ENZIMELE

OBIECTIVELE:

Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile

naturii proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea
enzimelor i catalizatorilor nebiologici.
Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune
despre centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele i rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici.
Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor.
Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i
rolul lor ca coenzime.
Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al
enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea
complecilor intermediari dintre enzim i substrat.
Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale
moleculei enzimei i substratului la favorizarea catalizei
(reaciei).
Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor.
Caracteristica general a claselor i subclaselor
principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.

ENZIM de la grecescul
EN ZYME- n drojdii

Enzime catalizatori biologici de

natur proteic, ce mresc viteza
reaciilor chimice
E- acioneaz strict ntr-o anumit
consecutivitate i cu o anumit
specificitate

Enzimologietiina,
ce se ocup
cu studierea E

Enzimodiagnostica
- este determinarea

Enzimoterapia
- este utilizarea E,

activittii E,
care se pot modifica n
diferite patologii cu
scop de diagnoz.

extrase i purificate sau

sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.

Natura chimic a E

1.
2.
3.
4.
5.
6.

E- sunt proteine i posed toate

proprietile fizico-chimice specifice
acestor molecule (solubilitate, proprieti
osmotice, sarcin electric net,
denaturare termic)
Dovezile experimentale:
Sunt alctuite din AA
Prezint macromolecule
n ap formeaz sol. coloidale cu propriet.
sale specifice
Prezint electrolii amfolii
Se supun denaturrii
Au fost sintetizate n condiii de laborator
din AA (ribonucleaza, lizozima)

Asemnrile E cu
catalizatorii neorganici
1.

2.

3.
4.

catalizeaz numai reaciile posibile

din punct de vedere energetic
nu modific echilibrul reaciilor
reversibile
nu modific direcia reaciei
nu se consum n procesul
reaciilor.

Deosebirile E de
catalizatorii neorganici
1.

2.
3.

4.
5.
6.

Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai

mare dect a celei nebiologice (1 mg de Fe n
componena catalazei poate nlocui o ton de Fe
metalic).
E posed specificitate nalt.
E catalizeaz reaciile chimice n condiii blnde
(presiunea obinuit, temperatura 37C, pH
aproape neutru).
E catalizeaz reaciile fr formarea produselor
intermediare randamentul este de 100%
Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se
regleaz.
Viteza reaciilor este direct proporional cu
cantitatea E.

Structura enzimelor

Masa molecular a E e de mii de ori mai

mare dect masa molecular a
substratului (S)

S - substana asupra creia acioneaz E

E acioneaz nu cu toat molecula dar cu

un anumit sector denumit centrul

activ (CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu
S i transformarea ulterioar a acestuia.

Particularitile CA
1. este o structur

tridimensional unical,
format din radicali ai
aminoacizilor distanai n
catena primar proteic;

2. Posed grupri funcionale

active (-OH, -SH, -NH2,

-COOH, etc.)

CENTRUL ACTIV:
3. Are form de adncitur sau cavitate,
cptuit cu AA hidrofobi,unde nu-i acces
de ap (ex. cnd apa este un reagent al
reaciei). CA conine AA polari.
4. Ocup o parte relativ mic din volumul E
i majoritatea resturilor de AA n
molecula E nu contacteaz cu S
5. S relativ slab se leag cu E
6. CA este alctuit din 2 sectoare:

Sectorul de contact (de legare)

Sectorul catalitic

Organizarea funcional a
enzimelor
Centrul alosteric
1. Este centrul reglator
2. Fixeaz modulatorul alosteric
3. Adiionarea modulatorului

modific conformaia enzimei

i secundar activitatea ei
4. Modulatorul pozitiv activator
5. Modulatorul negativ inhibitor

Reglarea alosteric a activitii

enzimatice

Enzime alosterice

1.

2.

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai

mari, mai complexe i sunt oligomere
pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n
dependen de c% S are form
sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat de
urmrile interaciunii ntre protomerii ce
leag S n mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice
Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai
substan Acumularea S activeaz v reaciei
catalizate de aceast E (ex: alcoolul activeaz
alcoolDH, E ce l scindeaz)
Heterotrope - modulatorul se deosebete dup
structur de S.

