A VARIABILIDADE

GENTICA

Biologia Molecular da Clula

NA
MEDICINA
FORENSE

Trabalho elaborado por:

Carolina Correia
Ctia Baro
Francisco Santos
Vnia Caldeira

Variabilidade Gentica
Resulta de: mutaes e recombinao gnica durante a

meiose e a fecundao:

Meiose
> Crossing-over (profase I)
> Colocao de cada cromossomas
de cada par de homlogos, de um
lado ou outro do plano equatorial do
fuso acromtico feita ao acaso
(metafase I)

Fecundao

Medicina Legal e Forense

Especialidade mdica e jurdica

Usa conhecimentos tcnico-cientficos de Medicina para o

esclarecimento de factos de interesse da Justia

Rene o estudo da Medicina, do Direito, da Biologia, da

Qumica, da Balstica, da Fsica, da Sociologia...

Divide-se em vrias reas:

> Antropologia forense
> Traumatologia forense
> Sexologia forense
> Tanatologia

Variabilidade e Polimorfismos
na
Medicina Legal e Forense
O objectivo da anlise de DNA diferenciar um

indivduo de outro pelo maior n de caractersticas possvel.

Na espcie humana 10% do genoma codifica protenas

atravs do RNA, o restante so sequncias repetitivas.

a variabilidade deste restante, ou seja, das regies

polimrficas, de funo estrutural que se utiliza nos exames
forenses de DNA.

Variabilidade e Polimorfismos
na
Polimorfismos: verificados em mais de 1% da
polulao, sendo
transmissveis descendncia.
Medicina
Legal
e
Forense
Variaes
Geralmente sem ou com consequncias fentipicas no

genticas

negativas.
Mutaes: geralmente associadas a patologias, da no
se alastrararem muito (menos de 1% da populao).

Alelo - cada uma das variantes possveis de um locus

polimrfico.
Locus posio de um gene ou de um marcador gentico
num cromossoma.
Tipos de polimorfismos:
> SNPs
> VNTRs
> Polimorfismos de repetio de transposes

Caso de Estudo a Medicina

Forense e a Violao Sexual

Nos casos de violao e noutros cenrios criminais,

as recolhas de amostras biolgicas (sangue,
cabelo, smen, etc) permitem o isolamento do
DNA de um eventual suspeito.

Aps a recolha e amplificao da amostra de DNA

pela tcnica de PCR bem como a sequenciao
destes possvel ainda a descoberta de
polimorfismos particulares e consequente
identificao do criminoso.

A Investigao de uma
Violao
A vtima de violao foi uma rapariga de 14 anos, portadora

de Sndroma de Down, no Rio de Janeiro em 1998.

O crime foi notificado apenas alguns meses mais tarde,
quando a gravidez resultante da violao se tornou
evidente.
Assim, a anlise forense do smen do violador estava fora
de questo.
A vtima obteve autorizao judicial para uma interrupo
da gravidez.
O feto abortado foi ento analisado para identificar o pai
biolgico, tal como a me e 4 suspeitos deste caso de
violao.

Tcnicas Utilizadas: Extraco

Material
biolgico:
do
DNA

Recolha de sangue da vtima e suspeitos

Tecido da pele do feto
Incubao (15-18 horas, 56C)
Uso de fenol e clorofrmio para extraco de
DNA
Suspenso das preparaes de DNA em soluo
(10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA)
Verificao da integridade do DNA: amostras
colocadas num gel de agarose 0,8% com
brometo de etdio electroforese, 100V, 15
minutos medio da densidade do DNA

Tcnicas Utilizadas: PCR

Anlise de 6 loci STRs
DNA template + dNTPs de STR +
primers sintticos (CTT ou FFv) + U
Taq polimerase
PCR:
Desnaturao inicial, 2 min, 96C
10 ciclos de: 1 min a 94C, 1 min a
60C, 1,5 min a 70C
20 ciclos de 1 min a 90C, 1 min a
60C e 1,5 min a 70C
Os produtos da amplificao por PCR
foram analisados num gel de agarose,
2%.

Tcnicas Utilizadas

Anlise dos Alelos STRs:

Desnaturao a 95C, 2 min
O material amplificado foi introduzido num gel de poliacrilamida
(4%) com corante de prata e submetido a electroforese

Anlise de 3 loci VNTRs

Digesto do DNA com enzimas de restrio:
Amostras de DNA genmico foram digeridas com HaeIII, a 37C
Os fragmentos resultantes foram precipitados pela
adio de acetato de amnio e etanol
Incubao a -20C, 2 horas
Centrifugao, velocidade mxima, 10 min
Suspenso em soluo tampo

Tcnicas Utilizadas

Electroforese:
Os fragmentos foram separados num gel de
agarose, 0.8%, 24 horas, 20V
Transferncia e sequenciao por hibridao:
Tratamento e transferncia de gel para
membrana de nylon
Hibridao desta com sequncias de DNA
quimioluminescentes (sondas)
Anlise Estatstica
Recorrncia a uma base de dados da
populao do Rio de Janeiro

Southern
blot

Resultados

Os resultados da electroforese mostram que trs

dos suspeitos podem ser excludos e apenas o
suspeito n3 um potencial pai biolgico do feto,
depois da sequenciao dos vrios loci (VNTR e
STR).
Os alelos sequenciados
nos 6 loci STR em cada
suspeito encontram-se
esquematizados na tabela
seguinte.

Resultados

Loci de STRs que se revelaram motivo de excluso dos

suspeitos:
Suspeito n1 TPOX, F13A01 e vWA
Suspeito n2 CSF1PO, TPOX, THO1, FESFPS, vWA
Suspeito n4 TPOX, F13A01, FESFPS, vWA
Loci de VNTRs que se revelarem mais um motivo de incluso
do suspeito n3, em comparao com a vtima e o feto:
D7S467, D8S358 e D10S28

Concluso

O ndice de Paternidade Combinado de 412.860, pelo que a

probabilidade de ser o pai biolgico do feto abortado de
99,9997%.

Assim, conclui-se que o violador o Suspeito n3.

Referncias Bibliogrficas

http://www2.ufp.pt/~jcabeda/pdf/sebentasequenciacao.pdf

GOES, Andra Carla de Souza, SILVA, Dayse Aparecida

da,
DOMINGUES,
Cristiane
Santana
et
al.
Identification of a criminal by DNA typing in a rape
case in Rio de Janeiro, Brazil. Sao Paulo Med. J., May
2002, vol.120, no.3, p.77-79. ISSN 1516-3180

COOPER, Geoffrey M.; HAUSMAN, Robert E., The Cell

A Molecular Approach, ASM Press e Sinauer
Associates, 4 edio, 2007