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CRECIMIENTO

MICROBIANO

Generalidades
Crecimiento

Se
define
como
el
incremento en el nmero
de clulas .
El crecimiento de la
mayora
de
microorganismos ocurre
por fisin binaria

Fisin Binaria
En la mayora de las procariotas, el crecimiento de una
clula individual continua hasta que se divide en dos
nuevas clulas, un proceso llamado fisin binaria.

Las clulas se alargan hasta


aproximadamente el doble de la
longitud de la clula.
Formacin del septo. Tabique
transversal que separa la clula
en dos clulas hijas. Se forma a
partir del crecimiento de la pared
celular y membrana plasmtica.
Duplicacin material celular en
cada clula hija.

Crecimiento de
Poblaciones
El crecimiento se define como el incremento en el nmero de
clulas microbianas en una poblacin, lo cual tambin puede
ser medido como el incremento en la masa microbiana

Velocidad de Crecimiento: Cambio en el numero de clulas o


masa celular por unidad de tiempo.

Tiempo de Generacin. Es el tiempo requerido para que a


partir de una clula se formen dos. Es el requerido para
duplicarse una poblacin de clulas.

Crecimiento Exponencial. Crecimiento de un microorganismo


en que el numero de clulas se duplica en un tiempo
determinado.

Curva de Crecimiento

Se divide en:

Fase de Latencia: En esta etapa las clulas pueden estar metabolizando pero no
creciendo, los microorganismos adaptan su metabolismo a las nuevas
condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo) para
iniciar la fase de crecimiento exponencial.
Fase Exponencial: la clula se divide en dos, estas en otras dos y as
sucesivamente. La velocidad vara de una especie a otra y depende de parmetros
ambientales como la temperatura. Concentracin de nutrientes, pH, a w,O2, etc.
Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad mxima los nutrientes del
medio.

Curva de Crecimiento

Fase Estacionaria: el periodo inmediatamente posterior a la fase


exponencial cuando la velocidad de crecimiento se hace cero. No hay
incremento neto del numero de clulas. Ocurren muchas funciones celulares,
incluyendo el metabolismo energtico y algunos procesos biosintticos. Las
clulas en fase estacionaria desarrollan un metabolismo diferente al de la
fase exponencial y durante ella se produce una acumulacin y liberacin de
metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial
Fase de Muerte . Las clulas despus de permanecer activas
metablicamente deben morir. Lisis celular. Se produce una reduccin del
nmero de bacterias viables del cultivo.

Medicin del Crecimiento


El crecimiento de una poblacin se mide siguiendo los cambios en el nmero de
clulas o el peso de la biomasa celular.
Existen diversos mtodos para contar el nmero de clulas o para estimar la masa
celular dependiendo del microorganismo que se trate.

Contaje total de
clulas

Contaje de viables

Recuento directo al
microscopio

Una clula viable se define como la que es capaz de


dividirse para dar lugar a descendencia.
Diluciones. Para obtener el nmero apropiado de
colonias, la muestra debe ser diluida.

Medicin del Crecimiento


Medida de Masa Celular

La medida de la masa de los


constituyentes de la clula
bacteriana
es
utilizada
frecuentemente como base
para la medida de una
actividad metablica, o de un
constituyente metablico o
qumico.
Peso hmedo: Se obtiene a
partir de una muestra en
suspensin que es pesada
luego de la separacin de las
clulas
por
filtracin
o
centrifugacin.
Es
una
tcnica til para grandes
volmenes de muestra.

Medida de Masa Celular

Peso seco: El peso seco


(contenido de slidos) de las
clulas bacterianas que se
encuentran
en
una
suspensin se obtiene por el
secado de un volumen en un
horno a 105C hasta peso
constante. Esta tcnica es til
para grandes volmenes de
muestra,
debido
a
que
diferencias del orden de los
miligramos representan el
peso de un gran nmero de
bacterias.

Medicin del Crecimiento


Dispersin de la Luz
Turbidez
Medidas
de
turbidez:
una
suspensin celular aparece turbia
porque las clulas dispersan las
luz que atraviesa la solucin.
Cuantas mas clulas haya mas luz
se dispersa y mas turbia ser la
suspensin. Se mide con el
fotmetro y el espectrofotmetro,
los cuales hacen pasar la luz a
travs de una suspensin celular y
detectan la cantidad de luz no
dispersada.

Medicin del Crecimiento


Medio
fresco del
reservorio

Regulador
de flujo

Aire estril
u otro gas
Espacio con
aire
Gas
Recipiente
de cultivo

Cultivo

Rebosadero

Efluyente con
clulas
microbianas

Cultivo Continuo
Es un cultivo de volumen
constante , al que se aade medio
fresco y del que rebosa medio
usado con clulas.
Quimiostato: permite el control
de la densidad de la poblacin y la
velocidad de crecimiento del
cultivo. Se tiene en cuenta la
velocidad
de
dilucin
y
la
concentracin de un nutriente
limitante.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento
Los requisitos para el crecimiento microbiano incluyen factores fsicos y qumicos.

