Centrifugadoras

Los experimentos de centrifugacin

requieren aparatos que funcionan a
velocidades conocidas con pequeas
variaciones y pequeas fluctuaciones
Baja velocidad
-Centrifugan
hasta 6L
-Mantienen la
muestra fra
-Utilizados para
separar clulas
-Separan
organelos as
como ncleo y
cloroplastos

Alta velocidad
-Con velocidades de
1800-2500 rpm
-Pueden generar cerca
de 60 000 g
-Son baratas
-Tiene un sistema de
refrigeracin
algunas
tienen un sistema de
vaco para controlar la
temperatura

Ultracentrifugadas
La fuerza generada es >
60000 ( separacin de
protenas)
ANALITICAS:
Cuenta con un sistema
ptico por lo que la
muestra es visualizada
en tiempo real durante
la sedimentacin
permite la
determinacin exacta
de los parmetros
hidrodinmicos y
termodinmicos

La ultracentrifugadora analtica
Beckman se compone de un
motor,
de
un
rotor
de
centrifugacin que esta en una
cmara blindada protectora y
un sistema fotogrfico para
registrar la distribucin de las
concentraciones
SISTEMA SCHLIEREN, en el
cual la luz que atraviesa las
regiones de concentracin
uniforme prosigue su camino
sin desviarse, mientras que la
que atraviesa regiones de
concentracin cambiante se
desva debido al cambio del
ndice de refraccin que vara
con la concentracin.
Su valor reside en su gran capacidad
para examinar el perfil del frente de
sedimentacin y para detectar la
presencia de heterogeneidades en s.
Se ha utilizado muy ampliamente,
sobre todo para la determinacin del
coeficiente de sedimentacin de las
protenas

Una ultracentrfuga analtica

es
una
ultracentrfuga
preparativa complementada
con un sistema de
deteccin ptico que es
capaz de medir directamente
la
concentracin
de
la
muestra
durante
la
sedimentacin.
El sistema ptico de
interferencia Rayleigh es
utilizado para el anlisis de
macromolculas que carecen
de cromforos intensos
(ejemplo polisacridos) y
muestras que contienen
molculas que absorben
fuertemente (ejemplo ATP,
GTP, DTTOXIDADO).

El modelo XL-A utiliza un

sistema
ptico
de
absorbancia basado en
una lmpara de xenn,
un
rastreador
monocromtico
que
permite la medicin de la
concentracin
de
la
muestra en un rango de
longitud de onda de 200
Elasistema
ptico de
800 nanmetros
interferencia Rayleigh
fue adicionado al modelo
XLA
El sistema ptico de
interferencia Rayleigh mide
la concentracin de la
muestra basado en
cambios en el ndice de
refraccin.

Cromoforo: Parte o conjunto de tomos de una molcula responsable de su color

r.p.m: Revolucin por minuto (unidad de frecuencia )
GTP: Guanosn trifosfato
DTT:Ditiotreitol, capaz de reducir los enlaces disulfuro de las protenas (-S-S-) a grupos sulfhidrilo (-SH)

CENTRFUGA
TUBULAR
Consiste tubo vertical esbelto que gira a altas
velocidades por la accin de un motor elctrico, o
una turbina de aire o vapor
Capaz de separar partculas hasta de 0.1 mm. Las CT
pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que
son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o
protenas
Un modelo tpico de laboratorio consta de un tubo de 4.5
cm de dimetro por 25 cm de longitud, el cual puede
girar a una velocidad de hasta 50 000 r.p.m.,
desarrollando campos de hasta 62 000 g, con una
capacidad de hasta 100 l/h.

Centrifugas de
Cmara Mltiple
Fueron creadas para incrementar la capacidad
de manejo de slidos de las centrfugas
tubulares
Consisten en una serie de tazones concntricos con
deflectores que provocan un flujo en serie de la
suspensin. Su operacin permite la clasificacin de las
partculas conforme pasan de una cmara a otra.
El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de
335 a 615 mm, con velocidades de rotacin entre 5 000
y 8 400 r.p.m., produciendo campos entre 5 000 y 9 000
g, respectivamente. La capacidad de manejo de slidos
vara entre 2.5 y 60 litros dependiendo del material y
del nmero de cmaras.

Centrfugas
Decantadoras o de
Tornillo
Se caracterizan por un tazn horizontal con una seccin
cilndrica y una
seccin cnica, con una relacin de longitud a dimetro
entre 1.5 - 3.5.
Las velocidades de rotacin son de 1 600 a 6 000 r.p.m.
por lo que
los campos centrfugos son menores que los de los otros
equipos
Los dimetros de los tazones varan de 15 a 140 cm.
Para los modelos piloto e industriales. La descarga de
los slidos vara de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h, con
alimentaciones entre 308 y 1890 l/min,

Centrfuga de
Discos
Consta de un eje vertical sobre el cual se montan un
conjunto de discos en
forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la
centrifuga provoca el giro tanto de los discos como del
tazn de la centrifuga.
Debido a la fuerza centrfuga, los slidos se depositan en la
cara interna
de los discos, resbalando hacia la cmara colectora debido
al ngulo de los discos. La siguiente imagen muestra una
centrfuga de discos.

