DIAGNOSTICO

DE
LABORATORIO
BRISSA ERNESTINA CARREON CARREON 265199
DENISSE A RAMOS ALVARADO 257462
NAYELI NOEMI RAMOS LUJAN 265212
JENNY AMERICA ESTRADA 265234

REQUISITOS PARA UN
LABORATORIO DE MICOLOGIA
Sala adecuada para recolectar muestras
Poseer instrumentos para anlisis directos, cultivos e
identicacin de los hongos
Implementar tcnicas para hongos patgenos y
oportunistas
Contar con medidas de bioseguridad

TECNICAS
Y
METODOS
El diagnostico de micosis se basa en una clnica y pruebas de laboratorio
mas adecuadas, como la tcnicas apropiadas de recoleccin de material.
El mtodo tiene las siguientes caractersticas:
Poner de manifiesto el parasito en las
lesiones
Permitir el aislamiento del hongo por cultivo
directo o por medio de animales de
laboratorio
Identificacin del hongo
Investigacin de las reacciones inmunitarias
del husped

ESTUDIO CON LUZ DE WOOD

Es til en algunas micosis superficiales
Se realiza en un cuarto oscuro
Se utiliza una lmpara de luz ultravioleta que emite radiaciones de 366nm
Da fluorescencia reconocible con facilidad

FAVUS

Eritrasma

Pitiriasis
Versicolor

RECOLECCION DE MUESTRA
Material requerido

Pinzas
Tijeras
Bistur
Caja Petri
Porta Objetos
Cubre Objetos
Asas
Hisopo
Cepillos
Solucin Salina
Formol
Alcohol
Jeringas

Medios de Cultivo
Agar Glucosado
de Sabouraud con
antibiticos
Medio de
Tioglicolato
Medio
colorimtricos
para levaduras

Laboratorio

Refrigerador
Autoclave
Estufa de cultivo
Microscopios

OBTENCION DE MUESTRAS
Suspender medicamento, mnimo 3 das
Limpiar zonas afectadas con alcohol
Contar con mesa de exploracin para mayor
comodidad del individuo
Obtencin de la muestra, transporte y
procesamiento con tcnicas estriles

RECHAZO DE MUESTRA
Ante micosis pulmonares
se recolecta el esputo no
la saliva

Las muestras de piel,

uas o pelos deben
tomarse de zonas
enfermas no al azar

Muestras insuficientes

No usar muestras con

mucho tiempo de
almacenamiento, en
hielo seco, congeladas
etc. Por mas de 24 hrs.

ESCAMAS
Cinta adhesiva
transparente
(Scotchtape)

Tcnica de Tapiz

Lesiones hmedas

Lesiones cutneas
secas

Los cepillos

Se examina el pelo daado

PELO

En el caso de tias, se usa la luz de Wood

Se utilizan pinzas de depilar o bistur el cual raspa la
superficie afectada
Si hay pus puede sembrarse con un hisopo (para mas
conservacin se coloca en suero fisiolgico)

EXUDADO DE MUCOSAS
Se utilizan azas de alambre de platino rectas o
redondas para el sembrado en cultivos y para su
recoleccin de preferencia hisopo
Si el anlisis no es inmediato se colocan en suero
fisiolgico de preferencia con un antibitico para
evitar la reproduccin bacteriana

Existen varios tipos de exudados: Exudado seroso,

Exudado fibrinoso , Exudado vaginal y rectal
Exudado purulento, Exudado hemorrgico, Exudado
farngeo.

Si son vaginales, el paciente no necesita estar

menstruando ni utilizar medicamento por 24 hrs, al
recolectar la muestra se enva al laboratorio

PUS Y LIQUIDOS PATOLOGICOS

(LCR, LIQUIDO PLEURAL, ORINA)
Para el Liquido Pleural se aspira con una jeringa la
muestra y es depositado en tubos estriles.
Para el LCR y Orina se centrifuga a 2000 rpm por 20
min y con una pipeta Pasteur estril, se separa y se
coloca en otro tubo para ser analizada
El Pus se busca levaduras , filamentos y granos para
encontrar Cryptococcus

EXPECTORACIN
Se utiliza un desinfectante o solucin Lugo, la
muestra no debe dejarse mucho tiempo a
temperatura ambiente.
Si se sospecha de micosis pulmonar preferible hacer
muestra bronquial por broncoscopia, la cual a:
- 20 ml se aaden 10ml de pepsina a 1%
- se incuba 2 horas a 37C
- centrifuga a 2000 rpm durante 30min

HECES

Se recolecta en un
recipiente estril un poco
cantidad de muestra
Con un hisopo rectal,
colocar en un porta objeto
Aadir una gota de agua
estril y poner porta
objeto
Observar

SANGRE

Para hemocultivo primero

se ha de citratarse,
heparinizarse y
desfibrinarse con perlas de
vidrio o coagulante
Se toman de 4 a 5ml en
tubos morados que
contienen anticoagulante
para mayor conservacin
de la muestra

FROTIS
Es til en pus, exudados y otros lquidos como
expectoracin.

