest caz, este anionul
fosfat.
Componenta
endergonic;

Gend 0

Componenta exergonic;

Gex 0

Gtotal Gend Gex 0; Gex Gend

Clasificarea substanelor toxice


Figura prezint o
analogie mecanic a
conceptului de
cuplare [49].

4.2. Cuplarea printr-un intermediar energetic comun. O


modalitate important de transfer al energiei de la procesele
catabolice (exergonice) la cele anabolice (endergonice) este
de a sintetiza n procesele catabolice un compus cu potenial
energetic ridicat i de a utiliza acest compus n procesele
anabolice. Un astfel de compus este adenozin trifosfatul
(ATP).

Clasificarea substanelor toxice


ATP-ul este sintetizat n procesele catabolice din
adenozin difosfat (ADP) i fosfat anorganic (Pi) i
nmagazineaz energia eliberat n procesele de degradare
oxidativ a moleculelor combustibil sub form de energie
chimic a legturii macroergice, bogate n energie, de tip
fosfoanhidrid, a gruprii fosfat terminale din molecula sa.

Clasificarea substanelor toxice


El stocheaz pe termen scurt energia rezultat din procesele catabolice, pe
care apoi o cedeaz proceselor anabolice atunci cnd gruparea sa fosfat terminal
este hidrolizat cu formare de ADP i fosfat anorganic. Astfel, ATP-ul
funcioneaz ca un cont curent energetic al celulei vii. Acionnd de o manier
ciclic ca un cru al energiei de la procesele catabolice la cele anabolice, fiind n
permanen consumat n procesele anabolice i resintetizat n cele catabolice,
ATP-ul reprezint veriga de legtur dintre cele dou laturi opuse ale
metabolismului pe care le cupleaz. Timpul mediu de via al unei molecule de
ATP este de aproximativ un minut.

Ciclul ATP-ului

Clasificarea substanelor toxice


Cea mai mare parte din ATP este sintetizat
prin procesul de fosforilare oxidativ a ADP-ului
n mitocondrii ( organite celulare ce funcioneaz
ca nite centrale energetice ale celulei vii).
Fosforilarea oxidativ reprezint punctul
culminant al metabolismului generator de
energie: toate cile de degradare oxidativ a
moleculelor combustibil converg spre aceast
etap final n care energia eliberat n procesele
catabolice este utilizat pentru sinteza ATP.

Clasificarea substanelor toxice


Fosforilarea oxidativ are dou componente:
- Componenta exergonic este reprezentat de lanul transportor
de electroni sau catena respiratorie.
Prin degradarea oxidativ a moleculelor combustibil se formeaz
ca produs final dioxidul de carbon i rezult aa numiii echivaleni de
reducere, formele reduse NADH i FADH2 ale coenzimelor de oxidoreducere, nicotinamid-adenin dinucleotida i, respectiv, flavin-adenin
dinucleotida. Partea final a acestor reacii de degradare oxidativ este
reprezentat de reaciile din ciclul acizilor tricarboxilici (ciclul
acidului citric sau ciclul Krebs) care se produc n matricea
mitocondrial. Rolul echivalenilor de reducere rezultai din ciclul
Krebs este de a transfera electronii ctre acceptorul final de electroni
care este molecula de oxigen ce se reduce la ap, conform
urmtoarelor reacii:
NADH + H+ + O2 NAD+ + H2O
FADH2 + O2 FAD + H2O

(31)
(32)

Clasificarea substanelor toxice


n chimie, cedarea de electroni se numete
oxidare, iar acceptarea de electroni se numete
reducere. Un reductor cedeaz electroni i se
oxideaz. Electronii cedai de reductor sunt
acceptai de un oxidant care se reduce.
Coenzimele de oxido-reducere pot exista n
dou forme: oxidat, respectiv, redus,
interconvertibile prin procese redox.

