GENETICA BACTERIANA

Taller No. 4

Dr. Francisco Arocha

Medico Infectologo

GENETICA BACTERIANA
Genoma procariota:

Cromosoma bacteriano:
Caractersticas generales:

Carece de membrana nuclear

Longitud: 1,3 mm
Posee mltiples sitios de iniciacin de la
replicacin
Posee gyrasas
Es lineal
Tiempo de replicacin 18 minutos.

EL ADN

Semiconservativo

Conservativo

Dispersivo

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Genoma procariota:
Elementos Genticos:
Plsmidos:
Son elementos genticos extracromosomicos
circulares capaces de autoreplicarse
(replicn)
Trasmiten informacin como:

Resistencia a los antibiticos

Produccin de toxinas
Produccin de enzimas para el metabolismo
Produccin de bacteriocina
Pilis y adhesinas
Sideroforos
Enzimas catalticas

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Genoma procariota:
Elementos Genticos:
Transposones:
Son segmentos de ADN capaces de moverse
desde una posicin a otra del genoma o
desde el ADN cromosmico a un plsmido o
viceversa

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Genoma procariota:
Elementos Genticos:

Secuencias de insercin:
Son los transposones ms simples. Su
longitud oscila entre 150 y 1.500 pares de
base y poseen nicamente los genes
codificadores de las enzimas necesarias
para promover su propia transposicin,
adems tienen secuencias distintivas de
nucletidos en sus extremos
Son los responsables de las mutaciones por
insercin.

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Genoma procariota:
Elementos Genticos:
Bacterifagos: son virus que
infectan a las bacterias:
Lticos
Lisogenicos o temperados

Replicacin del Bacterifago T4

EsquemadelCiclodeReplicacindeunBacterifagoT4

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Mecanismos de regulacin de la
expresin gentica:
Operones:

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Mecanismos de regulacin de la
expresin gentica:
Operones:
Inducibles
Reprensibles

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:
Mutaciones:

Cualquier cambio en la secuencia

de base del ADN y que se
trasmiten de la clula madre a
la hija

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Mecanismos de Variabilidad gentica:
Mutaciones:
Tipos:
Silentes
Reemplazo
Supresin
Insercin
Inversin
Sentido errneo
Sin sentido

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:
Mutaciones:
Espontnea
Inducidas:

Calor
Luz ultravioleta
Radiacin ionizante
Qumicos (5-bromouracilo, bromuro de
etidio)

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:
Transformacin:
Es el paso del material gentico
de una bacteria muerta o lisada
a una bacteria viva

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:
Transformacin: Experimento de
Griffith

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:
Conjugacin

Es el paso de material gentico generalmente

extracromosomico de una bacteria a otra a
travs de un pili sexual
El plsmido que induce la formacin del pili
sexual se denomina F+ o factor de
fertilidad.
Cuando el gen F+ se integra al cromosoma se
denomina factor de fertilidad integrado Hfr.

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:

Transduccin .
Es la transferencia gentica
mediante bacterifagos

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Mecanismos de Variabilidad
gentica:

Transduccin.
El genoma de un fago puede ser ADN o
ARN monocatenario o bicatenario.
El ciclo vital puede ser ltico o
lisogenico

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Mecanismos de Variabilidad gentica:

Transduccin.

En la infeccin lisogenica el acido

nucleico del fago se integra a la
bacteria pero en lugar de trasformar
la clula en una fabrica de fagos, el
ADN del bacterifago se replica
como una parte integral del
cromosoma y agrega caractersticas
fenotipicas a la bacteria como
ejemplo el fago Beta del
Corinebacterium diphteriae

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:

Ingeniera gentica : es la aplicacin de

la ciencia basada en la gentica bacteriana

para el diagnostico de las enfermedades
infecciosas y su posible tratamiento.

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RECOMBINACION GENETICA:
Es el proceso de intercambio del
material gentico entre el ADN
exgeno y el endgeno que da como
resultado un cromosoma hibrido

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RECOMBINACION GENETICA:
tipos:
Homologa
Especifica para el sitio
ilegitima

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RECOMBINACION GENETICA:
Precombinacin homologa:
Ocurre por un fenmeno de entrecruzamiento
el cual es controlado por una protena RecA
para lo cual los dos segmentos debe
poseer cierto grado de homologia.

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RECOMBINACION
GENETICA:
Recombinacin especifica para el
sitio:
Ocurre por un grupo de varios mecanismos
independientes de RecA estas enzimas no
parten de la homologia de los segmentos
de ADN sino del reconocimientos de las
secuencias nicas de ADN que forman los
bordes de los sitios especficos.

