UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE MICROBIOLOGIA Y

PARASITOLOGIA BASICA Y APLICADA

CONTROL DE ESTERILIDAD
USP 34-35
Q.F. MIRTHA ROQUE ALCARRAZ
MG EN MICROBIOLOGIA

INTRODUCCIN
Es el proceso de comprobacin de la
esterilidad
Desde el ensayo biolgico oficial.
Validacin de los mtodos de
esterilizacin y del proceso asptico de
aquellos productos que no se esterilizan
en el envase

Normas aplicadas al
ensayo de Esterilidad
Las pruebas de esterilidad son diversas, adems,
pueden emplearse procedimientos alternativos
para evaluar la esterilidad, sin embargo, se
consideran como pruebas con mayor fidelidad las
descritas en las obras oficiales (Farmacopeas):

FEU 29
FB 2009.
FJ 2009.
USP 31,32,33
Otras Obras Oficiales.(FDA)

ENSAYO DE ESTERILIDAD
Ratifica el estatus de estril, en

productos esterilizados en su envase y

aquellos sometidos a envasado
asptico.
Es un ensayo obligatorio para la
aprobacin, nico mtodo analtico
oficial disponible de aquellos productos
para los que la Farmacopea y Ministerio
de Salud reclaman su exigencia de
estril.

Ensayo de Esterilidad

Ensayo microbiolgico determinar la

ESTERILIDAD de los PRODUCTOS
evaluados, los que deben cumplir
con la condicin de ser estriles,
verificndose la ausencia de
contaminacin microbiana.

Todas las preparaciones calificadas,

declaradas o exigidas como
estriles debern satisfacer el ensayo
farmacopeico de esterilidad.

Esterilidad
Un producto cumple estrictamente con la
condicin de estril cuando est completamente
libre de microorganismos viables.

La esterilidad absoluta no puede ser

demostrada en la prctica sin una completa
evaluacin de cada una de las unidades que
el la
lote.
conforman
Por lo tanto,
esterilidad est definida en
trminos probabilstico, donde la existencia
de una unidad contaminada del lote
evaluado, es aceptablemente remota.

FUNDAMENTO
COMPROBACIN DE LA
AUSENCIA DE FORMAS
VIABLES DE
MICROORGANISMOS.
DETECCIN DE
FORMAS VIABLES DE
MICROORGANISMOS.
EN MEDIOS DE CULTIVO
ADECUADOS

Bacterias.
Mohos
Levaduras.

Objetivo del ensayo de

Esterilidad
Evaluar la calidad microbiolgica de productos
farmacuticos de uso parenteral, gotas oftlmicas
estriles, apositos y dispositivos de uso medico estriles.

PRODUCTOS
MEDICAMENTOS DE

USO PARENTERAL
UNGUENTOS
OFTALMICOS
MEDICAMENTOS PARA
QUEMADURAS DE 3
GRADO Y HERIDAS
ABIERTAS
MATERIAL BIOMEDICO

Productos a evaluar:
Productos farmacuticos de uso parenteral, los cuales
tienen contacto directo con:

Sistema sanguneo.
Sistema linftico.
Lquido cfalo-raqudeo.
Sistema muscular, entre otros.
Incluye productos tales como:
Material mdico-quirrgico (sondas, jeringas,
prtesis).
Medicamentos (inyectables, soluciones estriles
de uso parenteral, etc.).

CONDICIONES
PERSONAL
AMBIENTES
MEDIOS DE
CULTIVO
PRODUCTOS

USP 30,31,32,33
PB, PE

DE LOS AMBIENTES
Diseo e infraestructura

que no ofrezcan riesgo

de contaminacin.
Ambiente de clase 100
Cabina de Flujo laminar
Programa
microbiolgico de
monitoreo ambiental
cuidadosamente
planeado y ejecutado.

DE LOS AMBIENTES
Procedimientos de limpieza
y descontaminacin del
rea a intervalos
regulares.

Zcalo sanitario

Condiciones de seguridad:
rea limpia.
S

Vestidor
I
I
1
I

Incubadora
30 - 35 C

AnteCmara

Pre
-Cmara

S
S

S
2

Cmarade
de
Cmara
Esterilizacin
Esterilizacin

Incubadora
20 - 25 C

Cmara
Estril
1

Cmara
Estril
2

ANTESALA A LA CABINA
Controles regulares de

la calidad del aire y

superficies de trabajo,
calidad.