Structura enzimelor
Deosebim:
1.
E simple alctuite numai din AA
2.
E conjugate - formate din:
a. partea proteic - apoenzim
b. partea neproteic - cofactor.
Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili la
aciune dect apoE (gr prostetic, Co; ioni
metalici)

Cofactorul strns legat n structura E grupare

prostetic (FMN; FAD)

Cofactorul slab legat, uor disociabil coenzim

(NAD; NADP)

n calitate de cofactori apar frecvent cationii

unor metale i, foarte rar, unii anioni

Coenzimele (CoE)
1. Sunt parte component a centrului
2.
3.
4.

activ
Contribuie la stabilizarea
conformaiei enzimei
Contribuie la fixarea substratului
Particip nemijlocit la actul catalitic

Clasificarea CoE

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

CoE vitaminice

Tiaminice
Flavinice
Nicotinamidice
Piridoxinice
Folice
Cobamidice
Biotinice
lipoice

CoE nevitaminice
1. Porfirinele (hemurile de divers natur)
2. Nucleotidele
3. Fosfaii monozaharidelor

Coenzimele tiaminice
Derivaii
vitaminei B1

TMP, TDP (TPP)cocarboxilaza, TTP

Rolul:
1. Decarboxilarea
oxidativ a
piruvatului
2. Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
3. Reacii de
transcetolare

Reacia sumar a decarboxilrii

oxidative a piruvatului cu
participarea TPP (deriv. Vit. B1)

Coenzimele flavinice

1.
2.
3.

4.

5.
6.
7.

Derivai ai vitaminei
B2
FMN i FAD
Rolul:
Particip n reaciile
de oxido-reducere:
Dezaminarea AA
Degradarea
aldehidelor
(aldehidDH)
Degradarea
purinelor
(xantinoxidaza)
Ciclul Krebs
(succinatDH)
Oxidarea AG
DOP
(dihidrolipoilDH)

Reacia de dehidrogenare a
succinatului cu participarea FAD
derivatul vit. B2

Coenzimele
nicotinamidice

Sunt derivai ai
vitaminei PP niacina,
niacinamida, B5
se include n structura
a 2 Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile
de oxido-reducere
(dehidrogenarea S
transferul unui hibrid
ion (H+ i 2 e). Alt
proton rmne n
soluie H+

Coenzimele
nicotinamidice

Reacia de dehidrogenare a malatului

cu participarea NAD derivatul vit. PP

Coenzimele piridoxinice

1.
2.
3.

Derivai a
vitaminei B6
Co
piridoxalfosfat i
piridoxaminfosfat
Rolul:
Transaminarea AA
Decarboxilarea AA
Transsulfurarea

Reacia de transaminare a
aminoacizilor cu
participarea PALP i PAMP
derivaii vit. B6

Ionii de metale cofactori

ai iErolul ionului metalic E
Dup modul de legare

1.
2.
3.

sunt:
Metaloenzime care conin n calitate de
cofactori ioni de metale, strns legai de apoE
Exemple:
Citocromi, peroxidaza, catalaza (Fe)
Citocromoxidaza (Cu)
alcoolDH; carboxipeptidaza (Zn)
E metaloactive a cror activitate crete n
prezena ionului metalic, care leag metalul slab
Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi
electrostatice la care particip resturile de AA
acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)

1.
2.
3.
4.

Ionii metalici ce intr n

componena metaloenzimelor
ndeplinesc urmtoarele funcii:
Stabilizeaz structura E
Particip la legarea S
Particip nemijlocit la cataliz
Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn
leag NAD la alcoolDH)

Co pantotenice (B3)- HSCoA

biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
1.

Co biotinice vitamina H

Gluconeogenez (I cale
piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil
CoA)
Transformarea propionil-CoA n
succinil CoA (oxidarea AG cu numr
impar)
Intervine n catabolismul Leu

Co cobamidice B12
-ciancobalamina

1.
2.

