R EP O R TE G R A FIC O

D EL H EM O G R A M A
A U TO M ATIZ A D O :
D IS P ER S O G R A M A S E H IS TO G R A M A S

Autom atizacin en
H em atologa
Conteos eran manuales,

y los recuentos
diferenciales eran
estimados en frotis.
En la dcada de los 50

del siglo XX, los

hermanos Coulter,
idearon el principio de
impedancia para el
recuento celular.

Autom atizacin en
H em atologa
PRIMERA GENERACION:

Hemograma manual.
SEGUNDA GENERACION:
Contador celular.
TERCERA GENERACION:
Diferencial de 3 diff.
CUARTA GENERACION:
Scatter Light,
Radiofrecuencia,
Fluorescencia.

La Clula

Propiedades fi
sicoquim icas de las clulas
Variedad de tamaos
Relacin ncleo citoplasma propio de cada

clula.
Densidad caracterizable y diferente entre
clulas.
Malas conductoras de la electricidad
Se comportan en forma diferente a la luz:
absorben, refractan, difractan y dispersan.
Composicin citoqumica diferente y
caracterizable para cada una.

M todos Para elrecuento

celular
Citometra Esttica
Conteo clsico de clulas en cmaras

calibradas en volmenes conocidos,

como: Cmara de Newbauer.
El conteo era por microscopia ptica.

Citometra dinmica
Por Impedancia
Por Citometra de Flujo

M todos Para elrecuento

celular
Los sistemas por impedancia fueron

los primeros utilizados para conteo

de partculas, pero tenan varios
defectos.
Los sistemas por citometra de flujo
revolucionaron el conteo celular
mediante el enfoque hidrodinmico.
El enfoque hidrodinmico tambin se
aplico en impedancia.

Conteo por im pedancia

Conteo por ImpConteo por

Impedanciaedancia

Enfoque H idrodinam ico

Alineamiento de

partculas por
medio de dos
fluidos de
diferentes
densidades o
velocidades.

M ejoras en la im pedancia

Principios para elReconocim iento Celular

Impedancia o Corriente Directa

Radiofrecuencia o Conductividad
Dispersin de Luz o Scatter Light
Citoqumica
Fluorescencia
Anlisis Nuclear

Im pedancia Elctrica

Im pedancia Elctrica

FRECUENCIA

Costruccin de H istogram as

VOLUMEN

Costruccin de H istogram as

Costruccin de H istogram as

Costruccin de H istogram as

Radiofrecuencia o
conductividad
Al igual que la impedancia elctrica

se base en la Ley de Ohm.

La diferencia es que aplica una
corriente de mayor energa o de
mayor frecuencia.
Esta energa electromagntica
atraviesa la clula permitiendo
evaluar estructuras internas o la
densidad celular.
La evaluacin nuclear es la principal.

Com paracin entre

Im pedancia y Radiofrecuencia
Corriente directa

Radio frecuencia

Mide tamao

Mide densidad celular

D ispersin de Luz o Scatter Light

La dispersin resulta de la interaccin

de la luz con una partcula que

produce un cambio de direccin (no de
la longitud de onda) en todas las
direcciones del espacio.
Determinan:
Tamao
celular,
la
membrana, el ncleo y el material
granular del interior de la clula,
llamado complejidad.

Sistem a ptico de la dispersion de luz

Efecto dellaser

Inform acin de la dispersion de luz en

diferentes ngulos
90Pol/ 90dep

Faisceau laser
P
o
l
a
r
i
s
a
t
i
o
n

Granulations

Medida a 0
sirve para medir el tamao
celular
10 Structure
Medida a 10
1/3 (0) Taille mide la complejidad celula
Medida a 90
mide la superficie celular y
la estructura interna
( granularidad )
Medida a 90D
mide determinados tipos d

Taillegranularidad celular
10 Structure
1/3 (0)

Citoqum ica
Reacciones desarrollas en el
proceso de automatizacin
para evidenciar enzimas y
otras molculas que
permitan diferenciar una
clula de otra.
Puede darse a nivel de
membrana, citoplasmtico y
ncleo.

M todo de Peroxidasa
High angle detector
(5o - 15o)
Lmpara de
TungstenoHalogeno

Absorbancia
Peroxidase

D ispersogram a

Citoqum ica de la m em ebrana

Fluorescencia
Uso de algunos sustancias que

emiten fluorescencia despus

de ser exitados a una
determinada longitud de onda.
Se utiliza en hematologa para
evidenciar la presencia de
biomolculas como RNA y
DNA.

Fluorescencia

D ispersogram as
Cada principio aplicado en

tecnologas de los diferentes

autoanalizadores, esta apoyado por
programas o software, que realizan
todo el procesamiento de datos.
El uso de ajustes matemticos a
demostrado un nuevo panorama
para el mejor uso de discriminadores
o umbrales de poblaciones.

D eterm inacion de centroides

Zonas de alarm as (Flags)

Ejem plos de dispersogram as

Tecnologa VCS

Coulter Gen S

Ejem plos de dispersogram as

Sysmex

Ejem plos de dispersogram as

Cell Dyn 3500 - 3700

Ejem plos de dispersogram as

1
2
3
4
5
6
7
8
Advia

Ruido electrnico
NRBCls
Plaquetas
Linfocitos y
Basfilos
Clulas Grandes
no teidas (LUC)
Monocitos
Neutrfilos
Eosinfilos

Conociendo alSysm ex

Canalpara m edicion de basofi

los

D ispersogram a para basofi

los

Canalpara diferenciacion celular

D ispersogram a para diferenciacion celular

Canalpara hem aties nucleados

D ispersogram a para hem aties nucleados

Canalpara reticulocitos y plaquetas

opticas

D ispersogram a para reticulocitos y

plaquetas opticas

Canalpara granulocitos inm aduros

D ispersogram a para granulocitos inm aduros

Ejercicios de histogram as

Despus de que la muestra es incubada a 37 C por 30

minutos el histograma de rojos se corrige y el pico
secundario desaparece regresando los parmetros de
hemates a la normalidad.

Ejercicios con dispersogram as

Pseudo Pelger H uet

LI 07
MO 04
EO 02
BA 10
NE 48
AB 03
MT 04
MI 14
PM 05
BL 03
HN 02

Leucem ia M ieloide Cronica

LIN 03
MIE 01
BLA 96

Leucem ia Linfoide Aguda

LI 11
NE 10
BL 79

Leucem ia M ieloide Aguda (M 1)

LI 01
MO 01
PM 96
BL 02

Leucem ia Prom ielocitica Aguda (M 3)

LI 04
NE 03
CN 93

Leucem ia Linfocitica Cronica

LI 43
MO 03
EO 02
NE 34
MT 01
MI 02
BL 15
HN 113

Leucem ia m ieloide con hem aties

nucleados

LI 14
MO 03
EO 02
NE 46
CN 35

E 02
N 44
MT 01
MI 01
CN 35

Sindrom e de Sezary

GRACIAS
GRACIAS