Aplicacin de un mtodo de HPTLC indicador de

estabilidad para la determinacin cuantitativa

simultnea de Olmesartan e Hidroclorotiazida en
formas farmacuticas

Resumen
Un mtodo de cromatografa de capa fina de alto rendimiento rpida,
precisa, sensible, econmico, y validado se desarrolla para la
cuantificacin simultnea de olmesartn medoxomilo e hidroclorotiazida
en forma de dosificacin de comprimido combinado. El mtodo utiliza
como
amlodipina
(ES)
estndar
interno.
Las
separaciones
cromatogrficas se obtuvieron sobre gel de slice 60 F254 placas
utilizando tolueno-acetato de acetona-metanol de etilo (2,5: 1: 0,5: 2, v /
v / v / v) como fase mvil. El anlisis densitomtrico se llev a cabo en el
modo de reflectancia a 258 nm. Las curvas de calibracin fueron lineales
en un rango de 80 a 480 ng / banda de olmesartn medoxomilo y 25-150
ng / banda por hidroclorotiazida. Se encontr que los lmites de deteccin
y cuantificacin de ser 18,12 y 56,35 ng / banda de olmesartn
medoxomilo y 6.31 y 18.56ng / banda por hidroclorotiazida,
respectivamente. Precisin intra e interensayo proporcion desviaciones
estndar relativas inferiores al 2% para ambos analitos. Recuperacin de
99,60 a 101,22% de olmesartn medoxomilo y 98,30 a 99,32% para
hidroclorotiazida muestran una buena precisin. Tanto los medicamentos
tambin fueron sometidos a estudios, alcalino, de oxidacin, de calor, y
de fotodegradacin de cido. Los productos de degradacin obtenidos
fueron bien resueltos de drogas puras con valores significativamente
diferentes . Como el mtodo podra separar eficazmente los frmacos
de sus productos de degradacin, que puede ser utilizado para el anlisis
de la estabilidad de indicacin. Validacin del mtodo se llev a cabo de

Introduccin
Olmesartn medoxomilo (OLM), qumicamente
2,3-dihidroxi 2-butenilo 4- (1-hidroxi-1-metiletil)
-2-propil-1- [p- (O-fenil 1H- tetrazol-5-il) bencil ]
imidazol-5-carboxilato de etilo, 2,3-carbonato
cclico es un profrmaco y se hidroliza hasta
olme- sartan durante la absorcin desde el
tracto gastrointestinal (Figura 1 (a)). Es un
antagonista selectivo del receptor AT1 de
angiotensina II subtipo.

 Hidroclorotiazida (HTZ), qumicamente 6-cloro3,4-dihidro-2,4-1,2,4-benzotiadiazina-7-sulfato

fonamide-1,1-dixido (Figura 1 (b)), es un
diurtico tiazida ampliamente utilizado [1-3].

Hasta ahora, ninguna estabilidad indicando

mtodo de HPTLC utilizando un estndar interno
ha sido reportado para la determinacin
simultnea de OLM y HTZ para la forma de
dosificacin combinada.

 HPTLC permite un anlisis rpido a un costo ms

bajo que otras tcnicas con selectividad,
precisin y la reproducibilidad. HPTLC tambin
facilita la deteccin repetida (escaneo) de
cromatograma con los mismos o diferentes
parmetros. En HPTLC, el consumo de fase
mvil es bastante baja. Por lo tanto el mtodo
propuesto es muy til para el anlisis de rutina
en el control de calidad y se puede utilizar para
evaluar la estabilidad de OLM y HTZ en
preparaciones farmacuticas.

Experimentacin
Productos qumicos, reactivos y soluciones.
Olmesartn medoxomilo Farmacutica grado,
hidroclorotiazida, y amlodipino patrn interno.

Tablets, Olmesar-H 40 mg OLM, Olmy-H 12,5 mg

HTZ, Metanol de grado
acetato de etilo, y acetona

analtico,

tolueno,

 Cromatografa.
La separacin cromatogrfica de los frmacos
se realiz en placas de TLC Merck previamente
recubiertas con gel de slice 60 F254 (10,0
10,0 cm con un grosor de capa de 250 mm).