Vitamin antipernicioas pentru om i

factor de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici:
meti-; hidroxo- i deoxiadenozilcobalamin
Rolul:
Co pentru unele transmetilaze
(homocistein metionin)
Co pentru anumite mutaze (izomeraze)metilmalonil Co A---- succinil CoA

Co folice sau pteridinice

Bc-acidul folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C:
metil (CH3), metilen(-CH2), formil
(COH), formimino (CH=NH)

Mecanismul de aciune
al E

Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca

molecula de S i E s contacteze ntre ele, pentru
aceasta e necesar de contientizarea unei noiuni
ca:
Energia de activare este energia necesar
tuturor moleculelor unui mol de S, care la o
anumit t pot s ating starea de tranziie
(corespunztoare apixului barierii energetice )
(KJ/mol; kcal/mol)
E - micoreaz energia de activare ale reaciilor
chimice.
Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att
mai eficient acioneaz catalizatorul, i cu att mai
mult se accelereaz reacia.

Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy

Etapele aciunii enzimatice

E + S <> ES <> ES* <> EP <> E + P
I et.
III et.
II et.
I et. formarea complexului enzim-substrat (ES)
II et. cataliza transformarea S n produsul
reaciei
(P) de ctre enzim
III et. - eliberarea P de la E

Mecanismul de aciune al enzimelor.

1.

Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat

convenional n trei stadii:
Difuzia S spre E i legarea cu CA al E formarea complexului ES. Prima etap de
scurt durat depinde de concentraia
substratului i de viteza lui de difuzie spre
centrul activ al enzimei.

Mecanismul de aciune
al E
Transformarea complexului primar ES n unul sau
cteva complexe activate - ES*, ES** (este cea
mai lent). Are loc dereglarea legturilor S,
ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma
interaciunii grupelor catalitice ale E.
3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i
difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP
disociaz n E i P).
2.

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i

coincidena forat (Koshland)

Modelul clasic (Emil Fischer)

consider c potrivirea S cu CA al E
este analog cu potrivirea lact-cheie.
Acest model presupune o rigiditate a
structurii enzimei n zona CA.
modelul Koshland, numit centrul
activ indus- potrivire indus ,
presupune c CA nu este rigid, c
forma acestuia se modific n
momentul legrii S.

Teoria cheie-lact - Fisher

Teoria coincidenei induse Koshland

Conceptul clasic "lactcheie

E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenei inductive

coincidena forat (Kochland)

1.

2.

3.

4.

Mecanismul de aciune
al E
La nivel molecular aciunea
E poate fi lmurit prin

urmtoarele efecte:
Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz
S i le orienteaz ntr-un mod convenabil pentru
aciunea gr. catalitice)
Efectul de deformare a S (dup unirea n CA
molecula S se ntinde, se deformeaz favoriznd
scindarea ei)
Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA
asupra lui acioneaz grupele electrofile ale sectorului
catalitic, are loc redistribuirea densitii electronice n
S i ruperea legturilor din S
Cataliza covalent formarea legturilor covalente
ntre CA i S, complexul ES e foarte instabil, uor
disociaz elibernd P reaciei

Clasificarea actual a
enzimelor.
Toate E se mpart n ase clase,

clasele n subclase,
subclasele n subsubclase, i
numrul su de ordin.
Ex: LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de
enzime
Subclasa precizeaz aciunea E - indic
gruparea sau legtura chimic interesat n
reacie
Subsubclasa precizeaz natura acceptorului
care particip la reacii

Denumirea E denumirea S +tipul

reaciei catalizate +aza

1.
2.

3.
4.

5.

6.

Clasificarea actual a
enzimelor
Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-

reducere;
Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor
funcionale de la un S la altul (metil, amino,
acil,);
Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi
covalente cu adiionarea apei ;
Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N;
fr adiionarea apei, adiia la legturi duble i
reaciile inverse.
Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de
transformri n cadrul uneia i aceleai
molecul ;
Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de
legturi ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz reaciii de oxidoreducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);
-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C,
C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de

transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).

Izoenzimele- izoE

1.
2.
3.