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice

Clasificarea substanelor toxice


Echivalenii de reducere NADH i FADH2 cedeaz
doi electroni. Electronii nu sunt ns cedai direct
oxigenului, ca n reaciile (31) i (32). Aceste reacii sunt
puternic exergonice i eliberarea brusc a unei asemenea
cantiti mari de energie, ar distruge practic celula vie.
De aceea, transferul electronilor de la echivalenii de
reducere la oxigen se face secvenial prin intermediul
unor proteine transportoare de electroni care formeaz
catena respiratorie. Aceste proteine sunt localizate n
membrana intern a mitocondriei.
- Componenta endergonic a fosforilrii oxidative
este sinteza ATP prin fosforilarea ADP, proces ce se
realizeaz cu ajutorul enzimei ATP sintaza pe seama
energiei eliberate de componenta exergonic.

Clasificarea substanelor toxice


Cuplarea reaciilor redox din lanul transportor de electroni cu
fosforilarea ADP-ului este reprezentat schematic mai jos.

Clasificarea substanelor toxice


n reaciile redox exergonice ale lanului transportor de electroni se
elibereaz suficient energie pentru a susine sinteza endergonic a ATP-ului din
ADP i fosfat anorganic. Problema care se pune este, din nou, cea a
mecanismului prin care se realizeaz transferul de energie (cuplarea) ntre
reaciile exergonice ale catenei respiratorii i fosforilarea endergonic a ADPului. Teoria care este acceptat de majoritatea comunitii tiinifice este teoria
chemiosmotic elaborat n 1961 de P. D. Mitchell, laureat al Premiului Nobel
pentru chimie n 1978. Mare parte din energia eliberat n reaciile redox ale
lanului transportor de electroni este utilizat pentru a pompa simultan protoni din
matricea mitocondrial n spaiul intermembranar, prin membrana intern, cu
ajutorul unor complexe proteice transportoare de protoni situate n membrana
intern a mitocondriei i asociate cu enzimele lanului transportor de electroni. Se
creaz i se menine astfel un gradient de protoni ntre cele dou fee ale
membranei interne a mitocondriei. Gradientul de protoni este un gradient
electrochimic avnd dou componente:
- gradientul electric; cum protonii au sarcin pozitiv, faa extern, cea
dinspre spaiul intermembranar, a membranei interne a mitocondriei este
ncrcat pozitiv comparativ cu faa intern, cea dinspre matricea mitocondrial.
-gradientul chimic; pH-ul pe faa extern a membranei interne este mai acid
dect pe faa intern.
Acest gradient de potenial electrochimic reprezint o form de conservare
temporar a energiei eliberate n procesele redox ale lanului transportor de
electroni.

Clasificarea substanelor toxice

n momentul n care protonii vor curge n mod spontan n


sensul gradientului electrochimic de la potenial mare spre potenial
mic, adic dinspre spaiul intermembranar, prin membrana intern,
napoi spre matricea mitocondrial, gradientul de potenial se
micoreaz (se descarc) i energia stocat temporar n acest
gradient este eliberat i servete la fosforilarea ADP-ului. Acest
proces este realizat cu ajutorul ATP sintazei. ATP sintaza este un
motor molecular, un complex proteic format din mai multe
subuniti organizate funcional n dou poriuni: o poriune
transmembranar (F0) i o poriune situat n matricea
mitocondrial (F1).

Clasificarea substanelor toxice


Rolul poriunii F0 este acela al unui canal ionic
care faciliteaz trecerea protonilor n sensul
gradientului de potenial electrochimic (transport
pasiv) prin membrana intern a mitocondriei. Acest
canal ionic devine activ (se deschide) numai atunci
cnd potenialul protonilor atinge o valoare ce
conine suficient energie pentru a susine reacia de
fosforilare a ADP cu formare de ATP.
Rolul poriunii F1 este unul sintetic, de a cataliza
sinteza ATP din ADP i fosfat anorganic.

Clasificarea substanelor toxice


Orice substan care disipeaz gradientul de protoni dintre
cele dou fee ale membranei interne a mitocondriei, priveaz
sinteza ATP de sursa sa de energie, cu alte cuvinte,
decupleaz lanul transportor de electroni (componenta
exergonic a fosforilrii oxidative) de sinteza ATP
(componenta endergonic a fosforilrii oxidative) i reduce
astfel capacitatea celulei de a sintetiza ATP. O astfel de
substan este 2,4-dinitrofenolul care, fiind un transportor de
protoni prin membran, duce la anularea gradientului de
protoni implicat n cuplarea catenei respiratorii cu fosforilarea
oxidativ.