Zonas de muestra y estndar se aplicaron a las

placas como bandas (nmero de pistas 7, la
distancia de pista de la placa izquierda bordes
20 mm, distancia de la placa inferior 10 mm,
longitud de la banda 1 mm, y la distancia entre
bandas de 10 mm) por N H

El caudal fue de 10 Ls-1 mediante el uso de un

aspirador de nitrgeno.

 Tolueno: metanol: acetato de etilo: acetona (2,5:

1: 0,5: 2 , v / v / v / v) como fase mvil.

Barrido densitomtrico se realiz en el modo de

absorbancia / reflectancia a 258 nm, utilizando
Camag TLC scanner 3 con la fuente de deuterio,
hendidura configuracin de dimensin de
longitud de 2 mm, anchura 0,1 mm, ancho de
banda de monocromador de 30 nm, y velocidad
de barrido de 4 mms-1.

 Mtodo de validacin. El mtodo de HPTLC

propuesto fue validado para la selectividad,
precisin, exactitud, linealidad, robustez, LOD,
LOQ, y la recuperacin de acuerdo con las
directrices ICH.

Selectividad. Theselectivity de tema aunque sea

analizando por triplicado el estndar y la muestra.
Las bandas de OLM y HTZ de formulacin
farmacutica se confirmaron mediante la
comparacin de los valores con los de serie. La
pureza de pico se determin mediante software
win CATS. La pureza de cada compuesto se
confirm mediante el anlisis de espectro UV en
el arranque, el pice, y el final del pico.

 Linealidad y sensibilidad. Para la preparacin de

la grfica de calibracin, 10L cada una de las
soluciones estndar mixtos que contienen 8-48
mg / ml OLM, 2,5 a 15,0 g / mL HTZ, y 5-30 mg /
ml IS se aplica a la placa para amueblar
concentraciones de 80-480ng / banda OLM, 25150ng / banda HTZ y 50- 300 ng / banda es,
respectivamente. Cada estndar se analiz por
triplicado y se registraron las reas de pico.
Curvas de calibracin se construyeron por
separado por el trazado de media RRF (factor de
retencin relativo, la relacin de rea de pico de
OLM o HTZ a IS) contra concentraciones
respectivas de OLM y HTZ.

 Precisin. La precisin es la medida de cmo los

valores de datos estn cerca el uno al otro por
un nmero de mediciones en las mismas
condiciones analticas y se expresa como la
desviacin estndar relativa (% RSD). El estudio
de precisin se llev a tres concentraciones
diferentes (bajo, medio y alto) de OLM (80, 320
y 480 ng / banda) y HTZ (25, 100 y 150 ng /
banda), respectivamente.

 Exactitud. La exactitud es la medida de la forma

en que el valor experimental est cerca del valor
real y se expresa como% RSD, media error
estndar (SEM), y la recuperacin%. Estudios de
recuperacin por el mtodo de adicin estndar
se realizaron en una vista para justificar la
exactitud del mtodo propuesto. Anteriormente
analizado muestras que contienen OLM (80,
160, y 240 ng / banda) y HTZ (25, 50, y 75 ng /
banda) se enriquecieron con la norma OLM (25,
50, y 75 ng) y el estndar HTZ (25, 50 y 75 ng).
Las mezclas se analizaron por triplicado
mediante el mtodo propuesto.

 Robustez. La robustez de un procedimiento analtico

se refiere a su capacidad de no verse afectado por
variaciones pequeas y deliberadas de los
parmetros del mtodo y proporciona una indicacin
de su fiabilidad para el anlisis de rutina. Para
determinar la robustez de mtodo, las condiciones
experimentales fueron alterados deliberada y factor
de retencin (), porcentaje de ensayo, y se
evaluaron% RSD. Condiciones alterados eran mviles
composicin de la fase, la distancia de desarrollo, el
tiempo de detectar a cromatografa, y longitud de
onda de deteccin. Para todos los cambios en las
condiciones, la muestra se analiz por triplicado.
Cuando se prob el efecto de la alteracin de un
conjunto de condiciones, se mantuvieron constantes
las dems condiciones a los valores ptimos.

