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TERESINA, 2013
Nas
indstrias
qumicas,
farmacuticas,
alimentcias, refinarias, petroqumicas, laboratrios
de anlises clnicas, ambiental e forense entre
outras, frequentemente necessrio separar,
isolar, purificar, identificar e quantificar os
componentes de misturas muitas vezes bastante
complexas.
IMPORTNCIA DA CROMATOGRAFIA
Velocidade
Poder de resoluo
Manuseio
de pequenas
amostra (10-9 10-15g)
Simplicidade da tcnica
quantidades
de
DESCRIO GERAL
DE HPLC
A amostra dissolvida em um solvente apropriado
COMPARATIVO HPLC / CG
INSTRUMENTAO EM HPLC
DIAGRAMA DE UM CROMATGRAFO A
LQUIDO
DIAGRAMA DETALHADO DE UM
HPLC
CONSIDERAO IMPORTANTE 1:
A fase mvel no pode conter partculas para
CONSIDERAO IMPORTANTE 2:
A fase mvel deve ser degaseificada para evitar a
BOMBA
CARACTERSTICAS PRINCIPAIS
Leva a fase mvel desde o reservatrio at a
coluna
Alta reprodutibilidade e exatido
Vazo contnua sem pulso de 0,01ml /min 10ml /min
Vazo
constante
independentemente
da
presso
Alta resistncia corroso inrcia qumica a
solventes comuns
Opera a altas presses (6000 psi)
CONSIDERAES IMPORTANTES
Vazo constante essencial para qualquer separao por
INJETOR
SISTEMA DE INTRODUO DE
AMOSTRA
Em HPLC, a injeo de amostra realizada com auxlio de vlvulas
especiais que permitem introduo com grande preciso e exatido de
volumes que variam, em geral, de 5 a 20l. A figura abaixo, mostra
um esquema de uma vlvula tpica nas posies de carga e de injeo.
COLUNAS CROMATOGRFICAS
COLUNAS ANALTICAS E PRECOLUNAS
A separao efetuada nas colunas cromatogrficas, feitas em
COMPRIMENTO: 3 60 cm
DIMETRO INTERNO: 0,2 8 mm
As colunas normais apresentam dimetro interno variando de 4
COLUNAS CROMATOGRFICAS
COLUNAS ANALTICAS CONSIDERAES
IMPORTANTES:
Como o tempo de reteno depende da temperatura,
O uso
DETECTORES
O detector um dispositivo conectado na sada da
TIPOS DE
DETECTORES
Os principais detectores utilizados em HPLC so:
ndice de refrao
Espectrofotometria UV-Visvel
Fluorescncia
Eletroqumico
Espectrometria de massa LC/MS
NDICE DE
REFRAO
detector.
um detector seletivo pois s detecta os compostos que absorvem
no comprimento de onda em que o detector for ajustado.
o detector mais utilizado em HPLC pois grande maioria das
substncias absorvem radiao UV. Exemplos de substncias so:
olefinas, aromticos, compostos contendo ligaes C=O, C=S, N=O.
CONSIDERAES IMPORTANTES:
A fase mvel utilizada no pode absorver no comprimento de onda
selecionado
A pureza da fase mvel extremamente importante (traos de
impurezas podem absorver intensamente no comprimento de onda
utilizado): UTILIZAR SOLVENTES GRAU HPLC
a190nm
00nm
DETECTORES ELETROQUMICOS
Baseia-se na possibilidade de muitos compostos serem
Coulomtrico
O elemento flui atravs de um eletrodo de grafite poroso onde
praticamente 100% das espcies eletroativas so oxidadas ou
reduzidas e portanto a sensibilidade muito maior (10-15mol =
fentomol)
AQUISIO DE DADOS
Atualmente
utilizam-se
softwares
que
permitem:
Processar os dados de cromatograma
Armazenar e registrar
Controlar
PARMETROS CROMATOGRFICOS
Uma
so:
TEMPO DE RETENO
FATOR DE SEPARAO
NMERO DE PRATOS
RESOLUO
TEMPO DE RETENO
Por
definio
chamamos
de
TEMPO
DE
RETENO, (tr), de uma substncia ao tempo
decorrido do instante em que a amostra foi
introduzida at o instante do mximo do pico.
NMERO DE PRATOS
Nmero indicativo da performance da coluna. a
RESOLUO
Fornece uma medida quantitativa da habilidade
FASE MVEL
ESCOLHA DO SOLVENTE EM HPLC
O sucesso da separao cromatogrfica s possvel se
SELEO DA FM NO DESENVOLVIMENTO
DO MTODO ANALTICO
ANLISE QUALITATIVA
A anlise qualitativa em HPLC tem por objetivo
qualitativa em identificaes no
rotineiras
Neste caso importante conhecer o mximo da
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