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RECOMBINACION GENETICA:

RESISTENCIA A LOS ANTIBIOTICOS

Los plsmidos pueden ser nicos o mltiples y poseen genes
tra que le permiten pasar de una bacteria a otra por
conjugacin.
plsmidos R: Son plsmidos que incluyen genes capaces de
conferir resistencia a los antimicrobianos (factor R), estos
genes codifican enzimas que inactivan los antibiticos o
reducen la permeabilidad de la clula a ellos. Por lo
general trasmiten resistencia a mltiples antibiticos y
producen presin selectiva sobre las bacterias.
Las bacterias no patgenas sirven de reservorio a estos
plsmidos.
Factor de transferencia de resistencia o determinante r,
aumenta la capacidad de replicacin del plsmido.
Muchos factores R tienen secuencias de insercin y
transposones.
Los plsmidos se pueden detectar por electroforesis en gel
de agarosa o microscopia electrnica

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
Tcnicas de Hibridacin: La especificidad de

los nucletidos y las enzimas de restriccin

permiten que los fragmentos que contengan genes
especficos puedan ser detectados por tcnicas de
radioinmunoenzayo o inmunolgicas (anticuerpos
monoclonales). La tcnica mediante la cual se
fragmenta una seccin de ADN y se aparea con un
segmento conocido de ADN se conoce como
HIBRIDACION.

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
Sondas de Hibridacin: Son segmentos de ADN
marcados y especficos y permiten reconocer a una
parte del ADN.
Enzimas de restriccin: son enzimas que cortan el
ADN en sitios especficos por lo general formados
por 6 pares de bases.
Electroforesis en Gel: permite que los fragmentos de
ADN sea separados en base a su tamao y son
identificados por bromuro de etidio (agregado
fluorescente)

Sondas de hibridacin

Sondas de hibridacin

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APLICACIONES DE LA
BIOTECNOLOGIA MOLECULAR EN EL
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS:
CLONACION:
Cuando se fracciona un ADN pude originar mltiples
fragmentos y algunos pueden contener extremos
adhesivos y se pueden unir a un plsmido
convirtindolo en un plsmido recombinante, estos
plsmidos pueden ser introducidos en una clula
mediante transformacin o electroporacin.
Esta clula manipulada genticamente se denomina
clon.

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MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
CLONACION:
SECUENCIACIN: es el anlisis de la
estructura del ADN mediante enzimas de
restriccin y sondas
VECTORES DE CLONACIN: permiten la
insercin de ADN extrao en una clula:

plsmidos: pBR 322

Bacterifago: fago

Cosmidos

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APLICACIONES DE LA
BIOTECNOLOGIA MOLECULAR EN
EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS :
ADN recombinante:
Es la unin de un vector con un fragmento de
ADN

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
Es una tcnica enzimtico que nos permite fabricar In
vitro un numero tericamente ilimitado de copias de
una secuencia especifica de ADN conocida, gracias
a la replicacin cclica de tres pasos o reacciones
simples, en las cuales slo varia la temperatura de
incubacin.
Fue concebida por Mullis en 1983 y desarrollada 10
aos mas tarde

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MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
Aplicaciones en Medicina:

Estudiar alteraciones en un gen.

Diagnostico de enfermedades genticas como hemofilia,
anemia falciforme o corea.
Diagnostico de agentes infecciosos como virus de la
hepatitis, HIV, VPH, Herpes y Tuberculosis.
Estudio de los Oncogenes.
Estudio de los sistemas HLA.
Medicina forense.
Estudios de paternidad

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
TECNICA:
Extraccin del ADN:
La proteinasa K permite la obtencin de ADN de alto peso
molecular desprovisto de protenas y otros inhibidores
enzimticos.
La calidad y concentracin de ADN se realiza por
electroforesis en agarosa.
Preparacin de los Primers:
Los primers son secuencias especificas y conocidas de ADN
que previamente han sido marcados

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
TECNICA:
Componentes de la mezcla para Amplificacin:

Dos primers complementarios.

Oligonucleotidod (dATP, dCTP, dGTP y dTTP)
DNA palimerasa y buffer de reaccin (Thermus
aquaticus).
Cloruro de Magnesio

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APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA
MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
TECNICA:

Ciclos:
Desnaturalizacin del ADN a 94-98 C por 30 a 60 segundos
Renaturalizacion o alineamiento o unin a los primers a las
secuencias complementarias por descenso de la
temperatura 55-65 C durante 30 a 60 segundos
Polimeracin, sntesis o extensin, en el la temperatura se
eleva a 72-76 C por 120 segundos, permite copiar la
hebra de ADN molde mediante la adicin al primers de los
distintos desoxinucleotidos segn la regla de la
complementariedad

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MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
TECNICA:
Ciclos:
Estos pasos se repiten cclicamente, de tal manera
que despus de cada ciclo habr un crecimiento
exponencial de las copias de ADN, igual a 2n.
El nmero de ciclos puede variar de 20 a 40
obtenindose millones de copias de ADN.

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MOLECULAR EN EL DIAGNOSTICO DE
ENFERMEDADES INFECCIOSAS:
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA:
TECNICA:

VERIFICACION:
Tincin y Revelado
La muestra amplificada luego se debe colocar en un
gel agarosa y correr electroforeticamente para
detectar las bandas a travs del bromuro de etidio a
fin de determinar si la secuencia amplificada es la
que estamos buscando.