CICLO DE KREBS

Dra Emma Guerrero

Hurtado

Descarboxilacion oxidativa del piruvato

COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA

se compone de mltiples copias de 3 enzimas diferentes: la

piruvato deshidrogenasa (PDH, E1), dihidrolipoamida S-acetiltransferasa (DLAT, E2) y la deshidrogenasa dihidrolipoamida,
(DLD, E3).
Requiere cinco coenzimas diferentes: CoA, NAD +, FAD+,

lipoico y pirofosfato de tiamina (TPP).

Tres de las coenzimas del complejo estn estrechamente

vinculado a las enzimas del complejo (TPP, cido lipoico y

FAD+) y dos son empleados como portadores de los
productos de la actividad :CoA y NAD+).

COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA

Durante la oxidacin del piruvato a CO2 por la piruvato deshidrogenasa los

electrones fluyen del piruvato a la estructura de lipoamida de la dihidrolipoil
transacetilasa, luego al cofactor FAD de la dihidrolipoil deshidrogenasa y
finalmente a la reduccin del NAD+ a NADH. El grupo acetil se une a la

IMPORTANCIA DEL COMPLEJO PDH

Radica en que el metabolismo energtico aerbico en
tejidos como cerebro,

msculo esqueltico y

corazn

depende de la conversin normal de piruvato a acetil-CoA.

Los

tejidos

aerbicos

son

los

ms

sensibles

las

deficiencias en los componentes de la PDHc.

La mayora de las enfermedades genticas asociadas con
la deficiencia de PDHc se deben a mutaciones
El principal resultado patolgico de estas mutaciones es
de

moderada

encefalopatas.

severa

acidosis

lctica

cerebral

PDH INACTIVA

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD DE PDH

Por su estado de fosforilacin, siendo activa en el
estado no fosforilado.

La fosforilacin de la PDH es catalizada por cuatro

PDH quinasas especficas, : PDK1, PDK2, PDK3 y PDK4

PDHKs son activadas por NADH y por acetil.CoA y se

inhiben por piruvato, ADP, CoASH, Ca2+, y Mg2+.
La PDH fosfatasas, se activan por Mg2+, y Ca2+.
El complejo PDH se inhibe por acetil CoA y NADH y se
activa por CoA (CoASH) y NAD+.

CICLO DE KREBS

REACCIONES DEL CICLO DE KREBS:

Reaccin 1

Tipo de reaccin: aldocondensacin

Con fluroacetato veneno plantas sudafrica,
forma fluorocitrato (rodenticida) potente
inhibidor de Aconitasa

- 7.7 kcal/mol

Primera reaccin del ciclo es la condensacin del

carbono metilo de la acetil.CoA con el carbn ceto (C2) del oxaloacetato (OAA). La energa libre estndar de
la reaccin la dirige fuertemente hacia delante.

Debido a que la formacin del OAA a partir de sus

precursores es termodinmicamente no favorable, la
naturaleza altamente exergnica de la reaccin de la
citrato sintasa es de una importancia central para que
el ciclo se mantenga funcionando hacia delante.

Reaccin 2

Tipo de reaccin: isomerizacin

La

Aconitasa posee en su centro activo un centro [4Fe-4S]

encargado de coordinar el OH- del citrato, para facilitar su
eliminacin.
es muy especfica.

Reaccin 3

- 5.0 kcal/mol
Tipo

de reacin:
descarboxilacin oxidativa

La IDH cataliza la reaccin limitante as

como tambin la primera reaccin que
produce NADH del ciclo del ATC.

Se

regula

por

efectores

alostricos

negativos : NADH y ATP y por los efectores

positivos : isocitrato, ADP, y AMP.

Reaccin 4

- 8.0 kcal/mol
Tipo de reaccin: descarboxilacin oxidativa.
mecanismo de reaccin similar a Pyr Deshidrogenasa

 El complejo -cetoglutarato deshidrogenasa:

El

complejo 2-oxoglutarato deshidrogenasa

cataliza

la

conversin global del 2-oxoglutarato a succinil-CoA y

dixido de carbono .
genera el segundo CO2 y NADH.

