REGULACIN

METABLICA

Prof. Italo Chiffelle G.

Bioqumico, Dr.

D- Glucosa
1a)

HEXOQUINASA

ATP

Glucosa-6P
Fase
Preparatoria

ISOMERASA

Fructosa-6P
FPK-1

ATP

Fructosa-1,6 biP
ALDOLASA

ISOMERASA

Dihidroxiacetona-P + Gliceraldehido-3P
DESHIDROGENASA

1,3-BiP Glicerato
ATP

FOSFO GLICERATO QUINASA

Fase de
Beneficios

3-P Glicerato

(x 2)

2-P Glicerato

FOSFO GLICERATO MUTASA

ENOLASA

Fosfoenolpiruvato
PIRUVATO QUINASA
ATP

Piruvato

1b)

EL ROL DEL FOSFATO EN LA GLICLISIS ES EL DE

MANTENER FOSFORILADOS CADA UNO DE LOS NUEVE
INTERMEDIARIOS DE LA RUTA, PORQUE DE ESTA MANERA:

a) Se encuentran cargados negativamente y no podrn salir de la clula,

a pesar de las diferencias de concentracin con el extracelular
(permitiendo, por ejemplo, capturar ms glucosa). De esta manera no
se gasta energa en retener los compuestos dentro de la clula
b) Se conserva la energa de enlace anhidro-fosfrico de molculas de
ATP en la energa de enlaces steres-fosfato de molculas, tales como,
Glucosa 6-P
c)

Muchas enzimas usan complejos en sus sitios activos, formados por

algunos grupos fosfato, lo que aumenta la energa de unin a la enzima
y por ende, permite aumentar la velocidad de reaccin y disminuir la
energa de activacin de la reaccin en cuestin.

2)

HIGADO
Glucgeno

Galactosa

Lactosa
Sacarosa

GLUCGENO FOSFORILASA

Glucosa 1-P
FOSFOGLUCOMUTASA

D- Glucosa

Glucosa-6P

HEXOQUINASA

D- Fructosa

Fructosa-6P

FRUCTO QUINASA
HEPATICA

Fructosa 1-P

Fructosa-1,6 diP

ALDOLASA

Galactosa

Galactosa 1-P
UDP- glu

UDP- galactosa +
Dihidroxiacetona-P
+

Gliceraldehdo

Gliceraldehdo-3P

Glucosa 1-P
UDP- glucosa
Glucosa 1-P

3) Efecto Pasteur

Pasteur descubri que la tasa y la cantidad total de glucosa

consumida en condiciones anaerbicas es 18 veces ms
grande que en condiciones aerbicas.
En condiciones anaerbicas, la ausencia de oxgeno obliga a la
clula a producir ATP sin utilizar la fosforilacin oxidativa,
puesto que el ltimo aceptor de electrones es esta molcula.
De esta manera, para producir ATP, el organismo estimula la
gliclisis, acumulndose Piruvato, el que formar lactato por
fermentacin lctica.

Cuando un tejido en el que est ocurriendo gliclisis es

expuesto a oxgeno, esta va metablica es inhibida. Cul es
la causa de esta inhibicin?

4) La regulacin de la gliclisis se efectua nivel de 4 enzimas:

a) Fosfofructoquinasa 1

Glucgeno

(Mayora Clulas)
Glucosa 1-P

D- Glucosa

Glucosa-6P

Glucagn
FBPasa 2

Fructosa- 2,6 diP

Fructosa-6P
FPK-2
FBPasa 1

ATP,
Citrato
AMP, ADP, Fru- 2,6 diP

FPK-1

AMP, ADP
ATP,
Citrato
Fructosa- 1,6 diP

b) Piruvato Quinasa

Glucgeno

(Mayora Clulas)
Glucosa 1-P

D- Glucosa

Glucosa-6P

Fructosa-6P
Fructosa- 1,6 biP

PEP

Piruvato Quinasa
ATP, Acetil CoA
Piruvato

c) Glucgeno Fosforilasa

Glucgeno

Msculo

Hgado

GF b (inactiva)
Fosforilasa b
quinasa
(inactiva)

