TRATAMIENTO BIOTECNOLOGICO DE LA

CONTAMINACION
La biotecnologa puede no ser la solucin
completa a la contaminacin
medioambiental pero puede abordar su
control y eliminacin ya que implica las
siguientes reas:
Monitorizacin medioambiental
Remediacin de lugares contaminados
Reduccin o eliminacin de residuos
Prevencin de la contaminacin (tecnologas
limpias)

MONITORIZACION MEDIOAMBIENTAL
Es la capacidad de determinar:
que productos qumicos esta presentes
Su concentracin
Potencial de riesgo

Una adecuada monitorizacin permite

desarrollar leyes que protejan el
medioambiente

La biotecnologa medio ambiental

ofrece un numero de tcnicas de
monitorizacin precisas y fiables,
alternativas al anlisis qumico
MUESTREO
El recojo de muestra representativa y
homognea no es un problema, pero
en muestra ambientales de suelo aire
o agua suelen ser intermitentes y
poco homogneas

Muestreo de suelos:
los lugares contaminados requieren a menudo de:
- algn tipo de estudio previo
- informacin documentada sobre la contaminacin presente
Dado que la contaminacin se distribuye en forma desigual, el
numero de muestras depender del rea que cubre la
contaminacin y a diferentes profundidades
La probabilidad de localizar contaminacin es tomar muestra en
forma de cuadricula al azar
- rectangular
- cuadradas
- rombo
- espiga
Desventajas:
- genera amplio numero de muestras
- el anlisis es costoso

MUESTREO DE AGUAS
El muestreo de la mayora de las aguas
residuales y contaminadas es difcil debido
a su naturaleza altamente variable
Las muestras se deben tomar:
- en un periodo de tiempo
- Diferentes secciones de la va fluvial
- diferentes profundidades
Donde muestrear:
- depende de los afluentes y efluentes
- estratificacin

MUESTREO DE AIRE
Esta dificultado por los mismos problemas que el
muestreo de aguas, pero esta influenciado por
- direccin del viento
- fuerza del viento
Sistemas de muestreo
- bombeo directo del aire al analizador se utiliza
cuando se tiene baja concentracin
- pre concentracin necesaria para un correcto
anlisis
- directa captura de muestra en botellas, fuelles
jeringuillas, bolsas

Cualquiera sea el origen de la muestra

Agua, suelo o aire sino es analizada inmediatamente
debe de ser cuidadosamente almacenada
- evitar perder contaminantes
- transformacin del contaminante
- favorecer ulterior contaminacin
El anlisis de contaminantes ambientales pueden ser:
- Fsicos
- Qumicos
- Biolgicos
La biotecnologa pondr mayor nfasis en los mtodos
biolgicos

ANALISIS FISICOS
Se aplican para determinar los niveles de
contaminantes y otros compuestos en el agua y en
el suelo; en general son los siguientes:

Gravimtrico: Determina
- Slidos suspendidos (SS)
- Slidos totales (ST)
- Niveles de sulfato

pH se mide fcilmente con un electrodo de pH,

condiciones muy acidas o muy alcalinas sern
corrosivas y limitan la actividad biolgica

Colorimtrico: Importante para determinar calidad de aguas

(color , turbidez)
-

Tubos de comparacin
Discos de color
Colormetros
Espectrofotmetro

Oxigeno disuelto: Se mide para sustentar presencia de

organismos biolgicos aerbicos ( calidad del agua)
- Electrodo de oxigeno
- Mtodos qumicos

Electrodos de iones especficos.(potenciometria) Pueden ser

usados para determinar niveles de:
- amonio, nitrato nitrito, calcio, sodio y otros iones

Estos ltimos pueden ser automticos por sensores o

monitorizacin pero pueden ser presa de engao y dao mal
intencionado

ANALISIS QUIMICOS
Existen mtodos estndares para determinar
componentes medio ambientales como
.
Aniones: cloruros,nitratos nitritos fosfatos

Metales: se determinan por

- Mtodos qumicos tradicionales
- Absorcin atmica

Compuestos orgnicos: requieren tcnicas

- HPLC
- GC
- Espectros de masas (componente individual)

ANALISIS BIOLOGICOS

A. Mtodos microbiolgicos
El anlisis microscpico
Contaje de variables
Que aplican medios selectivos, utilizados para la valoracin del
medio ambiente por:
- Patgenos
- estudio de comunidades microbianas

El contaje de variables se basa en la premisa que:

Cada colonia formada se deriva de una nica clula
Usando un medio selectivo puede estudiarse el numero de
bacterias como: Salmonella y coliformes
La tcnica selectiva favorece la valoracin de
- especies de crecimiento mas rpido
- pero especies de crecimiento lento pueden no ser detectadas

En muestras ambientales es indispensable:

- Tratar de reproducir las condiciones
tomada
Ya que:

donde la muestra fue

- Algunas bacterias pueden no crecer y no ser detectadas

Por tanto:
Las caractersticas de crecimiento del organismo de inters
deben ser conocidas antes que su numero sea estimado
Los mtodos microbiolgicos normales son adecuados para
cultivos de clulas individuales en suspensin
Pero en muestras medioambientales, los micro organismos
existen como agregados o biofilms
`En aguas residuales por ejemplo donde el tratamiento es
aerobio y anaerbico las poblaciones microbianas son
mezclas y la mayora forman agregados

