Enzimas de restriccin

Q.B.P.

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M A R I O RO Q U E A L O N S O
J O R GE KA RL O O V A L L E

Caractersticas Generales
Las enzimas de restriccin, tambin conocidas como
endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces
fosfodister del material gentico a partir de una
secuencia que reconocen. Las mismas permiten
cortar ADN de hebra doble, donde reconocen
secuencias palindrmicas (secuencias que se leen
igual en ambas direcciones).

Caractersticas Generales

Llamadas enzimas de restriccin porque

restringen la actividad de bacterifagos
Sistema inmunolgico de las bacterias
Metilasa reconoce la misma secuencia en el DNA de
la bacteria y lo metila
enzimas de restriccin solo atacan secuencias no
metiladas (restriction/modification systems)

Nomenclatura
1.

Tres letras que corresponden al nombre cientfico del

microorganismo (ej. Escherichia coli (Eco); Haempphilus influenzae
(Hin) )
2. La cepa o estirpe si la hubiese (ej. EcoR, aislada de la cepa RY13 de
E. coli )
3. En nmeros romanos, un nmero para distinguir si hay ms de
una endonucleasa aislada de esa misma especie. No confundir
con el tipo de enzima de restriccin.
4. Todas deberan llevar delante una R de restriccin o un M de metilasa
segn la funcin de la enzima, pero generalmente se omite.
Enzima

Origen Bacteriano

Sitio de Reconocimiento

Resultado del Corte

EcoRI

Escherichia coli

5'GAATTC 3'CTTAAG

5'---G AATTC---3
3'---CTTAA G---5'

BamHI

Bacillus
amyloliquefaciens

5'GGATCC 3'CCTAGG

5'---G GATCC---3'
3'---CCTAG G---5'

DpnI*

Diplococcus
pneumoniae

CH3 | 5'GATC 3'CTAG | CH3

CH3 | 5'---GA TC---3'

3'---CT AG---5' | CH3

Tipos de enzimas de restriccin

Diferentes tipos:

Tipo I Reconoce secuencias especificas y cortan el DNA

en sitios no especficos > de 1,000 pb
Tipo II Reconoce secuencias palindrmicas y cortan
dentro de la secuencia
Tipo III Reconocen secuencias especificas de 5-7 pb y
cortan de 24-27 pb down stream del sitio
Las enzimas de restriccin Tipo II son las mas utilizadas en la
biotecnologa ya que reconocen y cortan dentro de las
secuencias especificas

Accin de las enzimas de restriccin TipoII

Mapa de restriccin
Un patrn de ADN generado mediante electroforesis que se

produce despus de cortar con una enzima de restriccin.

La representacin de una molcula de ADN, ya sea circular
o lineal, donde se indiquen los sitios de restriccin que
poseen, se denomina mapa de restriccin.

Vectores de clonacin
Son molculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que
llevan insertados mediante tcnicas de ADN recombinante.
Para que sirva de vector, una molcula debe ser capaz de replicarse junto con el
fragmento de ADN que transporta. Tambin tiene que tener secuencias de
reconocimiento que permitan la insercin del fragmento de ADN a clonar.
Para insertar un fragmento de ADN al vector, se utiliza una enzima de restriccin, y
se mezcla con fragmentos de ADN producidos con la misma enzima.
Los vectores que transportan un fragmento insertado se denominan vectores
recombinantes.

Tipos de Vectores

Aplicaciones de las enzimas de restriccin

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o

bacterifago.
Fragmentar DNA genmico para separacin de
electroforesis y Southern Blot.
Generacin de fragmentos para ser usados como
sondas marcadas en Southern y Northern
blotting.
Generacin de fragmentos para ser subclonados en
los vectores apropiados, creacin de DNA
recombinante

Aplicaciones de las enzimas de restriccin

Mecanismos de regulacin y expresin gnica
Mapeo y cartografa de genes
Diagnstico de enfermedades genticas con cambio

en la secuencia de DNA
Desarrollo de protenas recombinantes