GF a (activa)
AMP
Fosforilasa b
quinasa
(activa)

GF a (activa)
Glucosa

GF b inactiva
Fosforilasa b
quinasa
(inactiva)

Fosforilasa b
quinasa
(activa)

Glucosa 1-P

AMPc

AMPc

Glucosa-6P
Fosfatasa
Adrenalina
Fructosa-6P
Fructosa- 1,6 biP

PEP
Contina oxidndose

Piruvato

Glucagn

Glucosa a la sangre

d) Hexoquinasa

Msculo

Glucgeno

Hgado

Glucosa 1-P

D- Glucosa

Glucosa-6P
Hexoquinasa

Glucosa
Fructosa-6P
Fructosa- 1,6 biP

PEP
Piruvato

D- Glucosa
Hexoquinasa
(glucoquinasa)
Glucosa
sangunea

Comparacin de Hexoquinasa y Glucoquinasa en mamferos

ENZIMA

CARACTERISTICA

HEXOQUINASA
Localizacin
Sustrato
KM para glucosa
Producto de la reaccin
con Glucosa
Inhibida por
Glucosa-6P

GLUCOQUINASA

La mayoria de los tejido

(baja en Hgado)

Hgado

Muchas hexosas

Glucosa

0,1 mM
Glucosa-6P
S

10 mM
Glucosa-6P

No

La concentracin de glucosa en la sangre es 5 mM, valor que

es regulado por el hgado.

11) Relacin entre Fermentacin lactica y Gluconeognesis

Msculo: ATP producido por la

glicolisis por la rpida contraccin
Lactato

Glicogeno
ATP

Lactato

Glucosa

Sangre
Lactato
Glucosa
ATP
Hgado: ATP usado en sntesis de
glucosa durante la recuperacin

Fosfatos de Alta Energa

La necesidad de ATP en el msculo puede cambiar rpidamente.
El msculo en actividad mxima usa 1.000 mmol / min kg y la
concentracin de ATP es 3-5 mmol / kg de msculo, es la cantidad
para 10 contracciones y se agotara en 1 seg de actividad intensa
Los msculos esquelticos y cardacos tienen altas
cantidades de fosfato de creatina (25 mmol / kg). Esta sirve
para regenerar ATP, en la nica reaccin catalizada por la
creatina quinasa

Creatina-P + ADP

Creatina + ATP G= -12 kJ/mol

En el msculo: [Creatina-P]/[ATP] = 5

Otra forma de regenerar ATP es a travs de la reaccin catalizada

por la adenilato quinasa

2 ADP

ATP + AMP G= 0 (Reac. Isoergnica)

Adems el AMP es un activador de la fosfofructoquinasa

y por lo tanto promueve la gliclisis

ATP
AMP
ATP
Creatina
ATP

ADP
Adenilato quinasa

ADP

CONTRACCIN
Miosina ATPasa

ADP + P

Creatina quinasa

Creatina-P
ADP

COMPARACIN DEL MSCULO ESTRIADO ROJO Y BLANCO

CARACTERSTICAS

ROJO

BLANCO

Tamao Relativo
de la Fibra

Pequeo

Grande

Modo de contraccin

Lenta

Rpida (5 veces ms)

Vascularizacin

Intensa

Ms ligera

Mioglobina

Mucha

Poca

Mitocondrias
Principal combustible
almacenado
Principal fuente de ATP

Mucha

Poca

Clulas Grasas

Glucgeno del
msculo
Gluclisis

Oxidacin de
cidos Grasos

La coloracin del Msculo Rojo se debe a las altas concentraciones

de mioglobina y citocromo mitocondrial. Importante Maratn (Aerbico)
Msculo Blanco importante carreras de velocidad (Anaerbico)

CINTICA
ENZIMATICA

Prof. Italo Chiffelle G.

Bioqumico, Dr.