Clasificarea substanelor toxice


Un alt transportor de protoni este antibioticul valinomicina.

Valinomicina

Cum cea mai mare parte a ATP-ului celular se sintetizeaz prin


fosforilarea oxidativ a ADP-ului, aciunea pe termen lung a decuplanilor
este periculoas deoarece las procesele anabolice fr surs de energie.

Clasificarea substanelor toxice


Figura urmtoare ilustreaz procesul fosforilrii oxidative cuplate cu lanul
transportor de electroni
[49, pp. 723].

Clasificarea substanelor toxice


O reprezentare schematic a mitocondriei este prezentat n
figura urmtoare. Se observ c membrana intern este mai lung
dect membrana extern, motiv pentru care formeaz falduri
numite criste mitocondriale care ptrund adnc n spaiul matricei
mitocondriale. Aria membranei interne este cam de cinci ori mai
mare dect cea a membranei externe. Acest fapt este justificat de
localizarea n membrana
intern mitocondrial a
enzimelor din lanul
transportor de electroni
i a ATP sintazei, deci cu ct
aria membranei interne
este mai mare cu att crete i
capacitatea mitocondriei de a
sintetiza ATP.

Clasificarea substanelor toxice


5. Dup compoziia chimic, de ex.:
Metale grele (Pb, Cd, Hg)
Dibenzodioxine policlorurate (PCDDs)
Policlorodibenzofurani (PCDFs) etc.

6. Dup scopul n care sunt utilizate, de ex.:

Pesticide
Medicamente
Solveni
Aditivi alimentari etc.
7. Dup starea de agregare n condiii normale: substane
gazoase, lichide, solide.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii

Tipuri de efecte toxice


Reacii alergice. Alergia este o reacie advers la o substan
rezultat n urma unei sensibilizri anterioare prin expunere la
substana respectiv. Reacia alergic este mediat imunologic.
Majoritatea substanelor i a metaboliilor lor sunt de dimensiuni
prea mici pentru a fi recunoscute ca substane strine (non-self)
de ctre sistemul imunitar. De aceea, pentru a forma un antigen
i, deci, pentru a provoca un rspuns imun, astfel de substane,
numite haptene, trebuie mai nti s se combine cu o protein
endogen. Dup formarea antigenului, acesta declanseaz
procesul de formare a anticorpilor specifici care dureaz 1-2
sptmni. Dac dup formarea anticorpilor, organsimul este
expus din nou substanei chimice respective sau uneia similare
structural, se produce interaciunea antigen-anticorp care duce la
apariia manifestrilor tipice alergiei. Reaciile alergice sunt
diverse, interesnd diferite organe i mergnd de la iritaii
minore pe piele pn la oc anafilatic letal.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Idiosincraziile. Termenul desemneaz o intensitate anormal a
efectelor produse de o substan asupra anumitor indivizi, incluznd
att o sensibilitate extrem la doze mici, ct i cazul invers, adic
insensibilitate neobinuit la doze mari. Un exemplu clasic l
constituie reacia idiosincrazic dezvoltat de anumii pacieni
manifestat prin relaxare muscular prelungit, de durata a ctorva ore
i apnee (oprire temporar a respiraiei) ca urmare a administrrii unei
doze standard, normale de succinilcolin. Succinilcolina este un
relaxant al muchilor scheletici, ce are o perioad scurt de aciune ca
urmare a metabolizrii sale rapide de ctre o enzim aflat n mod
normal n snge i numit butirilcolinesteraz plasmatic. Reacia
idiosincrazic este determinat genetic. Butirilcolinesteraza din
sngele pacienilor care prezint reacia idiosincrazic este mai puin
eficient n degradarea succinilcolinei, ca urmare a unui polimorfism
al genei ce codific aceast enzim.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Un alt tip de reacie idiosincrazic este sensibilitatea
deosebit a anumitor oameni fa de nitrii i ali compui
capabili s oxideze ionul Fe2+ din hemoglobin la Fe3+,
formnd methemglobina. Aceasta din urm, spre deosebire
de hemoglobin, nu poate lega oxigenul. n mod normal,
methemglobina este redus napoi la hemoglobin de
enzima NADH-methemglobin reductaza. Pacienii cu
reacie idiosincrazic la nitrii prezint o activitate redus a
acestei enzime ca urmare a unei modificrii genetice ce are
ca rezultat nlocuirea unui singur aminoacid din catena
polipeptidic a enzimei normale (un rest de serin este
nlocuit cu unul de prolin). Persoanele care prezint acest
tip de modificare genetic pot s sufere de hipoxie (aport
insuficient de oxigen) ca urmare a administrrii unei doze
de nitrii care este inofensiv pentru oamenii normali.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice imediate i ntrziate. Efectele
toxice imediate sunt acele efecte care apar rapid dup

