Suceptibilidad por tcnicas de

amplificacin de cidos nucleicos

Resistencia tuberculosis
Lesiones tuberculosis > 108 bacilos
RIF

1 por cada 107-108 bacilos

(100 000 000)

INH

1 por cada 105-106 bacilos

(100 000)

SM

1 por cada 105-106 bacilos

(100 000)

EMB

1 por cada 105-106 bacilos?

(100 000)

Quinolonas

1 por cada 105-106 bacilos?

(100 000)

Otro frmacos

1 por cada 105-106 bacilos ?

(100 000)

PZ

1 por cada 102-103 bacilos

(1 000)

Resistencia adquirida en MTBC

Alteraciones genticas puntuales en los genes del cromosoma
bacteriano que codifican la diana del frmaco o enzimas
implicadas en su activacin.
No se a reportado elementos genticos mviles
(no hay transmisin horizontal de genes de
resistencia
es
decir
por
procesos
de
conjugacin, transformacin, y transduccin
4,411,529 pb

Mutaciones espontaneas
MDR-XDR:
acumulacin
secuencial
mutaciones en diferentes genes.

de

Genes, funcin y mutaciones

Frmaco
involucrado

Gen

Mecanismos de accin de la del

frmaco

Frecuencia de
mutaciones

Rifampiciana

rpoB (falta de interaccin de

la
rifampicina
con
la
subunidad

del
RNA
polimerasa

Inhibicin de la transcripcin de
genes por interaccin con la
subunidad de la ARN polimerasa

96-98%

Isoniazida

katG
(catalasa-peroxidasa
impide
la
activacin
de
isoniazida)
inhA (enol ACP reductasa) las
mutaciones
inducen
la
sobreexpresin
del
gen
superando el poder inhibitorio
de INH

Inhibicin de la sntesis de cidos

miclicos

50-68% katG

Pirazinamida

pncA (enzima pirazinamidasa)

disminucin
de
cido
pirazinoico, metabolito activo

No conocido

Estreptomicina
Amikacina
Capriomicina
Kanamicina

rrs (Subunidad ribosomal 16S)

rpsl
(Subunidad ribosomal
12s)
Impiden
interaccin
con
estreptomicina.

Inhibicin
protenas

21-34% inhA

72-92%

de

la

sntesis

de

8-21% rrs
64-67% rpsl
69-75%
73-87%

Frmaco
involucrado

Gen

Mecanismo de accin del

frmaco

Frecuencia de
mutaciones

Etambutol

embB ( enzimas
aribinosiltransferasa)
sobreexpresin de este gen
permite la sntesis de
(arabinos galactanos)

Inhibicin de componentes de la
pared celular (arabino galactanos)

47-65%

Fluorquinolonas
Levofloxacino,
moxifloxacino

gyrA (disminucin interaccin

frmaco con sub unidad de
la topoisomerasa II)

Inhibicin de rotura de cadenas de

DNA, enrollamiento y
desenrrollamiento.

74-89%

GeneXpert MTB/RIF
Detecta MTB y resistencia a RIF
Es una hemisted Real time PCR para amplificar la
secuencia del gen rpoB (189 pb) y la regin
16S(209 pb)
Integra los procesos sobre la muestra y el PCR
dentro del cartucho de plstico.

Lisis de bacteria (sonicacin)

Extraccin de DNA
Amplificacin de DNA
Deteccin del amplicn

El resultado se obtiene en un
periodo de 2 horas

Identificacin del amplicn

Utiliza tres pares de primers especficos, un par para la

regin 16S y dos pares para la regin rpoB.
El amplicn es identificado por medio de 5 sondas
moleculares de desplazamiento de longitud de onda
(A,B,C,D y E).
Ventajas:
Equipo
totalmente
automatizado,
mnima intervencin del operador , rpido.
Desventajas: Mtodo costoso solo identifica
resistencia a un solo antibitico

GenoType
MTBDR plus
Se basa en la tecnologa DNA Strip
Identifica monoresistencia a INH y
RIF
Multidrogorresistente: Resistencia
INH a RIF
El anlisis del
gen rpoB la
resistencia a RIF
Analiza dos genes katG y inhA que
confieren resistencia a INH
El kit se puede realizar para cepas
aisladas del complejo MTB o
muestras pulmonares (muestras
procesadas por mtodo de Petroff)

MTBDR sl
Identificacin de resistencia a
Fluoroquinolonas
(ofloxacino,
levofloxacino y moxifloxacino), gen
gyrA.
Identificacin de resistencia a
aminoglucsidos
(kanamicina,
Capriomicina y Amikacina), gen rrs.
Extremadamente drogorresistente

GenoType

Extraccin
Amplificacin
Hibridacin

GenoType MTBDR plus

Gen rpoB (Rifampicina)