Presente en la matriz mitocondrial complejo multienzimtico

en

la

que

mltiples

copias

de

la

alfa-cetoglutarato

deshidrogenasa (E1) estn unidas a un ncleo de molculas

de la dihidrolipoil-lisina-residuo succiniltransferasa (E2) que
a su vez tambin se une a varias molculas de la
dihidrolipoil deshidrogenasa (E3).

Reaccin 5

Succinato Tioquinasa: Inmersa en la membrana mitocondrial interna

Tipo de reaccin: transferencia del fosfato.
En el mecanismo de accin interviene una His del centro activo, que
es fosforilada por Succinil fosfato liberando Succinato. El fosforilo

 La conversin de succinil-CoA a succinato por accin de la

Succinil-CoA Sintetasa involucra el uso del tiosteres de alta
energa de la succinil-CoA para dirigir la sntesis de un
nucletido de fosfato de alta energa, por un proceso
denominado fosforilacin a nivel de sustrato.

En este proceso se forma un intermediario enzima-fosfato, y

luego el fosfato es transferido al GDP. El GTP mitocondrial se
utiliza en una reaccin de transfosforilacin catalizada por
una enzima mitocondrial la cinasa difosfo nucleosidasa para
fosforilar al ADP, y as producir ATP y regenerar GDP para
facilitar la accin continua de succinil CoA sintetasa.

Reaccin 6

FAD solo oxida alcano succinato a alqueno

SDH
cataliza la oxidacin del succinato a fumarato con la reduccin
secuencial de FAD unido a la enzima y del hierro no hemnico.
utiliza FAD como coenzima. El FAD es de mayor poder oxidante que
el NAD+, y es utilizado en esta clase de proceso oxidativo, donde es
necesario producir una insaturacin en una cadena hidrocarbonada.
Es activada por

succinato, fosfato, el ATP y CoQ reducido, y es

inhibido por malonato anlogo estructural del succinato.

Se constituye como unos de los blancos moleculares en la
intoxicacin por cianuro, de esta manera es inhibida su accin y as
se bloquea la produccin de ATP, induciendo a hipoxia celular.

Reaccin 7

La fumarasa cataliza reacciones especificas para la forma

trans del fumarato. El resultado es que la hidratacin del
fumarato

procede

de

produccin de L-malato.

forma

estero

especfica

con

la

Reaccin 8

Malato deshidrogenasa (MDH):

Cataliza la oxidacin del malato dando oxaloacetato (OAA).

En la reaccin hacia delante la reaccin tiene una energa libre

estndar de aproximadamente +7kcal/mol, lo que indica la
naturaleza no favorable de la direccin de la reaccin hacia
delante.

Como se indico anteriormente, la reaccin de la citrato sintasa que

condensa el OAA con la Acetil.CoA tiene una energa libre estndar
de aproximadamente 8kcal/mol y es responsable de desplazar la
reaccin de la MDH hacia delante.

RESUMEN del CICLO DEL CIDO

CTRICO:

1.-

El acetato (2C, como Ac-CoA) se condensa con una molcula

de 4C para dar citrato.

2.- Se dan dos descarboxilaciones por vuelta del ciclo, con lo
que la entrada de los 2C queda compensada.

3.- La oxidacin tiene lugar en cuatro pasos (3 con NAD+ y

uno con FAD)

4.- Se genera una molcula de ATP por vuelta del ciclo.

5.- El ciclo termina con la regeneracin del oxalacetato

to.

 Reaccin sumaria del ciclo:

Acetyl-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi ------------>

3 NADH + FADH2 + CoA-SH + GTP + 3 CO2
La oxidacin de un acetilo (2CO2) por cada vuelta del
ciclo, genera:
3 NADH, 1 FADH2, 1 GTP (o ATP)

Si todos esos nucletidos de reoxidan totalmente en

la cadena de transportadores mitocondrial, por cada
vuelta del ciclo se originarn en total:

(3 x 3) + (1 x 2) + 1 = 12 ATPs

 Si partimos de glucosa, el RENDIMIENTO

MXIMO de su degradacin aerobia ser
Gluclisis:
2ATP + 2NADH 2 + (2 x 3) = 8 ATP
Descarboxilacin oxidativa del piruvato:
2 NADH ...... 2 x 3 = 6 ATP
Ciclo de Krebs:
2ATP + 6NADH + 2FADH2 = 24 ATP
Total:
8 + 6 + 24 = 38 ATP.