o singur administrare a substanei. Efectele toxice


ntrziate sunt acelea care care apar dup scurgerea
unei anumite perioade de timp din momentul
administrrii. De obicei, efectele carcinogene sunt
efecte toxice ntrziate. De ex., fiicele mamelor
tratate cu dietilstilbestrol n perioada graviditii pot
dezvolta cancer vaginal n perioda tinereii, la 20-30
de ani de la expunerea lor la aceast substan n
perioada vieii intrauterine [50].

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice reversibile i ireversibile. Atunci

cnd o substan toxic produce leziuni unui


esut, efectul poate fi reversibil sau ireversibil n
funcie de capacitatea de regenerare a esutului
respectiv. De ex., leziunile ficatului sunt de
obicei reversibile, datorit capacitii mari de
regenerare specifice ficatului, pe cnd leziunile
sistemului nervos central (SNC) sunt ireversibile
deoarece celule SNC nu se pot divide i nu pot fi
nlocuite.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Efecte toxice locale i sistemice. Aceast difereniere se face n funcie de locul de aciune
al substanei toxice. Efectele locale sunt acelea care apar la primul loc de contact dintre
organism i toxic. De ex, inhalarea de clor produce leziunea i imflamarea esuturilor cilor
respiratorii superioare cu posibile efecte letale, dei o cantitate foarte mic de clor este
absorbit n fluxul sangvin. Efectele sistemice necesit absorbia toxicului n marea circulaie
sau circulaia sistemic i distribuia sa n esuturi i organe aflate la distan de locul de intrare
a toxicului n organism i de locul absorbiei sale n snge. Locul de aciune al toxicului este
diferit deci de locul n care are loc primul contact dintre toxic i organism. Majoritatea
substanelor, cu excepia celor foarte reactive, prezint efecte toxice sistemice. Unele substane
prezint ambele tipuri de efecte. De ex,. tetraetilplumbul, (C2H5)4Pb, produce efecte locale pe
piele i la locul de absorbie, dar este transportat de ctre snge i produce efecte sistemice
asupra sistemului nervos central i altor organe. Cele mai multe substane ce prezint efect
toxic sistemic nu manifest aceeai toxicitate fa de toate organele, ci efectele toxice se resimt
n special asupra anumitor organe (puine ca numr), numite organe int. Nu este obligatoriu
ca organul int s reprezinte n acelai timp i locul de concentraie maxim a toxicului n
organism. Sngele distribuie toxicul n toate esuturile i organele, iar acestea rein cantiti mai
mici sau mai mari de toxic n funcie de afinitatea lor pentru acesta. n general se folosete
urmtoarea terminologie:
- pentru esuturile i organele int asupra crora acioneaz toxicul se folosete termenul
de localizare;
- pentru celelalte esuturi i organe ce rein cantiti importante de toxic fr ca toxicul s
acioneze asupra lor se folosete termenul de stocare.
De obicei, organul int nu este i locul de stocare a toxicului n organism. De ex.,
plumbul este stocat n oase, dar acioneaz asupra esuturilor moi; insecticidele organoclorurate
sunt stocate n esuturile adipoase, dar acioneaz asupra sistemului nervos central.

