Produccin de

enzimas
Leidys Ballesteros M
Daniela Luna M
1
Jorge Viloria R
Huber Avila R

Qu son las enzimas ?

Son molculas de naturaleza proteica que
controlan las reacciones bioqumicas.
Tipos de enzimas
Intracelulares:
Son responsables de los procesos de degradacin
celular

Extracelulares:

Cumplen procesos metablicos catalticos

destinados a la degradacin de materia en energa
qumica
2

Fuentes de enzimas

Animal
Vegetal
Microbiana:
o Los microorganismos se reproducen a ritmo

acelerado
o Fciles de manipular genticamente
o Crecen en amplio rango de condiciones
ambientales.

Produccin microbiana
1.
2.
3.
4.

Seleccin del microorganismo

Cultivo
Extraccin
Purificacin

Produccin microbiana
1.
2.
3.
4.

Seleccin del microorganismo

Cultivo
Extraccin
Purificacin

Seleccin del microorganismo y

cultivo

El medio de cultivo es la principal manipulacin

ambiental que se puede efectuar.

Este debe proporcionar los nutrientes necesarios

al crecimiento del microorganismo y produccin
de la enzima deseada.

Como base inicial del diseo se puede considerar

la composicin elemental del microorganismo a
utilizar.

Produccin microbiana

Seleccin del microorganismo

Cultivo
Extraccin
Purificacin

Extraccin
ENZ. EXTRACELULARES
Torta
Celular
Residual

ENZ. INTRACELULARES

Fermentacin

Fermentacin

Sep. Slido-Liquido

Sep. Slido-Liquido

Concentracin

(Almacenamiento)

Purificacin o
Formulacin

Extraccin

Caldo
Gastado
Tejido
vegetal o
animal

Sep. Slido-Liquido
Concentracin
Purificacin o
Formulacin

Extraccin de Enzimas extracelulares

Separacin solido-liquido

Las operaciones ms empleadas (clsicas)

son la filtracin y la centrifugacin. Otras
alternativas de separacin son: filtracin
cruzada o tangencial y flotacin.
La filtracin cruzada tangencial, empleando
membranas micro porosas, es una alternativa
interesante en la separacin de clulas como
tambin de fragmentos celulares.
9

Extraccin
ENZ. EXTRACELULARES
Torta
Celular
Residual

ENZ. INTRACELULARES

Fermentacin

Fermentacin

Sep. Slido-Liquido

Sep. Slido-Liquido

Concentracin

(Almacenamiento)

Purificacin o
Formulacin

Extraccin

Caldo
Gastado
Tejido
vegetal o
animal

Sep. Slido-Liquido
Concentracin
Purificacin o
Formulacin

10

Extraccin de enzimas intracelulares

Separacin solido-liquido : En los mtodos fsicos

tendremos:

Presin: El proceso de extraccin es sumamente marcado por la presin

de operacin del equipo, con la desventaja que altas presiones implican
altas temperaturas (luego mayor refrigeracin).
Homogenizacin: Estos son equipos tradicionales en la industria
alimentaria, fcilmente adaptables a la disrupcin celular.
Molienda: La mayor parte de los molinos son de bolas de pequeo
tamao, donde la disrupcin se logra por una combinacin de esfuerzos
de corte y compresin.
Sonicacin: La disrupcin celular por ultrasonido, creacin de zonas de
enrarecimiento en el seno del liquido, seguido de fuertes compresiones
que colapsan las burbujas, lo que produce ondas de choque. El sistema
es muy eficaz a nivel de laboratorios, pero su escalamiento a nivel
industrial a ofrecido dificultades.
11

En los mtodos no fsicos tendremos:

Digestin qumica: Se ha reportado la utilizacin de
solventes orgnicos. Las clulas son tratadas con altas
concentraciones de etanol, metanol e isopropanol y luego re
suspendidas en tampn. Pero el efecto de inactivacin y alto
costo de los solventes, no torna esta tcnica
econmicamente atractiva.
Digestin
enzimtica:
Ciertos
microorganismos
(levaduras y algunos bacilos) son capaces de autolisar, o
sea, producir enzimas en ciertas condiciones fisiolgicas
que producen una digestin total/parcial de la pared celular.
Este mtodo es interesante por su bajo costo y facilidad de
escalamiento a nivel industrial.
12

 Concentracin

Por lo general, las enzimas se encuentran muy

diluidas en el caldo, despus de la etapa de
separacin slido-liquido, como para poder ser
formulado o sometido a purificacin.
El sistema tradicional de concentracin es la
evaporacin a vaco, para minimizar las perdidas de
actividad por desnaturalizacin trmica.
Otros mtodos alternativos son la cristalizacin, la
liofilizacin y la flotacin.
13

Produccin microbiana

Seleccin del microorganismo

Cultivo
Extraccin
Purificacin

14

Purificacin
La produccin masiva de enzimas se hace, por general,
bajo el criterio de mnimo nivel de purificacin
compatible con la utilizacin que la enzima. Esto
significa que el proceso de purificacin ser, por
general, muy rudimentario inexistente.
A escala de laboratorio, la purificacin se hace con una
serie de etapas, donde los contaminantes van siendo
subsecuentemente removidos, aumentando la
actividad especifica de la enzima. Pero cada etapa
significa, sin embargo, una perdida de actividad, lo que
hace esta estrategia no ser muy adecuada a nivel
industrial.
15

Fuentes de
enzimas
16

Animales
-Descubrimiento
de enzimas
digestivas siglo
XIX.
-Se preparan de
animales recin
sacrificados.

