UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN

BAUTISTA
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina Humana
Curso : Biologa Molecular y Celular
Ciclo I semestre 2015-II

PRCTICA N4

EXTRACCIN DE CIDO
DESOXIRRIBONUCLEICO

Cromosomas
Estructuras de
varias formas y
tamaos formada
por
nucleoprotenas.
Nucleoprotenas
combinacin de
cido nuclico y
protenas (histonas)
Formada por una
dos cromtidas
(hermanas), unidas
por un centrmero
(DNA no est
contrado).

Base molecular de la
herencia

Genes: son unidades hereditarias que se

transmiten de una generacin a otra,
estos contienen informacin codificada
para la caracterstica.

cido Nuclico
Polmero de
nucletidos.
RNA
DNA
Molcula larga
filamentosa,
estable y con
capacidad de
autorreplicacin.

Nucletidos
Unidad estructural
bsica de DNA y RNA.
Contiene:
Grupo fosfato - unido
al azcar por enlace
fosfodister.
Azcar Pentosa (5 C).
DNA Desoxiribosa
RNA Ribosa

Base nitrogenada
Purinas: (Adenina y Guanina)
Pirimidinas:
Citocina
Timina=DNA
Uracilo=RNA

Base Nitrogenada
Purinas: (A, G)
Formadas por dos
anillos

Pirimidinas: (T, C, U)
Formadas por un
anillo bsico que
contiene dos
molculas de
nitrgeno.

Base Nitrogenada

Se unen entre si mediante puentes de hidrgeno (su

funcin?)
Slo una purina con una pirimidina, produciendo una
doble hlice simtrica.
Adenina = Timina (DNA)
Adenina = Uracilo (RNA)
Guanina = Citocina

Estructura de DNA

Otras propiedades del DNA

Las hlices son antiparalelas
53
35

Medidas
Distancia entre bases nitrogenada 3.4
A
Dimetro de la hlice 20 A
Vuelta de espiral (10 bases
nitrogenadas) 34 A

Otras propiedades del DNA

Regla de Apareamiento de Chargaf
Dice que las bases nitrogenadas se aparean de tal
manera que el nmero total de purinas es igual al
nmero total de pirimidinas. Sin embargo, la cantidad
de A+T no es necesariamente igual a la cantidad de
C+G.
A+G / C+T = 1
(Purinas) (Pirimidinas)
Ej. 5 AAATTTCGGCGT 3
3 TTTAAAGCCGCA 5
7+5/5+7=1
A+T= 14
C+G= 10

A.Extraccin de ADN:

El ADN en las clulas eucariotas se

encuentra en el ncleo disperso y muy
replegado unido a protenas para formar la
cromatina. Para extraerlo se requiere
homogenizar la muestra para proceder al
lisado de membranas , la liberacin de
ADN el retiro de protenas asociadas a
dicha macromolcula y su posterior
obtencin bajo la forma de fibras .

1. Colocar en el mortero la muestra ( 3

fresas sin hojas y/o pltano 3 cm/ ) e
incorporar 2 ml de NaCl 0.9% triturar
por 1 minuto.

2. Aadir 10ml de la solucin de lisis y seguir triturando

hasta obtener una masa homognea y semilquida (aprox.
5minutos).
Solucion de lisis : (EDTA,SDS,NACL)
EDTA : ACIDO ETILENDIAMINTETRACETICO (AGENTE
QUELANTE)
Atrapa los iones magnesio presentes en el medio para evitar
la accion de enzimas que degradan al ADN.
SDS: (DODECIL SULFATO DE SODIO ) (DETERGENTE
ANIONICO)
Solubiliza proteinas y membranas.
NACL: (Sal) Solubiliza el ADN
3. Incluir a la preparacin 2ml de acetato de sodio, mezclar,
para luego dejar reposar por 5 minutos.
Acetato de sodio : (sal) Precipita el ADN

Cuando el detergente entra en contacto con la clula, captura los lpidos y las protenas.

4..Filtrar la preparacin en un tubo de 16x150 con la

ayuda de un embudo cubierto con gasa.
5. Transvasar 5-8ml d el filtrado a un beaker pequeo e
incorporar 2 volmenes de etanol frio por las paredes e
introducir rpidamente una bagueta delgada y girar sobre su
mismo eje a fin
para recuperar el ADN bajo la forma de fibras y colocarla
en un tubo 16x150mm conteniendo 1 ml de solucin salina
citratada para su resuspencin y uso en la parte
experimental B.
6. Obtener ms fibra de ADN para reconocer el carcter
cido, para ello dejar caer en las hebras el colorante bsico
como el azul de metileno,

B. Identificacin de Pentosas
(reaccin de Bial)
Las pentosas en solucin cida se
deshidratan dando furfural que al
reaccionar con el orcinol en
presencia de FeCl3, dan un producto
de condensacin de color verdeazulado

Las pentosas y hexosas (tanto

aldosas como cetosas) en
presencia de
cidos minerales (p.ej., cido
sulfrico) y a temperaturas
elevadas sufren
procesos de deshidratacin
originando
furfural(derivadosde
pentosas)o
hidroximetilfurfural (derivados
de hexosas), tal y como se

Colocar 1 ml de ADN en un tubo 16x150 y en otro tubo de

16x150 colocar 1 ml agua destilada.
Agregar 3 ml de Reactivo de Bial a cada tubo; calentar
cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta
que la solucin comience a hervir.
Obsrvese y antese el color que aparece en cada tubo de
ensayo.