Tipuri de efecte toxice i intoxicaii


Intoxicaiile. Din punct de vedere clinico-evolutiv,
intoxicaiile pot fi clasificate n:
- intoxicaii acute
- intoxicaii subcronice
- intoxicaii cronice
Intoxicaiile acute apar atunci cnd o doz mare de substan
toxic ptrunde n organism, ca urmare a unei expuneri unice sau
a unor expuneri repetate, dar ntr-un interval scurt de timp (maxim
24 de ore). Simptomatologia apare brusc, este bine conturat i
evolueaz rapid.
Intoxicaiile subcronice apar n urma unor expuneri repetate la
toxic care se ntind pe o perioad de timp de ordinul sptmnilor
sau lunilor.
Intoxicaiile cronice sunt rezultatul unor expuneri repetate pe
parcursul a mai multor luni sau chiar ani de zile. Aciunea toxic
se datoreaz acumulrii substanei n organism, sau a creterii
progresive a leziunilor provocate, cu apariia unei stri patologice
fr manifestri evidente dar care se poate acutiza pe fondul
scderii condiiei fiziologice generale sau n cazul mobilizrii
substanei toxice din depozite.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism
Pn la producerea efectului toxic, o substan chimic parcurge mai multe
faze, i anume:
- faza de expunere
- faza toxicocinetic
- faza toxicodinamic.
Evident, nainte ca toxicitatea s se poat manifesta, substana toxic trebuie
s vin n contact cu o suprafa a corpului precum pielea, ochiul sau o mucoas
a tractului alimentar sau respirator. Dup cum am vzut, efectul poate fi unul
local, la nivelul cii de ptrundere, sau sistemic ca urmare a absorbiei toxicului
n marea circulaie i distribuiei sale n ntregul organism.
Faza toxicocinetic cuprinde efectele i aciunile organismului asupra
substanei toxice. Substana este absorbit n marea circulaie, distribuit prin
arborele circulator ctre toate esuturile i organele, metabolizat i n final
eliminat din organism. Absorbia depinde de calea de ptrundere a toxicului n
organism sau calea de administrare. Prin metabolizare, organismul poate
transforma substana toxic n metabolii mai polari i mai hidrofili ce pot fi
eliminai mai uor, metabolizarea avnd astfel o contribuie important la
detoxifierea organismului. Este posibil ns i situaia invers, n care
metabolitul rezultat este mai toxic dect substana iniial, organismul realiznd
astfel activarea xenobioticului, ca de ex., n cazul glicozidelor cianogene.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism
Etapele fazei toxicocinetice de la adminsistrarea substanei toxice
pn la eliminarea sa total din organism se desfoar simultan.
Viteza de parcurgere a etapelor toxicocinetice i proporia de molecule
ce sunt implicate n orice moment n fiecare dintre etape, reprezint
profilul toxicocinetic propriu fiecrei substane toxice.
Efectele i aciunile substanei asupra organismului sunt cuprinse
n faza toxicodinamic. Legarea substanei toxice de receptorii
specifici declanseaz rspunsul toxic al organismului. Efecte
biochimice ale formrii complexului toxic-receptor pot fi: inhibarea
activitaii enzimatice, alterarea permeabilitii membranei celulare,
modificarea metabolismului proteinelor, carbohidrailor i lipidelor,
inhibarea respiraiei celulare etc. Aceste modificri biochimice se
traduc n plan fiziologic prin modificri ale ritmului cardiac, ritmului
respirator, temperaturii corpului, tensiunii arteriale, modificri la
nivelul sistemului nervos central etc.
Figura urmtoare este o reprezentare schematic a etapelor
parcurse pn la apariia efectului toxic.

Fazele evoluiei unei substane


toxice n organism

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Odat ce o substan chimic este eliberat n mediul nconjurtor, ea este
supus aciunii factorilor de mediu, abiotici i biotici, ce se concretizeaz prin
transportul i transformarea chimic a substanei. S considerm de exemplu un
pesticid utilizat n agricultur pentru combaterea duntorilor i aplicat prin
pulverizare a solului. El nu va rmne numai n aria de aplicare, ci se va rspndi,
ptrunznd ca un contaminant att n atmosfer, ct i n apele de suprafa i n
cele subterane. Particule de pesticid pot fi antrenate de vnt, ajungnd astfel n
atmosfer, de unde vor reveni pe Pmnt odat cu ploile i, direct sau prin
intermediul scurgerilor de suprafa, o parte din pesticid va ptrunde i n apele de
suprafa. De asemenea, pesticidul va ptrunde i n apele subterane odat cu
infiltrarea apei prin sol. n sol exist bacterii descompuntoare care transform
materia organic n materie anorganic, aceasta din urm intrnd apoi n ciclurile
biogeochimice (ciclul carbonului, ciclul azotului i ciclul oxigenului).
Microorganismele din sol au astfel o aciune detoxifiant. Totui unele pesticide nu
sunt biodegradabile i persist n sol i ap perioade foarte lungi de timp putnd
intra n lanurile trofice i avansa verig cu verig n aceste lanuri regsindu-se n
final drept contaminani ai alimentelor de origine vegetal sau animal. Deosebit de
periculoase, n acest sens sunt pesticidele organoclorurate, deoarece sunt
liposolubile i pot fi uor preluate de organisme din sol, ap sau aer. Dac nu sunt
rapid metabolizate ele persist un timp suficient de lung n organism pentru a putea
fi transferate organismului ce reprezint urmtoarea verig a lanului trofic
respectiv (vezi figura urmtoare).

