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DE ADN DE
ALTO PESO
MOLECULAR
CATEDRA : BIOLOGA MOLECULAR
DOCENTE: M.Sc. ELMER REN CHAVEZ
ARAUJO
MTODOS
Estimacin de la
concentracin de ADN por
visualizacin.
El
mtodo
indirecto
ms
recomendable para la determinacin
de la concentracin de ADN en una
muestra es mediante la visualizacin
de un gel de electroforesis en el cual
se
colocan
muestras
con
concentraciones conocidas.
PROCEDIMIENTO
ELECTROFORESIS
FASE FINAL
Finalmente
se
cierra
la
cmara
de
electroforesis, se enciende nuevamente la
fuente de poder, dejando que corra durante
10 minutos, se visualiza el producto con U.V. y
se toma una fotografa.
En este mtodo la estimacin se realiza
contrastando intensidades de luz entre las
muestras, lo cual se realiza visualmente o con
el auxilio de algn programa computacional
que contraste intensidades de color.
Espectrofotometra
A. Esquema de un espectrofotmetro de
un solo haz
B. Esquema de un espectrofotmetro de
doble haz.
Estimacin mediante
espectrofotmetro.
Agregue 10 ml de TE-RNasa (o la
solucin que utiliz para resuspender el
ADN de la muestra problema) y 990 m l
de
Agua
dd,
en
una
celda,
asegurndose
de
la
perfecta
homogeneizacin.
Coloque la celda en la posicin 1 del
espectrofotmetro.
Preparacin de las
muestras.
Agregue 10 m l de la muestra
problema y 990 m l de Agua .dd, en
otra celda, asegurndose de la
perfecta homogeneizacin.
Lectura.
Lectura a 260 nm
Mide concentracin ADN muestra
50 ug/ml--------------1 O.D