LABORATOR NR.

7
TEHNICI SPECIALE
DE COLORARE

Colorarea germenilor acidoalcoolo rezistenti

Majoritatea germenilor acido-alcoolo
rezistenti cresc foarte greoi;
- de aceea aceste coloraii au un rol
important n diagnosticul timpuriu
al infeciilor.
- microscopia - cea mai veche,
uoar, rapid i necostisitoare
procedur pentru detecia n
laborator a acestor bacili. Nu
trebuie ns utilizat ca nlocuitor al
cultivrii.

Avantaje
Ofer un diagnostic prezumtiv al
diagnosticului
bolilor
produse
de
micobacterii.
2- Cazurile pozitive/infecioase pot fi rapid
identificate.
3- Poate fi utilizat pentru a urmri succesul
chemoterapiei la pacienii tuberculoi.
4- Are o importan vital pentru pacienii
externai din spital sau care se rentorc la
serviciu.
5- Poate confirma c n culturi cresc ntradevr acido-rezisteni.
1-

Coloratia Ziehl-Neelsen
- Ehrlich - 1882 descoper natura
acidorezistent
Franz Ziehl - 1882
F. Neelsen n 1883 a modificat-o
Coloraia Ziehl-Neelsen

Coloratia Ziehl-Neelsen
Se foloseste pentru colorarea germenilor
din genul Mycobacterium
Acestia nu se coloreaza prin tehnici
uzuale datorita prezentei unor
componenti lipidocerosi: acidul micolinic
Principiul colorarii se bazeaza pe
patrunderea fuxinei incalzite la nivelul
peretelui celular si legarea de acidul
micolinic (legatura stabila la tratare cu
acizi si alcooli).

Coloraia Ziehl - Neelsen (WHO)

solutii necesare
Solutie de fuxina concentrata (fuxina
Ziehl 1%)
Acid sulfuric diluat
Solutie de albastru de metilen 1%

Tehnica de colorare
PASUL I: flambai lamele pentru
fixarea prin cldur

PASUL 2: Inundai lama cu fuxin Ziehl

Asigurai-v c adugai destul colorant
pentru a menine lama acoperit n
timpul procesului de colorare

PASUL 3: Utiliznd un bec Bunsen

nclzii uor lama pn la apariia
vaporilor. Meninei nclzirea pentru
5 minute nclzind intermitent
lamele
Atenie: o flacr prea puternic poate conduce la
spargerea lamelor!

PASUL 4: Splai lama cu ap.

PASUL 5: Inundai lama cu acid sulfuric

1/4 i meninei decolorarea pentru 15-20
minute.
- procesul poate fi repetat de 2-3 ori pana
cand lama apare curata fara precipitate
Mai jos sunt ex. de lame insuficient i
suficient inundate cu acid.

PASUL 6: Splai lama bine cu ap i

apoi ndeprtai excesul.

PASUL 7: Inundai lama cu albastru

de metilen. Meninei recolorarea
pentru 1 minut.

PASUL 8: Splai lama bine cu ap.

Rezultatul colorarii
Micobacteriile se coloreaza in rosu
stralucitor
Alte bacterii si componentele
celulare se coloreaza in albastru
La unele micobacterii
intracitoplasmatic apar granulatii de
culoare rosu inchis (granulatii Much)

Dac toi paii au fost realizai corect,

ar trebui s obinem o lam care s
prezinte urmtorul aspect.

Parametri de control ai calitii

Control Negativ
Rezultat Acceptabil:

Fond de culoare numai albastr

Rezultat Inacceptabil:

Rmne rou dup decolorare. Fondul

nu este suficient decolorat

Parametri de control ai calitii

Control Pozitiv
Rezultat Acceptabil:

Bacili roii pe un fond albastru

Rezultat Inacceptabil:

Bacili nu sunt colorai n rou iar fondul

nu este suficient decolorat
Resurse: http://secure.provlab.ab.ca

Colorarea brucelelor
Bruceloza zoonoza grava, cu
afinitate pentru aparatul genital, la
femele - avort si retentii plcentare iar
la masculi orhite, orhiepididimite
Ca si micobacteriile, brucelele
prezinta un oarecare grad de acidoalcoolo-rezistenta, dar se folosesc
acizi slabi pentru diferentiere

Coloratia OMS
Se aplica mai ales pentru colorarea
brucelelor din materialele patologice
Solutii necesare:
Fuxina diluata 1/10
Acid acetic 0,5 %
Albastru de metilen 1%.

Tehnica de colorare
Frotiul uscat si fixat se acopera cu fuxina
diluata 1 minut (colorare)
Se face diferentierea cu acid acetic 30
secunde
Se spala frotiul prin acoperirea lamei cu
apa distilata 1-3 minute
Recolorare cu albastru de metilen 30
secunde 1 minut
Spalare, uscare si examinare cu imersie

Rezultatul colorarii
Germenii din
genul Brucella se
coloreaza in rosu
aprins
Germenii altor
genuri se
coloreaza in
albastru

Leptospira

Leptospiroza
simptome
asemntoare gripei
boal sistemic sever
* rinichi
* creier
* ochi

Morfologie
0,1-0,2 x 6-20 m;
spire fine, unul
sau ambele capete
sunt obinuit sub
form de crlig;
culoare
maro
nchis la colorarea
prin
impregnare
argentic
(TribondeauFontana),
Gramnegative.

Transmiterea
urin infectat
roztoare
Animale de ferm

ap

Prin pielea lezionat.

Epidemiologie
zoonoz ubicvitar
gazde animale:
obolani, oareci,
roztoare slbatice,
cini, porci i bovine
La om - accidental

Coloratia Tribondeau-Fontana
(impregnare argentica)
Leptospirele germeni spiralati lungi
si f subtiri, necesita ingrosarea
structurii pentru vizualizare
Solutii necesare:
Lichid Ruge
Alcool de 96
Solutie mordanta (acid tanic si fenol)
Solutie argentica fontana

Tehnica de colorare
Frotiul uscat si nefixat se acopera cu:

Lichid Ruge 5 min (rol de fixare)

Se inlatura si se adauga iar pentru 5 min
Se spala cu alcool de 96 cateva secunde
Se acopera lama cu solutie mordanta
Se incalzeste la aparitie de vapori
Se spala cu apa distilata
Se acopera cu solutie argentica Fontana
Se incalzeste la emisie de vapori 20-30 sec.
repetand impregnarea de 2-3 ori (pana frotiul
capata un aspect metalic)
spalare finala, uscare si examinare cu imersie.

Rezultatul colorarii
Leptospirele se coloreaza in brun
Au aspectul unor filamente cu
capetele sub forma de carlig
(croseta)
Fondul preparatului se coloreaza in
galben

Rezultatul colorarii