1. Le virus fixe sur la membrane cellulaire (attachement). 2. Le virus pntre dans la cellule: pntration. 3. Le virus libre son acide nuclique (dcapsidation). 4. Le virus doit traduire et rpliquer son information gntique (rplication). 5. Le virus doit assembler les diffrents constituants nosynthtiss (assemblage) pour aboutir la libration des particules virales noformes. 1
Bien que les virus diffrent entre eux par leur
structure et par lorganisation de leur information gntique, leur cycle de multiplication possde un mme schma de base. -Attachement: Lattachement du virus la cellule est un phnomne spcifique mais qui ne require pas dnergie. -Pntration: en gnral, les virus pntrent dans la cellule par endocytose. Les virus envelopps peuvent pntrer par fusion entre les membranes virales et les membranes cellulaires. 2
-Dcapsidation: la dcapsidation aboutit la
libraton du gnome dans le cytoplasme ou dans le noyau. - Transcription prcoce, rplication du gnome, transcription et traduction tardives: cette transcription se fait partir du gnome infectant et aboutit la synthse de: -Enzymes ncessaires la rplication du gnome viral (rplicases). - Enzymes ncessaires la transcription tardive (ex. RNA polymrases). -Protines de contrle qui bloquent la synthse des acides nucliques de la cellule hte. 3
-Assemblage, maturation , libration:
-Virus sans enveloppe: assemblage indpendant de la libration : gnralement la libration survient quand la cellule est dtruite par leffet de linfection. -Virus enveloppe: assemblage et libration sont lis dans le processus de bourgeonnement .
Le mode de rplication est fonction de la
nature du gnome viral: les virus ADN ou les virus ARN. I- Rplication des virus ARN: se fait selon deux grandes stratgies. virus ARN positif (+); virus ARN ngatif (-); les virus dont lARN doit, pour se rpliquer, tre transcrit en une copie dADN proviral double brin. 5
1)- Virus ARN positif (+): fig. 3.3, les virus
correspondants possdent un ARN gnomique directement messager qui, ds sa libration dans la cellule, sert la synthse protique. par example le virus de la poliomylite. Cest un petit virus ARN (picornavirus; picornaviridae). LARN gnomique est protg par une capside icosadrique sans enveloppe. La rplication peut se dcomposer en 5 tapes: 7
Premire tape: le virus se fixe sur un rcepteur
cellulaire. Il pntre dans la cellule lintrieur dune vacuole de pinocytose; la dcapsidation, non spcifique, se fait par des enzymes cellulaires; lARN viral est libr. Seconde tape: lARN viral (+) sert directement dARNm. Un grand polypeptide N00 est synthtis qui sera ensuite cliv en N1 , Nx et N2 ; N1 est cliv en VP0 , VP1 et VP3 (VP, viral protin) participeront llaboration de la capside; parmi les autres protines, on distingue une protase et une ARN polymrase ARN-dpendante. 9
Troisime tape: pour assurer la
duplicaiton de lARN (+), un intermdiaire (-) est ncessaire; ce brin (-) apparat sur la matrice (+) grce lARN polymrase ARN-dpendante nosynthtise qui porte le nom de rplicase.
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Cette tape est dpendante dune enzyme
cellulaire, la terminale uridyl-transfrase, qui synthtise une squence poly (U) face au poly (A) de lextrmit 3de lARN (+) viral, et aboutit une structure en pingle cheveux, et ensuite la rplication commence. Donc il apparat des ARN bicatnaires.
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Quatrime tape: A partir de lARN (-), il y a
synthse dARN (+), une molcule dARN (-) gnrant plusieurs ARN (+); les ARN (+) synthtiss seront les ARN gnomiques viraux; ils peuvent galement participer lamplification de la synthse protique. Cinquime tape: les particules virales vont tre assembles: des polymres de VP0, VP1 et VP3 sassocient pour former une procapside dans laquelle pntre un ARN gnomique (+). 12
Le clivage de VP0 en VP2 et VP4 assurent
la fermeture de la procapside en capside dont les protines capsidales sont formes des peptides VP1, VP2 , VP3 et VP4. Les nuclocapsides virales saccumulent dans le cytoplasme de la cellule, ralisant parfois des amas pseudocristallins. La cellule finit par clater et les virions passent dans les espaces intercellulaires. 13
Cette multiplication entraine une anomalie
cellulaire dcelable en microscopie photonique et utilisable au laboratoire pour le diagnostic virologique: leffet cytopathogne ou ECP. Dans le cas du virus de la poliomylite, lisolement chez le malade se fait partir des selles; celles-ci sont mises en culture au laboratoire sur un systme cellulaire adapt.