Se fijan en un portaobjetos mediante un ligero

calentamiento o poniendo dos gotas de alcohol
Se puede utilizar tincin Gram, Azul de metileno,
Giemsa

BIOPSIA DE TEJIDOS U ORGANOS

Conviene inocular directamente un animal de laboratorio a
la vez, el cual se sacrificara a los 15 das y se siembran los
rganos.
Del fragmento obtenido se coloca 10% de formol y otra en
un tubo estril para cultivo, de preferencia con solucin
fisiolgica
La tincin sistemtica se lleva a cabo con hematoxilina y
eosina para valorar el tipo de reaccin de los tejidos que
pueden ser;
Edemas
Exudados

El diagnostico de micosis se puede confirmar si se encuentran

las estructuras micoticas y si estas son muy especificas

Cada frasco debe etiquetarse debidamente con el nombre, la

edad y el numero de expediente del enfermo y tipo de prueba
practicada

ANLISIS DIRECTO
SENCILLO

SIN
MODIFICACI
ONES
CUANTIFICACI
N DE
ELEMENTOS

RPIDO

BARATO

ESCAMAS
PELOS
EXUDADOS
EXPECTORA
CIN
OTROS
LQUIDOS

EXUDADOS
DIRECTO
AGUA
DESTILADA/
SOLUCIN
FISIOLGICA
SOLUCIN DE
LUGOL

Muestra de liquido cefalorraquideo con

tincin de tinta china de Cryptococcus
neoformans

MUESTRAS CON
QUERATINA (PELOS
Y ESCAMAS)

OBSERVAR A
LOS 5-10 MIN
CUBREOBJETOS

DIFICILES DE
OBSERVAR
SUSTANCIAS
ACLARANTES
EL
ACLARAMIENTO
ES MAS INTENSO
SI SE CALIENTA
LA LAMINILLA
DESTRUYE EL
MATERIAL
BIOLGICO

1 GOTA DE
SOLUCIN

SOLUCIN DE
POTASA O SOSA AL
5-40%+GLICERINA
SOLUCIN DE
LACTOFENOL
SULFITO DE SODIO
LAURILSULFATO
DE SODIO

FIJACIN DE
ESCAMAS

CAPA DELGADA
DE ALBMINA
DE MEYER EN
PORTAOBJETOS

CONSERVACIN POR
TIEMPO INDEFINIDO
SE UTILIZA EN LA
ENSEANZA

COLOCACIN
DE
FRAGMENTOS
DE ESCAMAS,
PELOS O UAS

SECAR A
TEMPERATURA
AMBIENTE

LISTOS PARA
TEIR

ONICOMICOSIS
CANDIDOSIS

Dermatofitoma (negro de
clorazol) 10X & 40X

MOSAICO FNGICO O
TRICOFTICO

PLIEGUES DE
ESCAMAS

FIBRAS DE
ALGODN

DEPSITOS DE
GRASAS
A

Artefactos en el examen directo.

A)gotas de grasa
B)mosaico tricoftico

ANALISIS DIRECTO CON

FLUORESCENCIA
BLANCO DE
CALCOFLOR

Filamentos bajo microscopio de

fluorescencia

CULTIVO
HISOPO ESTRIL

ASA DE PLATINO

DESARROLLO DE
LEVADURAS 24-48
HORAS

26- 27C
MICOSIS
PROFUNDAS 3037C
TCNICA ZIG ZAG

CONTAMINANTES
2-4 DIAS

OS
G
N
O
H
1-2
S
O
N
GE
PAT ANAS
SEM

AZU
L AC L DE
TOF
ENO
L

RESIEMBRA
IN
RECOLECC
CON ASA DE
PLATINO
O DE
FRAGMENT
COLONIA

EN
DEPOSITAR
OTRO TUBO

CULTIVO EN LAMINA O
MICROCULTIVO
LMINA
DESECADA

CUADRADO DE
GELOSA

CULTIVO SOBRE PELO O

MTODO DEL ANZUELO
TIERRA
HMED
A

DEPOSITAR
CABELLOS/
PELOS

PERMITE
AISLAR
DERMATFIT
OS DEL
SUELO Y
ESTUDIAR
FORMAS
SEXUADAS

AUXONOMA
ASIMILACIN DE COMPUESTOS CARBONADOS Y NITROGENADOS

RESULTADO
POSITIVO:
HALO DE
CRECIMIEN
TO
ALREDEDO
R DEL
AZUCAR

ZIMOGRAMA

VIRAJE
=
ACIDIFI
CACI
N

BURBU
JA=
FORMA
CIN
DE GAS

ESTUDIO DE LAS NECESIDADES

VITAMNICAS

SNTESIS DE UREASA
Se utiliza para

dermatfitos
Se utiliza el medio
rojo de fenol y se
agrega urea al 20%,
se siembra y se
incuba.