REGULACIN DE LAS ENZIMAS DEL

CICLO
La elevada produccin de ATP que tiene el ciclo del
cido ctrico hace que deba ser finamente regulado,
segn las necesidades energticas de la clula:
La regulacin es:
1.-Disponibilidad de los sustratos.
2.- Inhibicin por producto de la reaccin.
3.- Inhibicin competitiva por retroalimentacin por
ciertos intermediarios del ciclo
Los reguladores ms
oxalacetato y NADH.

importantes

son

Acetil-CoA,

ETAPAS LIMITANTES DE LA VELOCIDAD

DEL CICLO

Tres son las enzimas que trabajan fuera

del equilibrio:
1. citrato sintasa
2. isocitrato DH
3. y a-cetoglutarato deshidrogenasa.

1.-REGULACIN DE LA CITRATO SINTASA

Activacin
Por disponibilidad de sustratos [oxalacetato], y acetil
CoA

Inhibicin

Por producto: citrato

Por retroalimentacin: NADH, Succinil CoA

Por efector alosterico(-): ATP

2) REGULACIN DE LA ISOCITRATO
DESHIDROGENASA
Activacin
Por ADP, Ca2+
Inhibicin

Por producto: NADH

Por efector alostrico(-): ATP

3) REGULACIN DE LA A-CETOGLUTARATO
DESHIDROGENASA

Activacin
Ca
Inhibicin
Por producto: NADH y succinil CoA
Por efector alostrico(-): ATP

VIAS QUE UTILIZAN INTERMEDIARIOS DEL

CICLO DE KREBS
Biosntesis de glucosa: Malato
Biosntesis de lpidos :Citrato
Biosntesis de aminocidos
Oxalacetato: aspartato, lisina, treonina, metionina,
isoleucina y asparragina

Alfacetoglutarato:glutamato,
arginina

glutamina,prolina

NATURALEZA ANFIBLICA DEL CICLO DE KREBS

Intermediarios de la va sirven de precursores para la biosntesis de
otros compuestos

REACCIONES ANAPLERTICAS
Del griego: Ana=arriba
Plerotikos=llenar
Siete vas anaplerticas han sido descritas en cerebro:

BIOTINO DEPENDIENTES

NO BIOTINO

piruvato carboxilasa

DEPENDIENTES

la acetil-CoA carboxilasa

Fosfoenolpiruvato

la propionil-CoA carboxilasa
y la 3-metilcrotonil-CoA

carboxiquinasa
Malato deshidrogenasaNADP (enzima mlica)

REACCIONES ANAPLEROTICAS
Del griego: Ana=arriba, Plerotikos=llenar
Son reacciones que regeneran intermediarios del ciclo
de Krebs cuando stos han sido utilizados en
reacciones biosintticas, situacin en la cual no hay
disponible
oxalacetato
(sustrato
regenerador)
indispensable para el inicio del ciclo.
Piruvato carboxilasa.
Enzima mitocondrial presente en animales.

Activada por
Acetil CoA,
Produce OAA
sustrato
limitante de
citrato
sintasa

CADENA
TRANSPORTADORA DE
ELECTRONES

Dra. Emma del

Rosario Guerrero

 Las reacciones redox son reacciones qumicas en las cuales

los electrones son transferidos desde una molcula
donadora hacia una molcula aceptora
La fuerza que conduce a esta clase de reacciones es la
energa libre de Gibbs (energa disponible para realizar un
trabajo) de los reactivos y los productos.
La cadena de transporte de electrones produce energa para
la formacin de un gradiente electroqumico, es decir se
utiliza ese flujo para el transporte de sustancias a travs de
membrana. Este gradiente se utiliza para la sntesis de ATP.
. Los e_ de los donadores NADH y FADH2 son pasados a
travs de la CR hasta el 02 Las enzimas crean
simultneamente un gradiente de protones a travs de la
membrana, produciendo un estado altamente energtico
con el potencial de generar trabajo.

La forma
oxidada y
reducida
forman el par
redox.
La
transferencia
de electrones
es del reductor
al oxidante

POTENCIAL DE OXIDO REDUCCIN

Expresa la facilidad con la cual un donante de
electrones se desprende de sus electrones hacia un
aceptor (oxidante)
El par redox con potencial de oxido reduccin
negativo grande, pierde sus electrones mas
fcilmente
el par redox con potencial positivo grande tiene
afinidad muy alta por los electrones
Cada par redox slo puede recibir electrones de otro
par que tenga potencial de reduccin ms negativo y
solo puede cederlos al par que lo tenga menos
negativo.