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La multiplication virale entrane en 24 heures un
arrondissement des cellules (ECP ltat
frais); on distingue une volumineuse
inclusion osinophile intracytoplasmique correspondant laccumulation des nuclocapsides et qui repousse le noyau en priphrie (fig. 3.4).
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2)-Virus ARN ngatif (-): le gnome viral nest
pas directement messager; une transcription de lARN (-) en ARN (+) est ncessaire; ceci se fait grce une enzyme constitutive du virus, une ARN polymrase ARN-dpendante, qui portera dans ce cas le nom de transcriptase. LARN (+) synthtis servira dARNm pour la traduction protique. par example le virus de la grippe, orthomyxoviridae, capside tubulaire symtrie hlicoidale, virus envelopp (fig.3.6); fig. 3.7. LARN gnomique est un ARN monocatnaire (-) en 8 segments. Voir la rplication fig 3.8. 17
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Premire tape: le virus se fixe grce son
HA sur un rcepteur cellulaire . Il y a fusion entre lenveloppe virale et la membrane cytoplasmique de la cellule. La nuclocapside est libre dans le cytoplasme, la dcapsidation est ralise de faon non spcifique par des enzymes cellulaires et lensemble ARN viral transcriptase migre dans le noyau. 21
Deuxime tape: il est ncessaire de
rappeler que les ARNm cellulaires possdent une coiffe (CAP, 7mthylguanosine) . Le CAP sert au positionnement des ribosomes sur lARNm. LARN gnomique viral tant (-), il doit tre transcrit en ARN (+) par la transcriptase virale. En effet, un ARNm cellulaire vient saccrocher lARN viral (-), et sert damorce la transcriptase qui synthtise un ARN (+). 22
Troisime tape: lARN (+) pourvu dun ARNm et
en particulier du CAP passe dans le cytoplasme et joue le rle dARNm pour les protines virales. Quatrime tape: lARN (+) peut servir de matrice pour la synthse dARN (-) gnomique. Cinquime tape: lARN (-) associe la
transcriptase est encapsid; la nuclocapside
migre vers la priphrie cellulaire o la membrane cytoplasmique est hrisse des spicules. 23
Sixime tape: le bourgeonnement se fait sous
le contrle de la protine M; le virion se dgage dfinitivement de la cellule infecte sous laction de la neuraminidase. Au total, 2 lments caractrisent la rplication du virus grippal: la participation du noyau cellulaire et la ncessit dune fonction celulaire (transcription pour fournir une amorce la transcriptase virale). 24
3)-les virus dont lARN doit, pour se
rpliquer, tre transcrit en une copie dADN proviral double brin: example les rtrovirus. Les rtrovirus sont des virus ARN possdant une enzyme capable deffectuer la transcription de lARN gnomique viral en ADN. Cette enzyme est nomme transcriptase inverse (TI) ou rtrotranscriptase (RT). fig. 7
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Cet ADN va sintgrer au gnome cellulaire et la
rplication du virus commence.
Les rtrovirus comprennent, outre des gnes de rgulation, 3 gnes de structure (gag, pol, env) qui sont traduits en polyprotines. Le gne pol va donner, aprs clivage par la protase virionique, les enzymes cls de la rplication du virus: protase, transcriptase inverse et intgrase.
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La copie de lARN gnomique en une
molcule dADN double brin par la transcriptase inverse relve dun mcanisme complexe (fig. 8). L enzyme transcriptase inverse possde une triple activit : ADN polymrase-ARN dpendante, ADN polymrase-ADN dpendante et RNAseH.
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La synthse du premier brin dADN
dbute lextrmit 5de la matrice dARN grce un ARN de transfert cellulaire qui sert damorce. Un court fragment dADN est synthtis (activit ADN polymrase-ARN dpendante) et une translocation va positionner ce fragment sur lextrmit 3de lARN.