DEL PERSONAL
Gozar de buena

salud.
Tener buenos

hbitos de higiene

Qumico Farmacutico
tica Profesional
Entrenamiento y grado de

destreza.

Ser responsable,

honesto y
proactivo

Seguir los procedimientos

operativos dentro del

rea.

DEL PERSONAL

Lavarse las manos

minuciosamente
con jabn
germicida.

 Vestir la ropa estril

en la antesala a la
cabina de flujo
laminar

Ropa estril :
gorro,
bata,
mascarilla
y guantes

Ingresa con la ropa

esteril al cubiculo
donde se encuentra
la cabina de flujo
laminar

 Personal

realizando control
de esterilidad

MEDIOS DE CULTIVO
Laboratorios

certificados
En buen estado (en
fecha de uso)
Control de
Esterilidad
Tener un control de
ausencia de
grmenes

 Proporcin relativa

del crecimiento

Control de crecimiento
de los
microorganismos

MEDIOS DE CULTIVO
BACTERIAS:
Medio de tioglicolato

lquido
pH 7,1 +-0,2
Medio de tioglicolato
alternativo
pH 7,1+-0,2
Incubacin 32,5+2,5C

MOHOS Y

LEVADURAS:
Medio lquido hidrolizado

de casena y soya digerido

pH 7,3 +- 0,2
Incubacin 22 +- 2,5 C

Preparacin del Ensayo:

Diluyentes y medios de cultivo:
Medios de cultivo*:
MTF, para microorganismos aerobios y
anaerobios; y
TSB, para mohos y levaduras.
Diluyentes:
Fluido A, para antibiticos -lactmicos;
Fluido D, para muestras aceitosas o con
lecitina; y
Fluido
K, para muestras poco solubles sin
* Prueba
de promocin del crecimiento, y Prueba de bacteriostasis y fungistasis.
aceites.

ESTERILIDAD DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

La esterilidad de cada lote de medio se

confirma a travs de incubacin de

envases representativos a la T y tiempo
de duracin de la prueba.
Es recomendable que se haga antes de

ser empleados en los ensayos de

esterilidad.

PROMOCIN DE CRECIMIENTO

Evaluar la calidad promotora del

crecimiento de M.O de cada lote de

medio.
Se inocula por separado envases por

duplicado de cada medio, con los M.O

de prueba, y se incuba en las
condiciones especificadas.

Luego de esterilizar los MDC se agrega entre 10 a

100 microorganismos*.
El MDC es satisfactorio si se evidencia claramente
el crecimiento de estos microorganismos dentro de
un perodo de 7 das.

TEST DE VALIDACIN PARA

BACTERIOSTASIS Y FUNGISTASIS
MTODO 1:
FILTRACIN DE LA
MUESTRA
Enjuague de la membrana con

un minimo de 3 porciones.
Inocula el enjuague final con los
MO de prueba.
Si el crecimiento = control
positivo trabajar el test en las
mismas condiciones.
Si el crecimiento //= repetir la
prueba utilizando > N de
enjuagues.

METODO 2
SIEMBRA DIRECTA DE LA MUESTRA
Inocular por duplicado los

medios con MO de prueba.

Adicionar cantidad conocida de
muestra
Crecimiento trabajar idem.
No crecimiento diluir la
muestra o utilizar neutralizante
(polisorbato 80)
Lecitina, betalactamasa etc.

TEST DE VALIDACIN PARA BACTERIOSTASIS Y

FUNGISTASIS
Determinar la actividad

bacteriosttica y fungisttica
INHERENTE al producto
Inoculacin con el M.O. de

prueba <100 ufc/ml.

Incubacin a T indicada x

no menos de 7 das

Prueba de bacteriostasis y fungistasis:

fungistasis
Se realiza luego de efectuada la prueba de
Promocin de Crecimiento.
Consiste en agregar entre 10 a 100
microorganismos al MDC esterilizado.
Seguidamente se agrega la muestra a
evaluar al MDC y se incuba por un perodo de
7 das.
El MDC es satisfactorio si se puede recuperar
los microorganismos inoculados, de lo
contrario se debe de agregar un agente

Instrumentos y equipos*:
Cabina de Flujo Laminar (Nivel de
Bioseguridad II).
Incubadora de 30C a 35C
Incubadora de 20C a 25C
Equipo de filtracin por membrana.
Bomba de vaco.
Bao Mara (45C a 50C).
Dispensador automtico, etc.
* Certificados, calibrados y validados.