1.
2.
3.
4.
5.

forme moleculare multiple ale E, ce catalizeaz

aceeai reacie chimic, dar difer prin structur,
proprieti fizice, chimice i cinetice
Diferite forme de izoE se pot gsi:
mpreun (LDH din ficat);
n esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i
hematii);
sau n diferite pri ale aceleiai celule (MDH MC i
Cit)
IzoE difer ntre ele prin:
sarcina electric (ce permite separarea lor prin
electroforez);
V max de cataliz,
sensibilitatea fa de modulatorii allos;
pH-optim de aciune;
termolabilitate, au afinitate diferit fa de S.

Sunt E cu structur cuaternar, alctuite

din cel puin 2 protomeri diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2
tipuri de subuniti (H inim; Mmuchi) n diferite raporturi; codificate
de gene diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM;
HMMM; MMMM muchi


1.

2.

1.
2.
3.
4.
5.

Rol:
n controlul metabolic ( faciliteaza adaptarea
metabolismului in diferite esuturi.) Ex: in
miocard predomina H4, inhibata de ctre
piruvat deaceea orienteaz oxidarea
piruvatului pe cale aeroba. M4 este activat
de catre piruvat i orienteaz transformarea
piruvatului pe cale anaerob spre lactat.
n diagnosticul unelor stri patologice
(variaia diferitor forme de izoE)
Exemple de izoenzime:
creatinkinaza (2 tipuri de monomeri: MMuscle i B brain
MDH
Aldolaza
Fosfataza alcalin
Fosfataza acid

Creatinfosfokinaza (CPK)
CPK M2

Muchi
scheltic

Miodistrofii

CPK MB

Muchi
cardiac

Miocardiopa
tii

Creier

Ischemii
cerebrale

CPK B2

Proprietile generale
ale enzimelor

Obiectivele:
1.

Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea),

aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice.
2. Activarea i inhibarea enzimelor:
a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea
alosteric, autostructurarea cuaternar, fosforilarea i
defosforilarea, reactivarea).
b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific,
reversibil i ireversibil, alosteric i competitiv).
3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n
celul importana principiului de retroinhibitie.
4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i
esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea
activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor.
Cromatografia de afinitate.
6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea
enzimelor imobilizate n medicin.
7. Unitile de activitate ale enzimelor.
8. Metodele de determinare a activitii enzimelor.

Factorii care influieniaz

activitatea E

Temperatura
PH
Concentraia S
Concentraia E
electroliii

Termolabilitatea (t)

E sunt termolabile
t optim a E din organism n
limitele 37 - 40 C
odat cu creterea t cu 10C
(dac lum punctul de plecare
0 ) - V reaciei enzimatice
sporete de 1,5 ori, atingnd
max la t 40C.
Majorarea de mai departe
duce la micorarea activitii
enzimatice ceea ce
mrturisete despre
denaturarea proteinei.
Unele E a microorganismelor
termofile sunt active la t de
80C
La t joase E se inactiveaz
(excepii: catalaza: activitate
max la t=0 C)

Termolabilitatea (t)

v reaciei odat cu t

este nterpretat prin

prisma "energiei de
activare".
Pentru fiecare E se poate
stabili o t optim la care V
atinge valoarea max, mai
departe V scade din cauza
denaturrii.

Aciunea pH asupra activitii

enzimatice

1.
2.
3.
4.

Fiecare E are pH optim

propriu (manifest
activitate max).
Majoritatea E celulare
au pH-ul optim- 6-8
(7,4) (excepii:
hidrolazele acide
lizozomale pH= 5; MAO
din membrana MC
externa pH= 10).
La E digestive pH
optim este cel al
sediului lor de aciune:
Pepsina pH 1,5 2,
Amilaza pancreatic pH 6,4-7,2,
Tripsina - pH 7,8-8,0
Arginaza- pH 9,5-10
etc.


1.
2.
3.

pH optim e dependent de:

gradul de ionizare a grupelor
funcionale,
afinitii E fa de S,
stabilitii E.
In CA al E se afl grupri
ionizabile, acide sau bazice.
Acestea interacioneaz
direct cu ionii H+ si OH-,
rezultatul fiind creterea sau
scderea gradului lor de
disociere, acionnd ca
adevrai inhibitori ai E
(amilaza n sucul gastric).
Ionii H+ si OH- au un efect
denaturant asupra E - rup
legturile, ce determin
structura teriar.