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor

Lan trofic simplificat


Mai mult dect att, n fiecare organism verig a lanului trofic, toxicul lipofil
ingerat odat cu hrana tinde s fie acumulat n esuturile adipoase, pe cnd restul
hranei este metabolizat i excretat, ajungndu-se astfel la o cretere semnificatic a
concentraiei de toxic n organism. La un anumit nivel al lanului trofic,
acumularea de toxic devine vtmtoare. Este sigur c subierea cojii oului
anumitor psri rpitoare este produs de acumularea de DDT i DDE
(diclorodifenildicloroetilena obinut prin dehidrohalogenarea DDT-ului) n
organismele lor i este favorizat i de predispoziia organismului acestor psri la
acest tip de toxicitate.

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Bioacumularea este definit ca procesul prin care organismele vii
acumuleaz substane chimice att din mediu, ct i din hran.
Deoarce pentru a ptrunde din mediu n organism, substanele chimice
trebuie s traverseze stratul dublu fosfolipidic al membranelor
biologice, bioacumularea este direct corelat cu lipofilicitatea
(solubilitatea n lipide) a substanei chimice [51].
Mediul acvatic reprezint principalul loc n care substanele
chimice lipofile sunt transferate din mediul abiotic n biot. Aceasta se
datoreaz n special faptului c prin membranele respiratorii (branhii)
ale petilor trec cantiti imense de ap, ceea ce favorizeaz extracia
eficient a substanelor liposolubile prezente n ap. Bioacumularea
substanelor lipofile este extrem de eficient la organismele acvatice,
concentraia toxicului n aceste organisme ajungnd s depeasc cu
cteva ordine de mrime concentraia sa n mediul nconjurtor.
Capacitatea organismelor acvatice de a acumula xenobiotice lipofile
este direct proporional cu coninutul n grsimi al respectivelor
organisme, ntruct xenobioticele lipofile sunt stocate n esuturile
grase.

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Odat ptrunse ntr-un organism acvatic, substanele chimice
pot fi transferate de-a lungul lanului trofic, de la prad la
prdtor. Aa cum am artat deja, n cazul unei substane
lipofile, acest transfer poate s aib ca efect creterea
progresiv, cu fiecare verig a lanului trofic, a concentraiei de
substan lipofil n organism. Figura urmtoare ilustreaz acest
concept al bioacumulrii. Se consider un exemplu ipotetic al
unei substane lipofile ce are un factor de bioacumulare egal cu
2, indiferent dac sursa contaminrii cu aceast substan este
mediul acvatic sau o verig a lanului trofic. Se observ
amplificarea progresiv a bioacumulrii la fiecare verig a
lanului trofic, ajungndu-se in acest fel la o concentraie de
toxic mult mai mare n corpul vulturului de mare (captul
lanului trofic), comparativ cu concentraia de toxic din mediul
nconjurtor (apa i, respectiv, aerul n exemplul ales).

Transportul i transformrile substanelor


toxice n mediul nconjurtor
Ilustrarea conceptului
de bioacumulare.
Concentraiei de toxic lipofil
n mediu acvatic i s-a
atribuit n mod arbitrar
valoarea 1,
iar factorului de
bioacumulare
valoarea 2. Numerele
ncercuite reprezint valorile
concentraiilor de toxic
n organismele
corespunztoare
fiecreia dintre verigile
lanului trofic [1, Figure
26.3, pp. 469].