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Aprs longation de la chane dADN et
limination de la matrice dARN (activit RNAseH), le deuxime brin dADN peut tre synthtis (activit ADN polymraseADN dpendante).
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II- Rplication des virus ADN: En rgle gnrale
la rplication est intra-nuclaire: aprs la dcapsidation, l'ADN viral migre dans le noyau o la rplication se droule en trois phases (fig. 2): Phase prcoce: une petite partie du gnome viral est transcrit par une ARN polymrase ADN dpendante en ARN messagers ( ARNm ) dits prcoces qui migrent dans le cytoplasme o ils sont traduits en protines. Ces protines prcoces sont des protines rgulatrices et des enzymes impliques dans la synthse de l' ADN viral, mais elles ne sont pas incorpores dans la particule virale ( protines non structurales ). 32
Rplication de l' ADN: l' ADN viral est
dupliqu en un grand nombre de copies par l' ADN polymrase, selon un mode semi-conservatif . Phase tardive: ces ADN noforms vont servir de matrice pour une deuxime transcription aboutissant la synthse d' ARNm tardifs traduits en protines de structure qui seront incorpores dans le virion lors de l' assemblage ( protines virioniques ). 33
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On distingue 3 types de virus ADN:
les virus ADN double brin, example adnovirus, herpesvirus, poxvirus. les virus ADN simple brin, sont reprsents par les parvoviridae. Ce sont des virus de petite taille, aux capacits limites ( 3 protines ). Certains sont des virus dfectifs ncessitant la prsence d' un virus helper ( adnovirus, herps virus ) pour leur multiplication. les virus ADN double brin partiellement simple brin, example Hepadnavirus.
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Adnovirus: virus ADN linaire
bicatnaire li de faon covalente une protine ; une capside possde une symtrie icosadrique de 252 capsomres (12 pentons, 240 hexons) sans enveloppe; chacun des 12 pentons est porteur dun spicule activit hmagglutinante.
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Le cycle lytique (fig. 4.1) aboutit la
destruction de la cellule cible en 24 72 heures. Regardons la rplication des Adnovirus: Le virus se fixe sur la cellule entre un site spcifique et un spicule puis pntre dans la cellule par pinocytose. La dcapsidation a lieu de faon non spcifique dans le cytoplasme; le nuclode (nuclocapside) migre vers le noyau dans lequel il pntre (1). 39
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La phase prcoce (2) va dbuter par la
transcription dARNm prcoces viraux (par une ARN polymrase ADN-dpendante cellulaire); les ARNm correspondants sont maturs comme les messagers cellulaires. Les ARNm viraux passent dans le cytoplasme pour tre traduits par les ribosomes cellulaires en une quinzaine de protines.
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LADN viral entre dans sa phase de duplication
(3) grce lintervention dune ADN polymrase cellulaire . La phase tardive de transcription (4) va gnrer des ARNm qui sont traduits en protines de structure, dans le cytoplasme. Lassemblage viral a lieu dans le noyau (5).
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Les virions accumuls seront librs par la
lyse de la cellule. Voyons lECP des Adnovirus ltat frais: on voit lapparition de mailles dans le tapis cellulaire infect; aprs coloration lhmalun-osine, on distingue des noyaux dont la chromatine est rtracte au centre et relie la priphrie par des cloisons de refend sparant des inclusions basophiles (fig 4.2).
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Regardons la rplication des Herpesvirus:
virus ADN bicatnaire linaire sous forme de cercle entourant un axe protique central (lensemble est appel nuclode), une capside possde une symtrie icosadrique de162 capsomres; cette capside est spare de lenveloppe priphrique par une structure fibrillaire (le tgument); lenveloppe porte des spicules courts qui nont pas dactivit hmagglutinante; la particule virale a une taille de 150 200 nm (fig. 4.3). 44
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Voir fig.4.4: le virus se fixe sur la cellule
cible; il y a fusion de lenveloppe virale et de la membrane cytoplasmique, dcapsidation et migration du nuclode vers le noyau (1). Une transcription trs prcoce et prcoce (2) va gnrer des protines et correspondant des enzymes dont une ADN polymrase et une thymidine kinase . La duplication de lADN a lieu (3). 46
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La phase tardive de transcription (4) va
gnrer des protines qui sont des protines de structure capsidales. La nuclocapside est assemble dans le noyau (5) puis va senvelopper aux dpens de la membrane interne de lenveloppe nuclaire (6) avant de cheminer vers la priphrie cellulaire dans les canaux du rticulum endoplasmique (7).