Isoniazida

rpoB WT1 (505-509)

katG

rpoB WT2 (510-513)

rpoB WT3 (513-517)

inhA

WT1

315

inhA WT1

-15 &
-16

MUT
1

S315
T1

inhA WT2

-8

MUT
2

S315
T2

inhA MUT1

C-15T

inhA MUT2

A-16G

inhA
MUT3A

T8C

inhA
MUT3B

T8A

rpoB MUT1 D516V

rpoB WT4 (516-519)

rpoB WT5 (518-522)
rpoB WT6 (522-526)

rpoB MUT2A H526Y

rpoB WT7 (525-529) rpoB MUT2B H526D
rpoB WT8 (529- 533) rpoB MUT3

S531L

Gen rpoB
rpoB WT2

rpoB WT4

rpoB WT1

rpoB WT3

rpoB WT6

rpoB WT5

rpoB WT7

rpoB WT8

GG
C

AC
C

AG
C

CA
G

CT
G

AG
C

CA
A

TT
C

AT
G

CA
C

CA
G

AA
C

AA
C

CC
C

CT
G

TC
C

GG
G

TT
G

AC
C

CA
C

AA
G

CG
C

CG
A

CT
G

TC
G

GC
G

CT
G

GlY

Thr

Ser

Gln

Leu

Ser

Gln

Phe

Met

Asp

Gln

Asn

Asn

Pro

Leu

Ser

Gly

Leu

Thr

His

Lys

Arg

Arg

Leu

Ser

Ala

Leu

GG
C

AC
C

AG
C

CA
G

CT
G

AG
C

CA
A

TTC

AT
G

CA
C

CA
G

AA
C

AA
C

CC
C

CT
G

TC
C

GG
G

TT
G

AC
C

CA
C

AA
G

CG
C

CG
A

CT
G

TC
G

GC
G

CT
G

His
CAT

Pro
CC
G

Thr
AC
C

Leu
CTA

514

Ile
ATA

Val
CT
C

517

518

519

520

Met
AT
G

Leu
TT
G

523

524

525

Tyr
TAC

527

528

529

530

Leu
TT
G

532

Pro
CC
G

510

AR
G
CG
G

Arg
CG
C

Lys
AA
A

515

Tyr
TAC

521

522

511

512

Pro
CC
A

Glu
GA
G

513

Gly
GG
C

507
509

508

rpoB MUT1

516

rpoB MUT2A

rpoB MUT2B

Asp
GA
C

Trp
TG
G

AR
G
CG
C

Cys
TG
T

Leu
CT
C

Gln
CA
G

Pro
CC
C
Glu
CA

rpoB531
MUT3

533

Gen katG y inhA

3
1
5

katG gene CatalasaPeroxidasa

inhA MUT1C-15-T
inhA MUTA-16G

A-16 C15

T-8

inhA MUT3A T8C

inhA MUT3B T8A
MabA (3-ketoacyl-ACP
Reductasa)

KatG codn 315

AGC->ACC (Ser>Thr)
AGC->ACA (Ser>Thr)
inhA (enol ACP reductasa)

7
3
5

GenoType MTBDR sl
Gen gyrA
gyrA WT1 8590

Gen embB

gyrA WT2 8993

gyrA MUT1 A90V

gyrA MUT2 S91P

306 MetVal
(ATGGTG)

embB
MUT1B

gyrA WT3 9297

gyrA
gyrA
Y
gyrA
gyrA

306 MetIle (ATGATC)

embB
MUT1B

306 Metlle (ATGATA)

embB
MUT1A

MUT3A D94A
MUT3B D94N
MUT3C D94G
MUT3D D94H

Gen rrs
rrs WT1 14011402

rrs MUT1
A1401G
rrs MUT1
C1402T

rrs WT2 1484

rrs MUT2
G1484T

Gen gyrB
gyrA WT2
gyrA WT1

gyrA WT3

CAC

CCG

CAC

GGC

GAC

GCG

TCG

ATC

TAC

GAC

AGC

CTG

85

86

87

88

89

90

91

92

93

94

95

99

GTG
V

CCG
P

GCC
A

ACC
T

gyrA MUT3A

AAC
N

TGC
C

gyrA MUT1
gyrA MUT2

gyrA MUT3B

TAC
Y

gyrA MUT 3C

GGC
G

gyrA MUT3D

CAC
H

Gen rrs
rrs WT1

rrs MUT1

1484
rrs WT2
rrs MUT2

GenoType MTBDR plus

63 cepas aisladas resistentes
de 356 aislados

RIF + INH + EMB; 5%

XDR ; 5%

STR; 6%
RIF; 16%

Aislados MDR= 60.32%

Aislados No MDR=37.78%

RIF + INH + STR; 22%

INH; 8%
STR+ INH; 5%
STR+ INH + EMB; 5%
RIF + INH; 29%

Fuente: Laboratorio de Microbiologa Clnica, INER, 2014

GenoType MTBDR plus

Sensibilidad de RIF en 38
aislado MDR

Resistencias no detectadas ; 3%
Mtb no identificadas; 40%

Resistente a rpoB; 60%

4/10
aislados

6/10
aislados

10 cepas
monorresistentes a
rifampicina

37/38
aislados
Resistencia en rpoB; 97%

Fuente: Laboratorio de Microbiologa Clnica, INER, 2014

GenoType MTBDR plus INH

Sensibilidad a INH en 11 aislados no MDR

Sensibilidad a INH en 38 aislados MDR

47.36%
Resistencia de katG + inhA=
73.67

Resistencia de KatG + inhA=72.72

18/38
aislados
45.45%
5/11
aislados

3/11
27.27%
aislados

26.31%
10/38
aislados

26.33%

27.28%

Fuente: Laboratorio de Microbiologa Clnica, INER, 2014

GenoType MTBDR sl EMB

Resistencia a EMB en 11 aislados
55.55%
44.45%
5/9
aislados

4/9
aislados

Sensibilidad terica para el gen

embB 47%-65%

Fuente: Laboratorio de Microbiologa Clnica, INER, 2014

GenoType MTBDR sl (FLQ Y AG)

Resistencia a FLQ en 3 aislados XDR

Resistencia a AG en 3 aislados XDR

66.66%

100.00%
0/3
aislados

0.00%

3/3
aislados

2/3
aislados

33.34%
1/3
aislados