INOCULACIN EXPERIMENTAL
Se emplea en investigacin pero puede servir para el diagnstico.

Se inocula va:
Subcutnea
Intravenosa
Intraperitoneal
Intratesticular
Intracraneal
Se hace una suspensin del hongo

REACCIONES INMUNOLOGICAS
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

CUTANEA
Aplicacin intradrmica de antgenos
obtenidos de los hongos, de micosis
tanto superficiales como profundas.
Resultado positivo = 5 mm de dimetro
Estas pruebas son auxiliares en el
diagnostico o la valoracin del sistema
inmunitario del husped.

 SERODIAGNSTICO Y DETECCIN DE ANTIGENOS

Para la deteccin de anticuerpos, las ms conocidas son:

Anticuerpos precipitantes
Tcnica de Ouchterlony
Inmunoelectroforesis
Electrosinresis
Inmunofluorescencia
Inmunoenzimticas

PRUEBAS DE SENSEBILIDAD A
FRMACOS

Para medir la sensibilidad se utilizan:

Tubos germinativos
Consumo de metabolitos
Citometra de flujo
Mtodos basados en agar
Dilucin de caldos de cultivo

 Los mtodos de dilucin son los mas utilizado y estn

estandarizados por National Committee for Laboratory

Standars para Candida y cryptococcus.
Candida resulta ser resistente a fluconazol

PRUEBA COLIRIMTRICA
Se basa en el azul de Alamar (de

Azul a Rojo).
Tcnica de Heatley:
Se toma una suspensin que
contenga esporas, levaduras o
filamentos y se distribuye en la caja
Petri que contenga agar sabouraud.

AISLAMIENTO DEL HONGO

El hongo patgeno debe ser aislado de otros microorganismos.

Para las levaduras se agrega penicilina-estreptomicina.
En hongos filamentosos se coloca la muestra antes de sembrarla en

lquido de Raulin.

IDENTIFICACIN DE HONGOS
Se deben de estudiar las siguientes caractersticas:
Macroscpicas
Microscpicas

Genero y especie

Fisiolgicas

Es preferible utilizar el medio Sabouraud

Morfologa Macroscpica

Morfologa microscpica

Forma y tamao

Anlisis a travs del tubo

Color

Anlisis de un fragmento de
cultivo

Difusin del pigmento

Mtodo de la cinta adhesiva

transparente (Rush-Munro)

Coloracin

Cultivo en lmina o microcultivo

Textura
Superficie
Aspecto
Consistencia
Rapidez de crecimiento

En el estudio de los rganos fngicos se

debe estudiar:
Talo
Esporas asexuadas y aparato conidigeno
Esporas sexuadas y estructuras donde se forman
Cualquier formacin anexa

Preservacin y
conservacin de
cultivos
1. Preservar su
viabilidad
2. Sin degeneracin
3. Sin variacin
4. Ni mutacin

METODOS DE
CONSERVACION
Se pueden mantener en agar,
transfiriendo periodicamente a
medios frescos inclinados.
Como: sabouraud simple, agar patata,
extracto de malta, harina de maz,
infusin de cerebro corazn

 El mtodo de agua destilada sirve para preservar

mas de un ao y asta 10 aos, es cmodo
sencillo y barato
Se puede congelar a menos de 70 grados en
agar o en glicerol, se mantiene por mas de 1
ao.
Congelado en nitrgeno liquido se conserva asta
5 aos
Otro mtodo consiste en cubrir la cepa con
aceite mineral estril (2 horas a 120 grados
centgrados)
La tcnica de liofilizacin permite conservar
hongos asta por 30 y 40 aos.

OTROS TIPOS DE
MICROSCOPIA..
Contraste de fase
Campo oscuro
Microscopia electrnica

LA BIOLOGA MOLECULAR
EN LA MICOLOGA
MEDICA
Hibridacin
Reaccin de cadena de la polimerasa
(PCR)
Polimorfismo de la longitud de los
fragmentos de restriccin
Southern blotting

RIESGO BIOLOGICO

MEDIDAS DE SEGURIDAD
Se debe se actuar con responsabilidad
Trabajar bajo normas de seguridad
Campana de flujo laminar
Desinfectar reas de trabajo
Mecheros
Evitar corrientes de aire y plantas naturales
No se debe comer ni beber ni fumar
Algunos de los hongos que deben de tratarse
con cuidado son: Coccidioides immitis,
Histoplasma Capsulatum, Blastomyces dermatitidis,
Paracoccidioides brasiliensis y Penicillium marneffei.

BIBLIOGRAFIA

Arenas, R.(2008), Micologia medica ilustrada, Ed. McGrawHill, 3era edicin,

Mxico. Pags: 40-59

Bonifaz, A. (2012) Micologia medica basica, McGrawHill, 4ta edicin, Mexico.