Referine bibliografice
[1]. E. Hodgson, A textbook of modern toxicology, 3rd Edition, Wiley

Interscience, 2004, pp 5-8.


[2]. J. Trevan, Proc. R. Soc. 101 B, 1927, 483-514.
[3]. C. D. Klassen, Principles of Toxicology in Toxicology: The Basic Science of
Poisons, 3rd Edition, Editors C.D. Klassen, M.O. Amdur, and J. Doull,
Macmillian, New York, 1986, pp. 11-32.
[4]. S. Balint, L. Tnasie, Statistic notie de curs, Universitatea de Vest din
Timioara, pp.12, web-ng.info.uvt.ro/~balint/files/statistica.pdf
[5]. S. S. Desphande, Handbook of Food Toxicology, Marcel Dekker, Ink, New
York, Basel, 2002, Table 6.4, pp. 133.
[6]. D. J. Finney, Probit Analysis, Cambridge: The University Press, 1971, pp 3334.
[7]. D. J. Finney, Arch. Toxicol., 56, 1985, 215-218.
[8]. C. I. Bliss, The Statistics of Bioassay, Academic Press, New York, 1952.
[9]. M. Roberts, C. B. C. Boyce, Principles of Biological Assay in Methods in
Microbiology, Edited by J. R. Norris and D. W. Ribbons, Volume 7A,
Academic Press, London and New York, 1972, pp. 153-191.

Referine bibliografice
[10]. J. T. Litchfield, J. W. Fertig, Johns Hopkins Hosp. Bull.,
69, 1941, 276-286.
[11]. M. N. Ghosh, Statistical Analysis in Fundamentals of
Experimental Pharmacology, 2nd Edition, Scientific Book
Agency, Calcutta, 1984, pp. 187-189.
[12]. S. P. McKee, S. A. Klein, Perception & Psychophysics, 37
(4), 1985, 286-298.
[13]. M. Weis Bentzon, P. Krag, Bull. Wld. Hlth. Org., 29,
1963, 745-751.
[14]. E. A. Heinrichs, S. Chelliah, S. L. Valencia, M. B. Arceo,
L. T. Fabellar, G. B. Aquino, S. Pickin, Manual for testing
insecticides on rice, International Rice Research Institute,
Manilla, Philippines, 1981, Appendix A, Table 8, pp. 106.

Referine bibliografice
[15]. J. T. Litchfield, F. A. Wilcoxon, J. Pharmacol. Exp. Ther., 96, 1949, 99-113.
[16]. F. W. H. Beamish, G. L. Mackie, K. Cottenie, R. J. Frank, M. T. Rush,
Biology of Polluted Waters Laboratory Manual, University of Guelph,
Guelph, Ontario, Canada, 2009.
[17]. M. C. Newman, Quantitative Ecotoxicology, CRC Press, 2013, pp. 144146.
[18]. T. A. Gossel, J. D. Bricker, Principles of Clinical Toxicology, Raven Press,
New York, 1984.
[19]. Hayes Handbook of Pesticide Toxicology, 3rd Edition, Volume1, Academic
Press, 2010, Table 1.2, pp. 25 i Table 1.5, pp. 49.
[20]. C. Lamanna, E. R. Hart, Toxicol. Appl. Pharmacol., 13, 1968, 307-315.

[21]. J. H. Duffus, Introduction to Toxicology in Fundamental toxicology, Edited


by J. H. Duffus and H. G. J. Worth, RSC Publishing, 2006, Table 1.1, pp. 2.

Referine bibliografice
[22]. T. C. Marrs, Toxicology of Organophosphate Nerve
Agents, in Chemical Warfare Agents Toxicology and
Treatment, 2nd Edition, Editors: T. C. Marrs, R. L. Maynard
and F. R. Sidell, Wiley, 2007, Table 5, pp. 197.
[23]. http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsId=9927707
[24]. Safety (MSDS) data for caffeine.
[25].http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/extoxnet/metirampropoxur/paraquat-ext.html
[26]. https://www.caymanchem.com/msdss/70260m.pdf
[27]. http://extoxnet.orst.edu/pips/carbaryl.htm
[28]. http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/extoxnet/24dcaptan/24d-ext.html