MUESTRA
Tamao y Nmero
Para cualquier tamao de lote 20
unidades
Para ambos medios
Cantidad a sembrar
Depende del producto

Tratamiento de la muestra*:
Apertura de los envases:
Se debe limpiar la superficie de los envases
(ampollas, frascos-vial, botellas, sobres) con
un agente desinfectante adecuado.
Seleccin de muestras:
Se trabaja con un nmero determinado de
muestras de acuerdo al volumen de cada
envase, lo cual condiciona el volumen de
MDC a emplear.

* Tratamiento y manipulacin de la muestra bajo condiciones aspticas.

As tenemos que:

Contenido del
envase
(mL)
Menor a 10

Volumen mnimo
tomado de cada
envase para cada
MDC
1 mL

Volumen mnimo por cada

MDC
Inoculacin Filtracin por Nmero de
directa (mL)
membrana
envases por
(mL)
MDC
15

100

20

10 a menos de 50

5 mL

40

100

20

50 a menos de 100
100 a 500

10 mL
Envase completo

80

100
100

20
10

500 mL

100

10

Mayor a 500

MTODOS PARA EL ENSAYO DE

ESTERILIDAD
DIRECTO
Transferencia

directa de la
muestra.
INDIRECTO
Filtracin en
membrana .

Metodologa
Mtodo de Inoculacin directa, segn FEU

26
Mtodo de Filtracin por membrana,

segn FEU 26.

MTODOS PARA EL ENSAYO DE

ESTERILIDAD
DIRECTO

FILTRACIN DE

Lquidos

MEMBRANA
Lquidos y polvos
solubles con
propiedades
bacteriosttica y
fungistticas
Ungentos y aceites
solubles en miristato
de isopropilo

Slidos
Suspensiones
Apsitos quirrgicos
Jeringas ,sondas,

catteres.
Ungentos y aceites
insolubles en miristato de
isopropilo.

Inoculacin directa:
Transferir el contenido de los envases o transfiera la

muestra directamente a los MDC.

Mezclar la muestra con el MDC (no excesivamente).
Incubar en el medio especfico:
MFT de 30C a 35C por no menos de 14 das.
TSB de 20C a 25C por no menos de 14 das.
De acuerdo al tamao de la muestra se pueden utilizar:
Frascos tipo R (muestras de gran tamao),
Semi-R (muestras de pequeo tamao).

FILTRACIN DE MEMBRANA
Equipo de filtracin
Membranas de nitrocelulosa de 47mm y 0,45 um.
Soluciones de lavado y dilucin
Solucin A:

agua peptonada 0.1% pH 7,1+-0,2

Solucin D:
sol A + polisorbato 80 (1ml/L)
pH 7,1 +-0,2
Solucin K:
peptona + extracto de carne +
polisorbato 80 pH 6,9 +-0,2

Filtracin por membrana:

Este mtodo es utilizado para muestras de

naturaleza lquida, las cuales pueden ser trabajadas

tambin por el mtodo de Inoculacin directa.
El nmero de muestras no puede ser menor a las

indicadas para cada tipo de artculo.

Se utilizan filtros con una porosidad nominal de 0,45

m, con un dimetro aproximado de 47 mm, y una

velocidad de flujo de 55 mL a 75 mL de agua/min a
una presin de 70 cm de mercurio.
Los filtros son colocados junto con el equipo de

filtracin en envases con MDC y luego son

incubados.
Luego se sigue el mismo procedimiento indicado

para el mtodo de Inoculacin directa.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS

I ETAPA

II ETAPA

AUSENCIA DE

PRESENCIA DE

CRECIMIENTO
7-14 DAS
INCUBACIN
PRODUCTO
ESTRIL

TURBIDEZ
REPETIR EL
ENSAYO
DOBLE DE
UNIDADES POR
MUESTRA

Interpretacin de resultados
Ausencia de turbidez: El producto evaluado es

CONFORME (cumple con los requisitos para el

ensayo de Esterilidad).
Presencia de turbidez: Se realiza un re-ensayo

del producto evaluado bajo las mismas condiciones

del primer ensayo, a excepcin de que se duplica
el nmero de muestras.
Re-ensayo: En caso de persistir la presencia de

turbidez, entonces el producto es NO CONFORME,

en caso contrario (ausencia de turbidez) el producto
es CONFORME.