MICROSCOPIOS

Dra. Jael Teresa de Jess Quintero Vargas

COMO ESTUDIAR LAS CLULAS

MICROSCOPA PTICA
Jons y Zacharias Janssen desarrollaron el
primer microscopio compuesto en 1595.

Galileo construyo un microscopio

compuesto
con
dos
lentes
montados uno en cada extremo
del tubo (observo Insectos).

Robert Hooke mejoro el diseo

del Microscopio Compuesto (30
X) y observo cortes mas finos. Se
le reconoce como la primera
persona que observ e identific
las clulas.

Anton
van
Leeuwenhoek
construy microscopios simples
(con un solo lente) que
aumentaban 200 veces los
objetos,
observ
clulas
sanguneas,
bacterias
y
organismos simples en gotas de
agua.

Tambin observ por primera vez

a G. lamblia (1681).

MICROSCPIO MODERNO
MICROSCOPIO INVERTIDO

MICROSCOPIO PTICO

MICROSCOPIO PTICO
PARTE MECANICA
PLATINA: Soporte en
que se sitan las
preparaciones.
BRAZO:
Sirve para
unir el tubo con la
platina
PIE: Base de sujecin
del microscopio

PARTE PTICA
OCULAR: Es el lente por
donde se mira.
OBJETIVOS:
Lentes de
diferentes aumentos 5X,
10X, 40X.
REVOLVER: Pieza mvil
que permite colocar los
objetivos
en
posicin
correcta.
TUBO: Conecta el Ocular y
el objetivo. Puede girar.

I)

MICROSCOPA EN CONTRASTE DE
FASES

La Microscopa en contraste de Fases fue descrita

por primera vez por Zernike en 1932 (Premio Nobel
en Fsica).

Permite el anlisis de estructuras celulares vivas,

sin la necesidad de fijarlas, teirlas y sin la prdida
de resolucin.

Se basa en el retraso que se produce en las ondas

de luz al atravesar objetos en distintos ndices de
refraccin aprovechando y amplificando dichos
retrasos.

Las partes oscuras en una

imagen corresponden a las
porciones
densas
del
espcimen;
las
partes
claras de la imagen
corresponden a porciones
menos
densas.

Jael Quintero

Contraste de Fases 400X

Contraste de Fases Paramecio 400X

II) MICROSCOPIA DE CONTRASTE DIFERENCIAL

DE INTERFERENCIA (DIC)

Tambin
denominada
de
Nomarski, utiliza dos rayos de
luz polarizada y las imgenes
combinadas aparecen como si
la clula estuviera proyectando
sombras hacia un lado.

Fue diseado para observar relieves de clulas o especmenes muy

difciles de manejar, es muy utilizado en tratamientos de fertilizacin invitro actuales.

III) MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Y

EPIFLUORESCENCIA

DIFERENCIA ENTRE M. PTICO

Y FLUORESCENCIA?

EJERCICIO
EN GRUPOS DE 5 DISCUTAN Y DEFINAN EL
PROTOCOLO
PARA
DETECTAR
UNA
PROTEINA CITOPLASMATICA,
E INDIQUE
COMO LA OBSERVARIA.
Recuerde: Las clulas son translcidas

30 min

Los electrones son excitados a estados vibracionales y

rotacionales ms altos y cuando vuelven a su estado
fundamental emiten la energa de excitacin en forma de
radiacin.

-9

-8

10 - 10

FIT-C
DAPI
PE
IP
GFP
ALEXA FLUOR 405

490
350
545
536
395, 475
401

525
470
576
617
510
421

IV)

MICROSCOPIA CONFOCAL

Negro Sudn
Azul de Coomassie
Hematoxiolina
Eosina

Lpidos
NH2
DNA, RNA, Protenas c.
+

FOSFORESCENCIA

TERMOLUMINISCENCIA
Se trata de la emisin de una energa previamente absorbida como
resultado de un estmulo trmico

FLUORESCENCIA
Fluorita

MICROSCOPIA ELECTRNICA

SEM
(SCANNING ELECTRON
MICROSCOPY)

MICROSCOPA DE BARRIDO

TEM
(TRANSMISSION ELECTRON
MICROSCOPY)

MICROSCIPA DE TRANSMISIN

SEM
(SCANNING ELECTRON MICROSCOPY)

TEM
(TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPY)

FRACCIONAMIENTO CELULAR.
CICLO CELULAR

El perodo G1, llamado primera fase de crecimiento, durante la cual las

molculas y estructuras citoplasmticas aumentan.

El perodo S, o de sntesis, durante la cual los cromosomas se

duplican.

El perodo G2, o segunda fase de crecimiento, durante la cual

comienza la condensacin de los cromosomas y el ensamblaje de las
estructuras especiales requeridas para la mitosis.

La mitosis, durante la cual los cromosomas duplicados son distribuidos

entre dos ncleos hijos.

Las tres primeras fases del ciclo celular se conocen, colectivamente

como interfase.

FRACCIONAMIENTO CELULAR.

Consiste en la rotura de las clulas mediante un proceso

osmtico, ultrasonidos, lisis enzimtica de manera
mecnica, y posteriormente una centrifugacin.
Tripsina
Quimiotripsina

INTRODUCCIN AL FRACCIONAMIENTO

SUBCELULAR.

Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos

etapas:
Rotura de las clulas o tejidos
Separacin de la fraccin deseada
Tcnicas de rotura de clulas y tejidos.

LOS PROCEDIMIENTOS DE HOMOGENIZACIN MS COMUNES SON:

Sonicacin.
Uso de detergentes.
Pasar las clulas a travs de orificios de dimetros
reducidos que provocan la rotura de las membranas
celulares.
Homogenizadores.

CENTRIFUGACIN

Una vez obtenido el lisado o homogenado celular

se ha de proceder a su fraccionamiento. Una de las
tcnicas mas empleadas es la centrifugacin.

CENTRIFUGA
Son

instrumentos que permite someter a las

muestras a intensas fuerzas. En una
centrifuga elemento determinante es el
rotor. Existe varios tipos.

Rotor

basculante.

Rotor

de ngulo fijo.

CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL.
Se

basa en la existencia de diferentes partculas

en la suspensin que difieren en su densidad de
la del medio.