Referine bibliografice
[29].http://nepis.epa.gov/Exe/ZyNET.exe/9100YD4J.txt?ZyActionD=
ZyDocument&Client=EPA&Index=1986%20Thru%201990&Doc
s=&Query=&Time=&EndTime=&SearchMethod=1&TocRestrict=
n&Toc=&TocEntry=&QField=&QFieldYear=&QFieldMonth=&Q
FieldDay=&UseQField=&IntQFieldOp=0&ExtQFieldOp=0&Xml
Query=&File=D%3A%5CZYFILES%5CINDEX%20DATA%5C8
6THRU90%5CTXT%5C00000025%5C9100YD4J.txt&User=AN
ONYMOUS&Password=anonymous&SortMethod=h%7C&MaximumDocuments=1&FuzzyDegree=0&ImageQuality=r75g
8/r75g8/x150y150g16/i425&Display=p%7Cf&DefSeekPage=x&S
earchBack=ZyActionL&Back=ZyActionS&BackDesc=Results%2
0page&MaximumPages=1&ZyEntry=3
[30]. Safety (MSDS) data for sodium chloride
[31]. http://pmep.cce.cornell.edu/profiles/herb-growthreg/fattyalcohol-monuron/glyphosate/glyphos_prf_0285.html
[32]. http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsId=9926207

Referine bibliografice
[33]. http://www.nafaa.org/ethanol.pdf
[34].http://www.hmdb.ca/system/metabolites/msds/0
00/000/190/original/HMDB00258.pdf?13588959
07
[35].https://www.google.ro/url?sa=t&rct=j&q=&esr
c=s&source=web&cd=1&ved=0CC4QFjAA&url
=http%3A%2F%2Fwww.bugwood.org%2Fpat%2
Fpowerpoint%2F03.%2520Toxicology%2520%2520General.ppt&ei=F59hUfO6FOjL4AS2uIC
ABg&usg=AFQjCNF7nQEEzFv8R_uby_zo4cjz
NpE3Mw&sig2=_xdbrpNQ3FSeQyU5BpHsDw

Referine bibliografice
[36]. J. A. Timbrell, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa
Healthcare, New York, London, 2009, pp. 22-24.
[37]. F. Loghin, Toxicologie general, Editura Medical Universitar Iuliu
Haieganu, Cluj-Napoca, 2002, pp. 92-96.
[38]. http://2012books.lardbucket.org/books/general-chemistry-principles-patternsand-applications-v1.0/section_27_06.html
[39]. S. F. Zakrzewski, Environmental Toxicology, 3rd Edition, Oxford University
Press, 2002, pp. 24-25.
[40]. E. Z. Hanna, S. P. Chou, B. F. Grant, Alcohol Clin. Exp. Res. 21, 1997, 111-118.
[41]. A. Albert, Selective Toxicity, 5th Edition, Chapman and Hall, London, 1973.
[42]. T. R. Fukuto, Environmental Health Perspectives, 87, 1990, 245-254.
[43].http://www.emc.maricopa.edu/faculty/farabee/biobk/biobookendocr.html
[44]. http://click4biology.info/c4b/6/hum6.5.htm
[45]. http://moodle.rockyview.ab.ca/mod/book/print.php?id=58094

Referine bibliografice
[46]. G. M. Cooper, R. E. Hausman, The Cell A molecular Approach,
4th Edition, ASM Press, Whasington, D. C., Sinauer
Associates, Inc., Sunderland, Massachusetts, 2007, pp. 602-603.
[47]. W. G. Landis, M-H. Yu, Introduction to Environmental
Toxicology: Impacts of Chemical upon Ecological Systems, 3rd
Edition, Lewis Publishers, 2003, pp. 142-144.
[48]. D. Ciorba, A. Armencea, G. Gfu, P. David, F. Mihai, Ecoterra,
29, 2011, 13-16.
[49]. D. L. Nelson, M. M. Cox, Lehninger Principles of Biochemistry,
5th Edition, W. H. Freeman and Company, New York, 2008, pp.
23.
[50]. E. E. Hatch, J. R. Palmer, L. Titus-Ernstoff, JAMA, 280, 1998,
630-634.
[51]. F. L. McEwen, G. R. Stephenson, The Use and Significance of
Pesticides in the Environment, Wiley, New York, 1979.