Entre los factores fsicos tenemos la temperatura, el pH y la presin osmtica. Los


factores qumicos necesarios para el crecimiento bacterial son diversos elementos
constitutivos de las clulas.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

TEMPERATURA

El patrn de crecimiento bacterial se ve profundamente influenciado por la


temperatura. La temperatura a crecimiento ptimo permite el crecimiento ms
rpido de las bacterias durante un perodo de tiempo, usualmente entre 12 y 14
horas. La temperatura mnima de crecimiento es aquella temperatura menor a la
cual la especie puede crecer. La Temperatura de crecimiento mximo es la
temperatura mayor en la cual el crecimiento es posible. Los microorganismos se
dividen en 3 grandes grupos en base a su preferencia de rango de temperatura.
Psicrfilos son capaces de crecer a 0C menos, pero crecen mejor a una
temperatura mayor. Estas bacterias son capaces de crecer a 0C, pero tienen una
temperatura ptima de 15C menos y una mxima de aproximadamente 20C.
Los Psicrfilos estrictos mueren si se exponen a la temperatura de saln. Un
ejemplo de sicrfilos estrictos son las bacterias que crecen en la Antrtica. An a
una temperatura ptima estas bacterias se tardan en crecer de 2 a 3 semanas.
Los Psicrfilos facultativos o Psicrotrofos son aquellos organismos que pueden
crecer a 0C, pero crecen mejor a una temperatura de entre 20 a 30C.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

Los mesfilos crecen mejor a temperaturas que


fluctan de entre 25C a 40C. Aqu encontramos
los patgenos de humanos y animales de sangre
caliente, stos crecen mejor a 37C.
Los termfilos son bacterias que crecen a una
temperatura ptima sobre los 45C. La regin de
crecimiento de muchos termfilos se extiende a la
regin de los mesfilos. Estas se conocen como
termfilos facultativos. La temperatura ptima
de
crecimiento
para
estos
ltimos
microorganismos es entre 50 a 60C.

Efecto de la T sobre
velocidad de crecimiento y
consecuencias moleculares
para la celula

Los
termfilos
extremos
crecen
a
una
temperatura mayor de 90C. Es muy importante
sealar que una bacteria no manifiesta las mismas
caractersticas de cultivo
cuando se crece a
diferentes temperaturas, un ejemplo lo observamos
en Serratia marcescens, esta bacteria produce un
pigmento rojo solamente a cierta temperatura de
cultivo.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

La temperatura mnima es a la que el microorganismo ya no se


detecta crecimiento a valores ms bajos de temperatura. La actividad
metablica es mnima, las membranas se hacen ms rgidas y los
procesos de transporte son limitados o inexistentes.
La temperatura optima es cuando el microorganismo registra la
mxima velocidad de crecimiento y las reacciones enzimticas
ocurren a la mxima velocidad posible.
La temperatura mxima es en la que el crecimiento no existe y se
hace insostenible todo proceso bioqumico por la desnaturalizacin
de protenas y enzimas.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

ACIDEZ Y ALCALINIDAD
pH

En general los microorganismos no pueden tolerar valores


extremos de pH, en condiciones alcalinas o cidas se hidrolizan
algunos componentes microbianos o se desnaturalizan algunas
enzimas.
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible
el crecimiento y
posee un pH ptimo.
La mayora crece en un margen de variacin de 2 a 3 unidades
de pH.
El pH del medio afecta directamente a los microorganismos y a
las enzimas, afectando a la disociacin y la solubilidad de muchas
molculas que ejercen algn efecto sobre los microorganismos.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

ACIDEZ Y ALCALINIDAD
pH

En la mayora de las bacterias el crecimiento ptimo es entre 6.5 y 7.5.


Muy pocas bacterias crecen a un pH menor de 4.0. Sin embargo, las
bacterias clasificadas como acidfilos son tolerantes a la acidez, un
ejemplo es Thiobacillus thiodans que crece a un pH ptimo de entre 2.0 a
3.5.
Ejm. Sulfolobus, Thermoplasma.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

ACIDEZ Y ALCALINIDAD
pH

Alcalfilos. Son aquellos microorganismos que viven a valores de pH


superiores a 10.
Neutrfilos. Son aquellos microorganismos que viven a valores de pH
cercano a la neutralidad (pH 6.0 a 8.0).
INDEPENDIENTE DEL Ph DEL AMBIENTE, EL INTERIOR DE LA
CLULA DEBE ESTAR CERCANO A UN VALOR 7.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

DISPONIBILIDAD DE AGUA

La disponibilidad de agua depende no solo del contenido del medio


ambiente sino de la cantidad de solutos presentes en ella.
Para el crecimiento microbiano es fundamental contar con
realizar todas las reacciones bioqumicas y enzimticas.