Ejm:
NAD + 2H + 2e

NADH + H

E= -0.32 voltios
Citocromo a + e
E= +0.38 voltios
3

1/2O2 + 2H + 2e
E= + 0.82 voltios

citocromo a3

H2O

COMPONENTES
DE LA CADENA DE TRANSPORTE DE
ELECTRONES
COMPLEJO I : NADH UBIQUINONA REDUCTASA O
NADH DESHIDROGENASA. (EC 1.6.5.3)
Transfiere 2electrones del NADH a la Ubiquinona
2H

ESPACIO
INTERMEMBRANAL
QH2

FMN

2 Transferencia de un e-

FMNH2

Fe-S

2 Transferencia de un e-

Q
NADH

H+

NAD

G=-16.6 Kcal

MATRIZ

2 H+

 Los e- pasan de NADH a Q a travs de FMNH

El NADH es oxidado a NAD+, reduciendo al FMN a FMNH2 .
FMN acta como un transductor que convierte el flujo de e- a
etapas de un e El centro Fe-S slo puede aceptar un electrn y transferirlo a la
ubiquinona generando una semiquinona.
Esta semiquinona vuelve a ser reducido con el otro electrn que
quedaba

generando

el

ubiquinol

(QH 2).

QH2

puede

difundir

libremente por la membrana

Acoplado al movimiento de e- son translocados 4 H+ al espacio

intermembranal
El complejo I contribuye a la formacin de alrededor de un ATP

PLEJO II SUCCINATO : UBIQUINONA REDUCTASA EC 1.3.

Transfiere electrones del succinato a la
ubiquinona
G=-0.69

ESPACIO
INTERMEMBRANAL

QH2
2Transferencia de un e-

FAD
2 esuccinato

FeS

2Transferencia de un e-

B 560

fumarato

QH
MATRIZ

2H+

 El "Complejo II" o Succinato deshidrogenasa; EC 1.3.5.1, dona

electrones a la ubiquinona desde el succinato y los transfiere va
FAD a la ubiquinona. Dicha transferencia comprende un FAD y un
centro Fe-S.

No se conoce el papel de cit b 560

Contribuye con 2 ATP, por que los e- que se introducen a la cadena
a nivel del QH2 tiene una va colateral al complejo I

No es una bomba de protones., por lo que no contribuye al

gradiente de cc de protones a travs de la M.M.I.

Es la nica enzima del ciclo de Krebs asociado a membrana.

COMPLEJO III :

ubiquinol Citocromo C Reductasa

Transfiere electrones de QH2 al citocromo C

I ETAPA

Espacio intermembranoso

2H+

Cara citosolica
Q

e-

Q-

FeS

eQH2

b566
eeQ

b560
QMatriz

G=-8.8 Kcal
cara matricial

e-

C1

Ciclo Q
En la primera etapa del ciclo
QH2 (ubiquinol) en el lado citosolico de la membrana
dona 1 e- a la proteina Fe-S y 2H al citosol formando
Q- (radical semiquinona)
La proteina FeS reduce al cit. 1 y el e- continua hacia
debajo de la CR
Q- dona 1e- al cit b 566 formando Q (ubiquinona)
Q difunde a la cara matricial. B566 dona un e_ a Q a
travs de b560

II ETAPA

Espacio intermembranoso

2H+

e-

Q-

FeS

eQH2

b566
eb560

eQH2

Q-

2H+

Matriz

e-

C1

2da Etapa
Una nueva molcula de QH2 se necesita para reducir
a C1 . Se repite el proceso pero en este ciclo es
reducido Q- y se consumen dos H para generar QH 2.
El resultado es la oxidacin de 2 QH2, la formacin
de 1 QH2.