Tipos de rotores
Rotores de
Columpio
La muestra est en una
cubeta individual el cual
se mueve de forma
perpendicular al eje de
rotacin del rotor
La fuerza centrfuga es
ejercida a lo
largo del eje del tubo, y a
pesar de que la fuerza
centrfuga es axial, algunas
partculas son sedimentadas
sobre rotores
la paredllevan
del tubo
Estos
de 3 a 6 tubos
fijados a un soporte de metal que
esta suspendido, la suspensin
libre sirve para fijar la posicin de
inicio del tubo con la muestra,
cuando el rotor comienza a girar,
el bucket se pone de forma
horizontal.
1.- Rotores de alta velocidad con tubos de 4.4 y
5 ml. Estos rotores son convenientes para
centrifugacin zonal y al equilibrio donde no es
necesaria una fina resolucin.
2.- Rotores de velocidad moderada para tubos
de 13.2 a 17 ml de capacidad, son convenientes
para la separacin de partculas de masa similar
por medio de centrifugacin zonal en gradientes
de densidad de
sacarosa.

3.- Rotores para tubos largos y de baja

velocidad de rotacin. Incluye rotores del
tipo SW 25.1 que
contiene tres tubos de 34 ml, el tipo SW
25.2 (3x 60 ml) y SW 28 con seis tubos de
38.5 ml.

Rotores de ngulo
Fijo
Tienen un ngulo fijo y
cuando el rotor gira la
solucin se reorienta en el
tubo. El ngulo del tubo en
el rotor puede variar de 140
a 400
Los rotores con bajo ngulo
son ms eficientes para
sedimentacin porque el
trayecto de las partculas
que sedimentan es corto.
Los rotores de ngulo fijo
estn diseados para
soportar altas fuerzas
centrfugas, por arriba de
600 000 g

Rotores Verticales
Se utilizan en centrfugas de
alta
velocidad
y
ultracentrfugas. En estos
rotores, los tubos estn en
posicin vertical y se podra
considerar que es una forma
extrema de un rotor de
ngulo fijo
La caracterstica importante de
los rotores verticales es la
corta
trayectoria
de
sedimentacin de las
partculas (que equivale al
dimetro del tubo). El diseo
de
los
rotores
verticales
permite muy altas fuerzas
centrfugas.
Los rotores verticales no son
convenientes para
sedimentacin pero pueden ser
utilizados para centrifugacin
isopcnica

Rotores Zonal
Sus procesos son similares a
los que ocurren en los rotores
de bucket, sin embargo, en
lugar de tubos hay 4 sectores
en el cuerpo del rotor zonal
formados por la insercin de
una cilindro de cuatro
sectores que esta hecha de
Noryl, un qumico inerte y
suave.
El ensamble del aspa asegura
la rotacin del liquido junto
con
el
rotor
y
consecuentemente
la
formacin de una fuerza
centrfuga. La direccin de la
sedimentacin es hacia la
periferia del rotor
Se han desarrollado diferentes
diseos de este tipo de
rotores a los que se las ha
agrupado en diferentes series,
de tal manera que hay de la
serie A, B, C, D, F, K y J. Cada
serie agrupa a rotores que
comparten caractersticas en
cuanto a su velocidad.

Centrifugacin isopcnica : separa las partculas en un gradiente de densidades en funcin de la

densidad de las mismas. Las partculas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde

Factor

k y k
-Estos factores pueden ser utilizados para comparar la eficiencia de varios rotores para el
material con el que se esta trabajando.
s (en unidades Svedberg)
-Si se conoce el coeficiente de sedimentacin de la partcula en el medio utilizado y el
factor k del rotor, es posible estimar el tiempo de separacin de la partcula
Donde, w es igual a 0.104720x r.p.m., rmax es la mxima distancia radial de el eje
centrifugo (en cm) y rmin es la distancia mnima radial de el eje centrfugo (en cm).
A menor valor de k, ms eficiente es el rotor, puesto que varia directamente
proporcional al tiempo en que tarda la partcula en separarse.
El factor k es utilizado para estimar el tiempo requerido para mover una zona de
partculas a el fondo del tubo a travs de un gradiente lineal de sacarosa a la mxima
velocidad del rotor.
Donde Z2 es el mximo porcentaje de el gradiente de sacarosa, Z 1 es el mnimo
porcentaje de el
gradiente de sacarosa, I es el valor integral obtenido en tablas. Despus de calcular Z 0:
El tiempo t (en hrs) para que una partcula (que se conoce su coeficiente de
sedimentacin), alcance el fondo del tubo en un gradiente lineal de sacarosa se puede
calcular por la siguiente ecuacin:

-Frecuentemente el tiempo de corrida que se utiliza es el que se encuentra en la

literatura, o bien, es determinado arbitrariamente hasta que se completa la separacin.
-El utilizar los factores k y k podra ahorrar tiempo en la centrifugacin.
-Estos factores pueden ser utilizados para convertir un tiempo de corrida de un tipo de
rotor a otro. Por ejemplo si el rotor tipo 40 tiene una mxima velocidad de 40 000 r.p.m.
se lleva 4 horas en realizar la separacin, el tiempo de corrida que se lleva un rotor tipo
60 Ti a 60 000 r.p.m.
puede ser determinado por la siguiente relacin:
t1 = k1 x t2 / k2
Donde t1 es el tiempo de corrida de el rotor tipo 60 Ti, k1 es el factor k del rotor 60 Ti,
t2 es el tiempo observado en el rotor tipo 40 y k2 es el factor k para el rotor tipo 40.
Para el ejemplo anterior el tiempo de corrida para el rotor 60 Ti es aproximadamente de
dos horas