Deci mrind sau

micornd pH-ul
mediului, se poate
regla activitatea
catalitic a E.
Dependena
activitii E de
variaia pH-ului curb n forma de
clopot.

[E]

n condiii standard 2 mol de E ntr-o

anumit perioad de timp vor
transforma de 2 ori mai multe
molecule de S dect 1 mol de E
(relaie direct proporional).

[ S]

Grafic se reprezint sub

form de o curb de tip
hiperbolic.
n perioada iniial a
reaciei V crete pe
msur ce crete [S]. La
un moment dat cnd CA al
E se ocup de S V nu
mai crete. Ea rmne
constant i corespunde V
max a reaciei.
n cazul E alosterice
curba reprezint un
aspect sigmoid

Analiza curbei
hiperbolice arat
c ea reprezint 3
zone:
a. V de reacie
crete
proporional cu c
%S
b. Creterea este
mai ncet
c. V de reacie nu
mai crete

Aceast curb este numit curba lui

Michaelis-Menten i se exprim prin
ecuaia:
[S]
V=Vmax x
_________

Km +[S]
unde: V-V reaciei la un moment dat
Vmax- viteza max
Km-constanta lui Michaelis Menten
[S] C% molar a S
Km- este acea concentraie de S pentru care v de
reacie este jumtate din Vmax. Km reflect
afinitatea E pentru S i anume cu ct Km este mai
mic cu att afinitatea este mai mare i invers.

Specificitatea
este capacitatea unei enzime de a
selecta dintr-un numr mare de S unul
particular,
-este condiionat de complimentaritatea
conformaional i electrostatic ntre CA
al E i S.
-

S1

S4
S2

Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip

de reactii sau transformarea unui
anumit S.

Specificitatea:

1. Specificitatea de
reacie: E-catalizeaz un anumit tip
de reacie ce st la baza clasificrii
enzimelor: o hidroliza, o reacie redox,
formarea unei legturi, etc.

Specificitatea de substrat a enzimelor

I. Specificitatea absolut de substrat

enzima catalizeaz transformarea

doar a unui singur substrat

Specificitatea de substrat a enzimelor

II. Specificitatea relativ de substrat
enzima catalizeaz transformarea
unei grup numeros de substane cu
diferit structur chimic n acelai
mod
Ex. citocromul P450 hidrolizeaz
cteva mii de substane

Specificitatea de substrat a enzimelor

specificitate relativa de
substrat - asigura transformarea
unui grup de substante inrudite
chimic i se intlnete n diferite
ipostaze:

Specificitatea de substrat a enzimelor

III. Specificitatea absolut de grup
E catalizeaz transformarea unui grup de substrate
analogice structural (ADH - unui grup de alcooli
monohidroxilici, recunoscind gruparea OH

Specificitatea de substrat a enzimelor

IV. Specificitatea relativ de grup
enzima catalizeaz transformarea unei
anumite grupe sau legturi chimice din
diverse substane chimice
Ex. pepsina hidrolizeaz legturile peptidice
formate de gruprile carboxilice ale
aminoacizilor aromatici Phe, Tir i trp

Specificitatea relativ de
grup

Specificitatea de substrat a enzimelor

- transform mai puine substrate: lipazele digestive specific recunosc

pozitia legaturii esterice intre
glicerina i acizi grai:

V.Specificitate
stereochimic

E catalizeaz transformarea numai a

unuia din stereoizomerii posibili (D
sau L; sau numai a izomerului cissau trans-). Ex: Amilaza scindeaz
legturile 1-4 glucozidice din
amidon sau glicogen i nu
influenteaz asupra legturilor din
celuloza.