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Regardons lECP des HSV, fig 4.5: on voit
un arrondissement des cellules infectes; aprs coloration, on observe un clatement de la chromatine; cette chromatine va marginer en priphrie du noyau sous la pression dinclusions osinophiles intranuclaire qui correspondent aux nuclocapsides icosadriques virales.
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Regardons la rplication des Poxvirus, fig. 4.6:
les virus possdent un ADN gnomique linaire de 160 x 106 Da, dans une capside en forme dhaltre, lensemble tant dans une enveloppe rectangulaire de grande dimension; entre la nuclocapside et lenveloppe, on note la prsence de 2 corps latraux. Da, dalton= unit de masse molculaire, soit 1.66x10-24 gramme
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Voir fig. 4.6: deux particularits sont souligner:
la rplication a lieu dans le cytoplasme de la cellule et le virus doit possder des enzymes de rplication (ADN polymrase.......). Aprs adsorption et pntration par pinocytose, une tape de transcription de lADN viral est ralise par une ARN polymrase ADN-dpendante constitutive virale lintrieur de la nuclocapside et aboutit la synthse dune dcapsidase qui digre la nuclocapside et libre lADN viral. Contrairement ce que nous avons vu prcdemment pour les autres virus, la dcapsidation est spcifique. 53
Regardons la rplication des
Hepadnavirus, fig 4 . 7 : eg. Virus de lhpatite B (VHB ou HBV). Le gnome viral est constitu dun ADN circulaire dont le brin interne est incomplet. La particule virale possde, associe ADN, une ADN polymrase qui va complter le brin interne de lADN gnomique et gnrer un ADN bicatnaire superenroul, fig 4 . 7a . 54
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LADN ainsi constitu va tre transcrit en
ARNm subgnomiques pour la synthse protique et en un ARN (+) gnomique. Cet ARN (+) sert de matrice une RT virale qui synthtise un brin dADN (-); ce brin dADN (-) circularis servira de matrice lADN polymrase qui synthtise le brin complmentaire (+) sur les du cercle (fig. 4.7b). On obtient ainsi lADN gnomique du VHB. 56
III- LES INTERACTIONS VIRUS-CELLULE
L'interaction la plus courante entre un virus et une cellule est l'infection lytique productive: la multiplication virale entrane la lyse ou la mort de la cellule infecte qui libre ainsi les virus noforms. En culture de cellules, l'infection se traduit par l'apparition d'altration morphologiques des cellules observables en microscopie optique: c'est l'effet cytopathique (ECP) . Cet ECP est assez caractristique du virus (ou de la famille du virus) infectant pour tre un lment du diagnostic virologique de routine. 57
Il existe cependant d'autre types d'interactions
entre un virus et une cellule: - Au cours de l'infection abortive le virus pntre dans la cellule mais sa multiplication s'arrte prmaturment et n'aboutit pas la production de virus. - Lors de l'infection persistante, la cellule infecte continue de vivre en hbergeant un virus dont le niveau d'expression est variable, allant de la latence (pas de production virale) l'infection chronique productive . 58
- L'infection transformante rsulte le
plus souvent de l'intgration de la totalit ou d'une partie du gnome viral dans le gnome cellulaire. La cellule transforme acquiert de nouvelles caractristiques morphologiques et biologiques: augmentation de la vitesse de croissance, perte de l'inhibition de contact, immortalisation. L'infection transformante est la base du processus d'oncognse virale. 59
Le type d'interaction virus-cellule n'est pas
univoque: un mme virus peut selon la nature de la cellule infecte donner lieu une infection lytique, abortive, latente ou transformante. In vivo, la rponse immunitaire de l'hte peut galement moduler le type d'infection.