17

ENZIMAS COMUNMENTE OBTENIDAS

DE ANIMALES
ENZIMA

FUENTE

- AMILASA

PANCREAS

LIPASA

PANCREAS BOVINO/PORCINO

LISOZIMA

ALBUMINA DE HUEVOS DE
BOVINO

FOSFOLIPASA A

PANCREAS DE BOVINO

TRIPSINA

PANCREAS DE BOVINO/PORCINO

QUIMOTRIPSINA

PANCREAS DE BOVINO/PORCINO

PEPSINA

MUCOSA BOVINA

RENINA

BOVINO

18

VEGETAL
-Plantas fuentes
potenciales de
enzimas a escala
industrial.
-La extraccin de
enzimas a partir de
plantas es a
menudo difcil y
requiere equipo
pesado

19

ENZIMAS COMUNMENTE OBTENIDAS

DE PLANTAS

ENZIMA

FUENTE

- AMILASA

GRANO DE CEBADA

PEROXIDASA

RAIZ DE RABANO

PAPAINA

LATEX DEL ARBOL DEPAPAYA

BROMELINA

TALLO DE LAS PIAS

FICINA

HIGUERA

20

MICROBIANAS
-Pueden mantenerse bajo

estrecho control.
-Las concentraciones de
enzimas y, por lo tanto, la
productividad, se pueden
manipular en forma
gentica y ambiental.
-Produccin a grandes
cantidades bajos costos.
-Alto rendimiento y
estabilidad-

21

ENZIMAS CONUNMENTE OBTENIDAS

DE MICROORGANISMOS
ENZIMA

FUENTE

APLICACION

Amilasa

Bacillus subtilis
Asperyillusoryzae
Penicillumroqueforti
Aspergillusniger

Desaprestado de
textiles, licuefaccin
de almidn,
produccin de
glucosa.

Pnicinilasa

Bacillus subtilis

Degradacin de
penicilina.

Invertasa

Asperyillusoryzae
Saccharomyces
cerevisiae

Industria de la
confitera

Celulasa

Aspergillusniger
Trichoderma sp.

Disminucin de la
viscosidad, auxiliares
en la digestin

Pectinasa

Aspergillusniger

Clasificacin de vinos
y jugos de fruta

proteasa

Clostridumsp.

22
Suavizante auxiliar de

Bromelina
Es unaenzimacon
accin proteoltica.
separada del jugo de
los tallos de pia por
precipitacin en una
solucin de metanol.
Ampliamente utilizada
en la industria de
alimentos

23

Planta de produccin
de Bromelina
La descripcin del
proceso revela un
proceso eficiente y
automtico para la
produccin de
bromelina.
Muchos factores de
capital,
mantenimiento
,materia prima hacen
dela produccin de
bromelina algo muy
factible

24

Descripcin de proceso

Pretratami
ento

Purificacin

Destilacin

Secado y
empaqu
e

25

Pretratamiento
Las pias son cosechadas
en diferentes localidades
y en diferentes pocas del
ao.
El tallo debe ser
procesado
inmediatamente despus
de cosechado .
Una limpieza minuciosa
es requerida cuando
llegan a la planta.
Luego son raspados y
cortados en trozos para
un fcil manejo.
El jugo es separado
desde los tallos pasando a
travs de la prensa de
tornillo.

26

Descripcin de proceso

Pretratami
ento

Purificacin

Destilacin

Secado y
empaqu
e

27

Purificacin
El jugo de los tallos de
pia es tamizado y
luego es tratado con
una solucin de metanol
para la parte coagulada
de la materia coloidal,
precipitando algunas de
las impurezas y
cambiando el valor del
pH.
Luego, la solucin es
mezclada con aditivos y
asentado en grandes
asientos continuos o
espesadores.
28

Descripcin de proceso

Pretratami
ento

Purificacin

Destilacin

Secado y
empaqu
e

29

Destilacin
Los lquidos de fase
ligera desde el
decantado
conteniendo metanol
son recuperados en
una torre de
absorcin y
destilado, luego es
reciclado a travs del
proceso.

30

Descripcin de proceso

Pretratami
ento

Purificacin

Destilacin

Secado
y
empaqu
e

31

Secado y empaque
Los lquidos de fase
pesada desde el
decantado son
secados y
pulverizados como
polvo de bromelina.
Los cristales secos
pasan a travs de
una serie de tamices
o filtros.
Varias mquinas de
pesado y empaque
automticas
empaquetan la
bromelina en bolsas
y cajas.
32

CARACTERSTICAS GENERALES DE
LOS PROCESOS DE FERMENTACIN
PARA LA PRODUCCIN DE ENZIMAS
MICROBIANAS
33

TEMPERATURA
Temperatura optima de produccin de enzima

Temperatura optima de produccin de

microorganismo

-Amilasa
Bacillus
Coagulans

A 55C es 10 veces
mas estable la
produccin de la
enzima
34

pH
El pH de mximo crecimiento del microorganismo
productor
El pH de mxima produccin de enzima
El pH de mxima estabilidad de enzima
El pH de mxima actividad de enzima

35

pH
Fenilalanina amonio liasa
pH inicial de 7
pH final de 8
Dextransacarasa
pH=6.5 Mxima productividad
pH=5.2 Mxima actividad y
estabilidad
36

pH
Intracelulares, pH de produccin y crecimiento del
microorganismo no coincide con el pH de mxima
actividad.
Proteolticas, pH de mxima actividad no coincide
con el estabilidad.
Seleccin de acido y base. Hidrxido de sodio y
cido orto fosfrico.

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MEDIO DE CULTIVO
Inductores
2. Fuente de carbono
3. Iones
Los dems factores van a depender de la
produccin del microorganismo.
1.

38

AIREACIN

Aerobios
Micro aerobios
Anaerobios
Anaerobios estrictos

Coeficiente de transferencia de masa en la fase

liquida (KLa)

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