Otros mtodos directos para estimacin de numero de

microbios incluyen a:
Pruebas tales como
- inmunolgica (ELISA)
- cito metria de flujo
Estos mtodos mediante el uso de anticuerpo pueden detectar
- poblaciones microbianas
- bacterias especificas
Un ejemplo del uso de las tcnicas inmunolgicas es la
deteccin de metangenos en birreactores anaerbicos
usando estircol de vaca y cerdo
Las bacterias tambin pueden ser identificadas por
-

anlisis de sus patrones de cidos grasos unidos a esteres

de fosfolpidos (PLFAME)

- cidos grasos fosfolipdicos( PFLA)

B. Monitorizacin Fisiolgica
Se basa en la demanda biolgica o
bioqumica de oxigeno (DBO), que fue
establecida en 1912 por la comisin real
sobre vertido de aguas residuales como
parmetro de calidad
La actividad microbiana puede seguirse por
mtodos indirectos como:
-

Produccin de gas
medida de los niveles de ATP y
Capacidad de las clulas activas para
reducir compuestos de tetrazolio que pasan
de incoloro a azul

C.TECNOLOGIA

DEL DNA RECOMBINANTE

Esta tecnologa a alcanzado un nivel que permite detectar genes o

secuencias de DNA especificas, por tanto micro organismos en el
medio ambiente
Puede ser utilizada para estudiar:
La

ecologa microbiana de los suelos y las aguas (manantiales

hidrotermales)
Digestores
Aguas

aerbicos y anaerbicos

subterrneas contaminadas

Evaluacin
Procesos

de bio lixiviacin

Liberacin
Procesos

de la bio diversidad

de micro organismos manipulados genticamente

de bio remediacin

La (PCR) es una tcnica que precisa

cantidades pequeas de muestras
ambientales una ves extrado y purificado el
DNA se investiga con una sonda la
presencia de un gen especifico o una
secuencia de DNA que puede actuar como
marcador
El DNA de doble hebra se separa en dos
calentado a 90 C, durante unos minutos,
se aade oligonucleotidos cortos de una
sola hebra (cebadores) y Taq polimerasa la
mezcla se enfra a 60 C

APLICACIONES DE LA PCR

Estudio de comunidades bacterianas, en ambientes difciles de

reproducir

Valoracin de la diversidad bacteriana sin realizar cultivo

Seguir poblaciones bacterianas en lodos activados

Dinmica de la poblacin en bio reactor de lecho percolador

Estimar el grado de variacin gentica en la determinacin de

la bio diversidad

Detectar bacterias bio lixiviadoras

Permite amplificacin del DNA y por tanto identificar genes

poco abundantes

MONITORIZACION BIOLOGICA DE LA
CONTAMINACION
Utiliza dos tcnicas:
a- Aquellas que describen las condiciones in situ
mediante medida de los cambios en las especies en
el medio ambiente (biomarcadores) tras exposicin a
la contaminacin
B- Aquellas que utilizan material biolgico para valorar
la toxicidad de una determinada sustancia qumica
aislada
BIOMARCADORES
Miden la accin de los contaminantes en el ambiente
real y complejo a niveles no letales

Ventajas del uso de bio marcadores

La determinacin puede hacerse durante

un periodo de tiempo, y no con una
muestra nica como en el anlisis qumico

Pueden indicar el riesgo a exposicin a un

determinado producto qumico

Pueden proporcionar informacin sobre la

toxicidad de compuestos aislados o
mezclas en el ambiente real a niveles no
letales

TIPOS DE BIO MARCADORES

Ecolgicos: Miden, cambios en la densidad de la poblacin despus de

la exposicin (especie clave, diversidad)

Indicadores fisiolgicos: Permiten determinar

-

Acumulacin de metales pesados,

Cambios en la velocidad de procesos de lodos,
Actividad microbiana,
DBO, ETC.

Indicadores bioqumicos: Tales como

- Citocromo p450,
- Enzimas especificas.

Inmuno qumica:
- ELISA ,RIA

Indicadores genticos:
- Sondas de DNA
- Gen de la luciferaza bacteriana (lux)

TEST DE TOXICIDAD UTILIZANDO MATERIAL BIOLOGICO

Se basa en la medida de los efectos letales de un compuesto
nico sobre un sistema biolgico
Ejemplo: uso de material biolgico para detectar un compuesto
orgnico

DAPHNIA perdida de movilidad de la pulga Daphnia pulsee

despus de 48 horas

Microtox tm, Biotox ssp reduccin de la emisin de luz por

bacterias Photobacterium fisceri y p. phosphoreum como
toxicidad despus de 15 minutos

Test de algas, Selenastrum ssp para evaluar calidad de aguas

Test de Ames,para analizar sustancias segn su capacidad de

producir mutaciones

Test de germinacin de semillas

BIO SENSORES
Pueden definirse como dispositivos que incorporan un
elemento sensor biolgico unido ntimamente o
integrado con un transductor de la seal

El material biolgico que puede ser utilizado como biosensor de

mayor aplicacin son:
-

Protenas,
Anticuerpos,
Enzimas,
Receptores hormonales
Clulas enteras,
DNA.

Ventajas de biosensores en la monitorizacin medioambiental

Deteccin on-line, monitorizacin en tiempo real

Respuesta rpida
Son porttiles en muchos casos
Funcionan en mezclas complejas
Requieren menor gasto y tiempo que los anlisis
convencionales
Muy especficos en su respuesta
Alta sensibilidad