Los e- del complejo III son donados al citocromo c

acarreador mvil

CICLO Q COMPLETO

Espacio intermembranoso

2H+
C
2Q

2x 1eFeS

2 Q2X1e-

2 QH2

b566
2 X 1 eb560
eQ

eQH2

Q-

2H+

Matriz

2 x 1e -

C1

COMPLEJO IV :

Citocromo C Oxidasa

Cataliza la reduccin de cuatro electrones del oxigeno

molecular a 2H2O y bombea protones
G=-28.7 kCAL

2H +

ESPACIO
INTERMEMBRANAL

C
2Transferencia de un e-

a-Cu

a3 Cu

2Transferencia de un e-

B 560

O2
2H+

2H+

H2O
MATRIZ

 En los Cit a, los atomos de Fe y Cu son oxidados y

reducidos al fluir los e-.

El complejo IV Contribuye al gradiente de cc de H:

1. bombeando protones de la matriz al espacio
intermembranoso y

2. con la formacin de agua que extrae protones

de la matriz

COMPLEJO ENZIMTICO

NADH-Q reductasa
Succinato-Q reductasa

MASA
(KD)

SUBUNIDADES

850

25

FMN
Fe-S

140

FAD
Fe-S

250

Hemo b -562
Hemo b -566
Hemo c1
Fe-S

13

Citocromo reductasa

Citocromo c
Citocromo oxidasa

160

GRUPO
PROSTTICO

Hemo c
Hemo a
Hemo a3
CuA y CuB

 Las transferencias de electrones son

altamente exergnicas, por lo cual
esa energa es utilizada para cubrir la
"energa

de

activacin"

de

la

fosforilacin oxidativa del ADP en

ATP.

COMPLEJO V Fo F1, ATP SINTASA, se acopla al

reingreso de protones a la matriz con la
formacin de ATP

La entrada de protones
se acopla
a la sntesis de ATP a
partir de ADP y Fosfato
(Pi)

La sntesis de ATPse
produce como resultado
de la corriente de
protones fluyendo a
travs de la membrana:

La ATP sintetasa es
un gran complejo
proteico con canales
para protones que
permiten la re-entrada

 El complejo V no contribuye al gradiente en la

concentracin de protones
Mas bien consume el gradiente
F es un factor de acoplamiento: ATP sintasa acopla la
fosforilacin de ADP a la oxidacin de sutratos de la
mitocondria.
F1 contiene las subunidades catalticas (donde tiene
sitios de unin para el ADP y el Pi).
Fo es un canal de protones.
Es sensible a
Oligomicina,
que se fija en el canal y evita la
entrada de protones e inhibe la sntesis de ATP

 los Complejos 1, 3 y 4 atraviesan la membrana de lado

a lado y el 2 puede estar en ambos. La estructura
terciaria de esas protenas estn estabilizadas por
puentes de H, enlaces covalentes e hidrofbicos.
Con el paso de e- los Complejos hacen un cambio
conformacional de su estructura terciaria y pasan a
funcionar como bombas de protones que los llevan en
contra de su gradiente de concentracin.

La E usada es el producto de las reacciones de

http://www.maph49.galeon.com/respc
el/review4.html

INHIBIDORES DE LA CADENA RESPIRATOR

INHIBIDORES DE LA CADENA
RESPIRATORIA
Inhiben entre el NADH y la ubiquinona.
Rotenona (insecticida)
Amital (barbiturato)
Piericidina (antibitico)

INHIBEN ENTRE EL CITOCROMO b y el C

Antimicina

INHIBEN ENTRE EL CITOCROMO AA3 Y EL OXIGENO

Cianuro
Sulfuro de H
Monxido de carbono

DESACOPLADORES
Molculas

que

inhiben

la

sntesis

de

ATP

desacoplndola de la cadena de transporte electrnico,

y

aunque

no

haya

sntesis

la

cadena

sigue

funcionando.
Un desacoplador deshace el gradiente de H+ sin parar
la cadena.
El ms comn es el 2,4-dinitrofenol que es soluble en
la membrana y su grupo OH se puede disociar. Esto
libera energa en forma de calor.
Tanto el ATP como el ADP necesitan un transportador

En la MMI de tejidos adiposos marrones existe una gran cantidad de

termogenina, que es una protena desacopladora, que acta como
una va alternativa para el regreso de los protones a la matriz.

Esto resulta en consumo de la energa en termognesis en vez de

utilizarse para la produccin de ATP. Esto puede ser til para
generar calor cuando sea necesario, por ejemplo en invierno o
durante la hibernacin de ciertos animales.

Se activa por cidos grasos liberados por la lipasa estimulada por la

epinefrina