Mecanismele de activare a
E
Sunt: 1. nespecifice: temperatura ,
iradierea
2. specifice
Se activeaz la:
1. majorarea concentraiei S cnd este
insuficient
2. majorarea cantitii E
3. introducerea Co cnd sunt
insuficiente
4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu

Se cunosc urmtoarele tipuri de

reglare a activitii enzimatice:
1. Reglare covalent - proteoliza
limitata
2. Reglare covalent fosforilare/
defosforilare
3. Autostructurarea cuaternar
4. Alosteric
5. Reactivare
-

Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n
forma neactiv de precursor proenzime
(zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul,
chimotripsinogenul, tripsinogenul,
proelastaza, procarboxipeptidaza scindeaza proteinele in stomac i duoden.
2) coagularea singelui e determinat de
cascada de reacii cu activitate
proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).

Mecanismele de activare a
proenzimelor este proteoliza
limitata - este scindarea unui
sector al catenei n rezultat E se
restructureaz i se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA

Importanla biologic a
prezenei formelor
neactive .
1. Protejaz de proteoliz proteinele
celulelor productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care
rapid pot fi activate i intervin n
reacie.

Reglarea covalent
(fosforilare-defosforilare)
Activitatea unor E se modific
prin fosforilare. Reaciile de
fosforilare sunt catalizate de
kinaze specifice.
E-OH + ATP -------- E-O-P
+ADP
Defosforilarea are loc sub
aciunea fosfotazei specifice
E-OP +H2O------- E-OH
+H3PO4

unele E sunt active n forma

fosforilat, iar altele n forma
defosforilat.
Ex.: glicogen fosforilaza
activ n forma fosforilat;
glicogen sintaza este activ
n forma defosforilat

Autostructurarea
cuaternar

Este caracteristic E ce posed structur

cuaternar
Fiecare protomer n parte nu posed
activitate enzimatic
La asamblarea lor se modific
conformaia fiecrui protomer i
corespunztor se modific i conformaia
CA, devenind astfel favorabil pentru
fixarea i transformarea S

CA

EE

s
AlloM

Inhibiia activitii
enzimelor
Deosebim:

inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii )

2. inhibiie specific
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La inhibiiia ireversibil: I covalent se fixeaz de
E cu formarea EI nedisociabil.
Exemple: Diizopropilfluorfosfatul(toxina
neuroparalitica)sefixeazdeOHserineinCAa
acetilholinesterazei(scindeazacetilcolina)cu
formareaEneactive.nrezultatsemenineefectul
acetilcolineinpermanenceducelaparalici
muscularimoarte.
- ionii metalelor grele (Hg, Pb) inhib gruparea SH a
multor E; acidul iodacetic- inhib ribonucleaza
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza
slab, necovalent de E
1.

Deosebim:
1. Inhibiie competitiv
2. Inhibiie necompetitiv
3. Inhibiie prin exces de S
4. Inhibiie alosteric

Inhibiia competitiv

I se aseamn dup structur cu S.

Apare o competiie dintre I i S pentru CA.
Nu e posibil simultan fixarea S i a I.
E va fixa pe acel competitor care se afl intr-o
concentraie mai mare.
E+I ---- EI
Inhibiia competitiv diminueaz v catalizei (nu
modific V max, dar crete mult Km, micornd
afinitatea E pentru S).
Exemplu: inhibiia SDH cu malonat (SDH -oxideaza
succinatul in fumarat). Malonatul inhib aceasta E
datorit asemnrii cu S.
Sulfamidele substituie acidul p-amino-benzoic din
a. folic, indispensabil pentru creterea
microorganismelor, mpedicnd dezvoltarea lor
(antibacterian).

inhibiia

enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza

succinatul in fumarat)
Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c poate fi
nlturat cu
adugarea n exes a S(succinat).

Inhibiia necompetitiv

inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S

I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint
diferite
E+S+I--------- ESI
Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces
de substrat.
I necompetitivi scad V max dar nu afecteaz
Km
Ex: cianurile, CO se fixeaz cu Fe 3+ din
citocromoxidaz ---se ntrerupe LR
I poate fi nlturat de substane care l leag
numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei

mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele

intermediare
ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i
modific activitatea lor.

Inhibiia noncompetetiv I se
leag la complexul ES, inhib
activitatea E
E+S----ES +I-----ESI
inhibiia prin modificarea
covalent a moleculei E - prin
fosforilare pe baza ATP-ului. Unele E
fosforilate pierd activitatea de
exemplu enzima glicogensintaza
Inhibiia prin exces de S n CA
se fixeaz simultan surplus de S ce
nu poate fi transformat. Este o
inhibiie reversibil nlturarea S.