 Estabilidad de soluciones. La estabilidad de los

medicamentos en solucin durante el anlisis se
determin mediante anlisis repetidos de las
muestras
durante
el
transcurso
de
la
experimentacin en el mismo da y tambin
despus del almacenamiento de la solucin de
frmaco durante cinco das bajo condiciones de
laboratorio (25 2C) y bajo refrigeracin (2 8C).
Las
muestras
se
analizaron
inmediatamente y despus de un perodo de
uno, tres y cinco das.

 Los estudios de degradacin forzadas. Se realizan

estudios de degradacin forzadas para identificar
inequvocamente el analito de inters entre otros
compuestos que se espera estn presentes.

Estudio de degradacin del acido. En este estudio, se

aadi cido clorhdrico (0,1 M, 5 ml) a 25 ml matraz
aforado que contiene 0,8 ml, 0,25 ml, y 0,5 ml de
soluciones madre metanlica de OLM, HTZ, y es,
respectivamente. Las mezclas se calentaron a reflujo
en 50C durante 1 hora y completaron a volumen con
metanol. 10 l de solucin resultante fue visto como
bandas para amueblar concentracin de 320 ng /
banda OLM, 100 ng / banda HTZ, y 200 ng / banda IS,
respectivamente. El procedimiento se realiz en la
oscuridad excluyendo la posible degradacin del
efecto de la luz.

 Estudio inducido de degradacin de base. El

hidrxido de sodio (0,1 M, 5 ml) se aadi a 25
ml matraz aforado que contiene 0,8 ml, 0,25 ml,
y 0,5 ml de soluciones madre metanlica de
OLM, HTZ, y es, respectivamente. Las mezclas
se calentaron a reflujo en 50C durante 1 hora y
completaron a volumen con metanol. 10 l de
solucin resultante fue visto como bandas para
amueblar concentracin de 320 ng / banda OLM,
100 ng / banda HTZ, y 200 ng / banda IS,
respectivamente. El procedimiento se realiz en
la oscuridad excluyendo la posible degradacin
del efecto de la luz.

 Perxido de hidrgeno inducido estudio de

degradacin (la oxidacin de). El perxido de
hidrgeno (3,0%, 5 ml) se aadi a 25 ml
matraz aforado que contiene 0,8 ml, 0,25 ml, y
0,5 ml de soluciones madre metanlica de OLM,
HTZ, y es, respectivamente. Las mezclas se
calentaron a reflujo en 50C durante 1 hora y
completaron a volumen con metanol. 10 l de
solucin resultante fue visto como bandas para
amueblar concentracin de 320 ng / banda OLM,
100 ng / banda HTZ, y 200 ng / banda IS,
respectivamente. El procedimiento se realiz en
la oscuridad excluyendo la posible degradacin
del efecto de la luz.

 Estudio de degradacin de peso. Para el estudio

de la degradacin hmedo, 0,8 ml, 0,25 ml y 0,5
ml de soluciones madre metanlicos de OLM,
HTZ, y IS fueron trasladados al frasco umetric 25
ml en volumen. Para esto, se aadi 5,0 ml de
metanol y la muestra se calent a reflujo a 60C
durante 1 hora. El volumen se compone con
metanol y 10L se aplic a la placa y se analiza
en condiciones cromatogrficas optimizados

 Estudio de la fotodegradacin. Para el estudio de

la fotodegradacin, solucin que contiene 320
ng / banda OLM, 100 ng / banda HTZ, y 200 ng /
banda IS fue expuesto a la luz UV (365 nm) en
una cmara de fotoestabilidad durante 24 horas.
La solucin resultante se analiz bajo
condiciones cromatogrficas optimizados.

 Anlisis de Comercializado Forma Farmacutica

Tablet. La aplicacin del mtodo desarrollado se
evalu para determinar las cantidades de OLM y
HTZ en su forma de dosificacin de comprimido
comercializado. Veinte comprimidos, cada una
de las dos marcas (Olmesar-H y Olmy-H), se
pesaron con precisin. Su peso promedio se
determin y se pulveriza a un polvo fino. Una
cantidad de la tableta de polvo equivalente a 40
mg OLM y 12,5 mg HTZ se pes y se transfiri a
matraces volumtricos de 100 ml con precisin.