agua para

La actividad de agua depende de la disponibilidad de sta en el medio


ambiente y de la concentracin de solutos presentes en ella.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento
PRESIN OSMTICA
Los microorganismos requieren agua para su crecimiento, adems para obtener
nutrientes de sta. Una presin osmtica alta causa prdida de agua y plasmlisis
de la clula, por lo que se utiliza este fenmeno para conservar los alimentos ya
sea aadiendo sal o azcar, lo que previene el crecimiento bacterial. Sin embargo
algunas bacterias se han adaptado a altas concentraciones de sal, a stas se les
conoce como halfilos.
HALFILOS. Microorganismos que requieren del in sodio para desarrollarse.
Halfilos discretos (1-6 %)
Halfilos moderados (6-15 %)
Halfilos extremos (15-30 %)
OSMFILOS. Microorganismos que viven en presencia de altos valores de azcares

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento
NUTRIENTES

Carbono (C) todos los organismos requieren C para sintetizar los


componentes celulares.
Nitrgeno, azufre y fsforo. Estos elementos se requieren para la
sntesis de DNA, RNA, protenas y ATP. Las bacterias pueden obtener
nitrgeno (N) ya sea fijndolo directamente de la atmsfera, como por
ejemplo el gnero bacteriano Rhizobium. Tambin pueden obtener este
elemento de compuestos inorgnicos que contengan N como nitritos,
nitratos, sales de amonia o amino cidos. Las bacterias pueden obtener
azufre de iones de sulfato, sulfito de hidrgeno y amino cidos con
azufre. El fsforo es esencial para la sntesis de cidos nucleicos y
membranas celulares. Una fuente para obtener fsforo son los iones de
fosfato y el ATP.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

NUTRIENTES
Elementos trazas. Otros elementos como hierro, cobre, molibdeno y zinc
son requeridos por los microorganismos en pequeas cantidades.
Usualmente tienen funcin de cofactores.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

Oxgeno. No todos los microorganismos necesitan 02, sin embargo, muchas


formas de vida requieren oxgeno para llevar a cabo respiracin aerbica. Los
microorganismos que utilizan oxgeno molecular son llamados aerbicos.
Estos se clasifican en aerbicos obligados que son los que requieren oxgenos
molecular para vivir, y los aerbicos facultativos los cuales utilizan el
oxgeno molecular cuando est presente, pero en su ausencia continan su
crecimiento por la va de fermentacin o respiracin anaerbica, un ejemplo
es Escherichia coli. Por otro lado tenemos los anaerbico obligados que
necesitan ausencia de oxgeno molecular para crecer y donde este
generalmente es txico, un ejemplo es el gnero Clostridium. Estos
microorganismos obtienen el tomo de oxgeno molecular del agua. Tambin
se observan microorganismos anaerbicos aerotolerantes los cuales no
utilizan el oxgenos molecular para su crecimiento, pero pueden tolerarlo. Los
microaeroflicos slo pueden crecer en concentraciones de oxgeno
molecular menor a las encontradas en el aire.
Factores orgnicos de crecimiento. Estos son compuestos orgnicos
esenciales que el organismo no puede sintetizar, aqu se incluyen las
vitaminas, los amino cidos, las purinas y las pirimidinas.

Efecto factores ambientales sobre el


Crecimiento

Medios de cultivo

Es un material nutriente preparado para el crecimiento de microorganismos en el


laboratorio. Un medio qumicamente definido es aquel donde su composicin
qumica exacta es conocida. Un medio complejo es aquel donde su composicin
exacta vara de un lote a otro, ya que este medio esta hecho de nutrientes como
extractos de levaduras, carne, partes de plantas o protenas digeridas. Hay medios
especficos para crecer anaerbicos, es estos se utiliza un ingrediente reductor
como tioglicolato de sodio, que se combina con el oxgeno molecular disuelto para
eliminarlo del medio. Tambin hay medios selectivos, stos medios en particular
proveen nutrientes que ayudan al crecimiento y predominancia de un tipo
particular de bacterias, y a su vez inhibe que otros tipos de microorganismos estn
presentes.
El Medio diferencial nos permite diferenciar entre varios tipos de bacterias al
incorporar a ste ciertas substancias como sangre, sal, tintes y otros. Si
inoculamos el medio con bacterias que destruyen las clulas rojas mientras que
otras bacterias no destruyen este tipo de clulas, podemos diferenciar unas de
otras en el mismo medio.

Esterilizacin y Desinfeccin
o Dentro del rea de la salud pblica, controlar el crecimiento
bacteriano es fundamental para prevenir la transmisin de
enfermedades infecciosas e intoxicaciones alimentarias.
o El crecimiento microbiano puede ser controlado aplicando
procedimientos que limiten dicho crecimiento (inhibicin), o que
maten los microorganismos de un ambiente particular.
o Estos procedimientos pueden ser fsicos o qumicos.
o En trminos generales, ellos comprenden la esterilizacin, la
desinfeccin y el uso de antimicrobianos.