Las reacciones qumicas catalizadas en las clulas

suceden con una rpidez de 104 a 108 veces lo que es
posible reproducirlas en el tubo de ensayo
Reaccin: Sustrato

k directa

Producto

k inversa

Tubo de ensayo:
k directa
S k directa P
K equilibrio = [P]/[S] = k inversa
k inversa

El valor de K equilibrio es igual sin o con enzima

Ecuacin de Arrhenius:

k=Ae

-E/ RT

k: constante de velocidad
R: constante de los gases ideales
A: probabilidad que los choques den producto
E: energa de activacin
[Complejo Activado]#

E
n
e
r
g

E
E

P
Coordenada de reaccin

Factores que
afectan
las enzimas

TIPOS DE ENZIMAS:

1- Enzimas Cooperativas o Alostricas. Dan curvas de velocidad contra

sustrato que son Sigmoidales ms que hiperblicas, se denominan
enzimas de control o reguladoras y por lo general estn situadas en el
inicio o en los puntos de ramificacin de una ruta metablica.
Velocidad (P/t)

La grfica representa
una curva sigmoidal.

[S]

Lc 19:26. Yo les digo que a todo el que produce se le dar ms,

pero al que no tiene, se le quitar aun lo que tiene

2- Enzimas Michaelis-Menten. Dan curvas de velocidad contra

sustrato que son hiperblicas.
Velocidad (P/t)
V mx

La curva representa una hiprbola

rectangular. Es un comportamiento
tpico de una reaccin de saturacin

V mx/ 2

[S]

KM

Bases mecansticas de la ecuacin de Michaelis-Menten

Michaelis-Menten establecieron los siguientes equilibrios:

S+E

K asociacin

[ES]#

K cataltica

P+E

K disociacin

K disociacin= [E] [S]/ [ES] = Ks

ES es un complejo activado con uniones no covalente
y d[ES]/dt=0 (Estado estacionario).

Velocidad = K cataltica [ES]

[E total] = [E libre] + [ES] [E libre] = [E total] - [ES]
Ks=[E total - ES] [S / [ES Ks [ES =[E total - ES] [S
Ks [ES =[E total] [S - [ES] [S

[ES Ks + [S = [E total] [S
[ES = [E total] [S/ Ks + [S

Velocidad = K cataltica {[E total] [S/ Ks + [S}

Por analoga: K catal [E total] = V mxima
Velocidad = V mx [S/ {KM + [S}

Ecuacin de
Michaelis-Menten Velocidad = V mx [S/ {KM + [S}

Metodologa de Lineweaver-Burk:
Se determina el recproco de la ecuacin anterior
y se tiene una ecuacin lineal

1/ V = KM / V mx [S + 1 / V mx
1/ V
Pendiente= KM / V mx
1/V mx
1/ [S]
- 1/KM

Metodologa de Hanes-Woolf:
Se multiplica la ecuacin anterior por la concentracin del
sustrato, S. Se tiene una ecuacin lineal y el error experimental
se hace menor.

[S / V = KM / V mx + [S / V mx
[S] / V
Pendiente= 1/ V mx

KM/ V mx
[S]
- KM
Con cualquiera de las dos ltimas metodologas (Ec. Lineales) se
tienen valores ms confiables de KM y V mx, que en la forma
directa (Ec. de una hiprbola).

Inhibicin Enzimtica-Ecuaciones
Tipos de inhibidores reversibles:
Competitivo (I + E)
Acompetitivo (I + ES)
No-competitivo (I + E + ES)
Mixto
Inhibidor Competitivo:

[ES]#

S+E
+
I

KEI= [E] [I]/ [EI] y

KEI

EI

P+E

[Etotal] = [E]+[ES]+[EI]

[ES]= [Et] [S]/ KM+[S] donde

KM= KM(1+[I]/ KEI)
V = V mx [S]/ KM+ [S]

Inhibidor Competitivo:

[ES]#

S+E
+
I

[Etotal] = [E]+[ES]+[EI]
[ES]= [Et] [S]/ KM+[S]
donde KM= KM(1+[I]/ KEI)

KEI

V = V mx [S]/ KM+ [S]

EI

1/ V

1/V mx

P+E

KEI= [E] [I]/ [EI] y

[I]= 4 KM
[I]= KM
[I]= 0
Inhibicin Competitiva: Rectas
Convergentes en ORDENADA
KM si [I]