Inhibiie

alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul

alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei
(structura teriar)
ce are ca consecin deformarea centrului activ.

E
S CA
CA E

M
Allos

Retroinhibiie

Sistemele polienzimatice
Tipurile de organizare a
sistemelor polienzimatice
Fiecare celul a organismului conine setul su
specific de E. Unele se gsesc n toate celulele,
altele sunt prezente doar n anumite celule sau
anumite compartimente celulare. Funcia
fiecrei E, nu este izolat, ci strins legat de
funcia altor enzime. Astiel din E aparte se
formeaza sisteme polienzimatice sau
conveiere.
Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a
sistemelor polienzimatice:
1.
- funcional,
2.
- structural-funcional
3.
- mixt.

Organizarea funcional

enzimele sunt asociate n sistemul

polienzimatic cu ajutorul metaboliilor,
care difuzeaz de la o enzim la alta.
produsul reaciei primei E servete
drept S pentru E urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele
participante la glicoliza sunt n stare
solubil, legtura se face doar prin
intermediarii metabolici.
E1
E2
E3
E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P

Organizarea structuralfuncional

E sunt fixate prin legturi slabe pe o protein

central, care poate fi chiar una din E.
Proteina central dispune de un bra care fixeaz
S i l duce la E1, care l transform n P1;
P1devine S2 , braul l preia i l duce la E2, care l
transform n P2.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E
corespunztoare, potrivindu-l cu mare exactitate pe
CA, ceea ce asigur n ansamblu o vitez mai mare
dect cea corespunztoare aciunii E neasociate.
Ex.- complexul polienzimatic
piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E i 5 Co
sintetaza acizilor grai constituit din 7 E legate
structural de PPA, care n ansamblu ndeplinesc
funcia de sinteza a AG.
E se pot aranja n lan, fixndu-se de MB. Ex.enzimele
LR, care particip la transferul de H+ i e.

Tipul mixt de organizare

reprezint o mbinare a ambelor tipuri de

organizare, adic o parte din sistemul
polienzimatic are organizare structurala,
iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime
sunt asociate n complex structural
(complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic),
ar alt parte se leag funcional prin
metaboliii de legtur.

Unitile de msurare a activitii E

1 UI cantitatea de E care catalizeaz
transformarea unui mol de S ntrun minut n condiii standard
2. 1 Cat (catal) cantitatea de E care
catalizeaz transformarea unui mol
de S ntr-o secund n condiii
standard(1U.I.=16,67 nkat)
Condiiile standard - pHul ~ 7,0; t = 25C;
p = 1 atm;
C substratelor 1 M.
1.

Metodele de separare i purificare ale

E
1. Dializ
2. Salifiere
3. Cromatografie
4. Gel-filtrare
5. Electroforez

Cea mai eficient

cromatografia de afinitate

Metodele de determinare a activitii E

Viteza reaciei este proporional cu
1.Viteza consumului substratului
2.Viteza formrii produsului
3.Viteza transformrii coenzimei
Cantitatea substanei respective se
determin colorimetric.

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i

esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea
activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate

intracelular:
n citoplasm (LDH, aldolaza),
n MC * glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza
alcalin).
Acestea E n norm n plasm se gsesc n c
% foarte mici.
La afeciunile celulare activitatea acestor E n
plasm este brusc mrit.

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte

importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca
medicaie e natura protC:IC6:legat de natura proteic:
- distribuie redus n organism , dependena de
dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin
glicozilare proteinele sunt recunoscute de receptori i
fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul
avnd tendin de a capta i reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n
cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le
scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera
reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva
enzima.

Tehnici propuse pentru

optimizarea proprietilor
terapeutice ale enzimelor.
prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n
leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin
adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin
incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai
putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice.
Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai
arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii,
enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a
fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de
fibrina.
S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in
lipozomi - microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in
hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari.
Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in
cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se
impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in
lizozomi.
-