1/ [S]
- 1/KM

Inhibidor Acompetitivo:

[ES]#
+
I
KESI
ESI

S+E

1/ V

1/V mx

KESI= [ES] [I]/ [ESI] y

P+E

[E total] = [E]+[ES]+[ESI]
[E t] [S]/(1+[I]/ KESI)

[ES]= K

V = V mx [S]/ KM+ [S]

Donde
V mx= V mx/ (1+[I]/ KESI)
[I]= 4 KM
[I]= KM y KM= KM(1+[I]/ KESI)

[I]= 0
Inhibicin Acompetitiva:
Rectas Paralelas
KM y V mx si [I]

1/ [S]
- 1/KM

/(1+[I]/KESI)+[S]

Inhibidor No-competitivo:

[ES]#
+
I
KESI
ESI

S+E
+
I
KEI
EI

1/ V

Si KI=KESI= KEI y

P + E [E total] = [E]+[ES]+[EI]+ [ESI]

[E t] [S]/(1+[I]/ KI)

[ES]=

KM +[S]

V = V mx [S]/ KM+ [S]

[I]= 4 KM
[I]= KM
[I]= 0

Inhibicin No-competitiva:
Rectas Convergentes en ABSCISA
1/ [S]
- 1/KM

Caractersticas de los Diferentes Tipos de Inhibidores

Tipo de
inhibicin

Inhibidor se
Efecto aparente Efecto aparente
combina con: sobre V mx.
sobre KM

Competitiva

Ninguno

Acompetitiva

ES

No-competitiva:
a) Simple
(KESI =KEI)

E y ES

Ninguno

b) Mixta 1
(KESI KEI)

c) Mixta 2
(KESI KEI)

Efecto sobre las

grficas 1/V v/s 1/ [S]
CONVERGENTE EN
el eje de la ORDENADA
Rectas PARALELAS

CONVERGENTE EN
el eje de la ABSCISA

CONVERGENTE por
ENCIMA de la ABSCISA
CONVERGENTE por
DEBAJO de la ABSCISA

Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una

reaccin catalizada enzimaticamente sobre un solo sustrato,
obtenindose los siguientes resultados:
Concentracin de
sustrato [S] (mM)
0,05

Concentracin del Inhibidor [I] (mM)

0
0,5
Velocidad de reaccin (M/ min)
0,33
0,20

1,0
0,14

0,10

0,50

0,33

0,25

0,20

0,67

0,50

0,40

0,40

0,80

0,67

0,57

0,80

0,83

0,71

0,63

a) Determine KM y V mxima de la enzima

b) Qu tipo de inhibidor est presente

Solucin)

a) Primero se determina las constantes a travs del mtodo de los

recprocos.
1/ v

1/ [S]
20

[I]= 0
3

0,5
5

1,0
7

10

1,5

2,5

2,5

1,3

1,5

1,8

1,25

1,2

1,4

1,6

1/ v
Interseccin:
-1/KM= -10
KM=0,1

Interseccin:
1/Vmx= 0,93
V mx=1,08

10

[I]= 1

[I]= 0,5
5
[I]= 0

-10

-5

10

1/ [S]

20

Del grfico se ve que V mxima no varia pero si KM con la

presencia del inhibidor, luego el tipo de inhibicin es competitiva

Caractersticas de los Diferentes Tipos de Inhibidores

Tipo de
inhibicin

Inhibidor se
Efecto aparente Efecto aparente
combina con: sobre V mx.
sobre KM

Competitiva

Ninguno

Acompetitiva

ES

No-competitiva:
a) Simple
(KESI =KEI)

E y ES

Ninguno

b) Mixta 1
(KESI KEI)

c) Mixta 2
(KESI KEI)

Efecto sobre las

grficas 1/V v/s 1/ [S]
CONVERGENTE EN
el eje de la ORDENADA
Rectas PARALELAS

CONVERGENTE EN
el eje de la ABSCISA

CONVERGENTE por
ENCIMA de la ABSCISA
CONVERGENTE por
DEBAJO de la ABSCISA