EXPRESION DEL

GEN melA DE
Rhizobium etli
EN E coli

HURTADO SENZ ANDRS.

compuestos aromticos y
combustibles: Aplicaciones en los
sectores farmacutico.
Se obtienen mediante procesos
basados en refinacin qumica a partir
del petrleo y derivados.
Procesos generan subproductos que
contaminan
el medio ambiente.

Seres vivos realizan transformaciones

qumicas por medio de protenas
especializadas llamadas enzimas.
La biotecnologa
Aprovecha capacidad cataltica
Generar procesos biolgicos de
produccin de molculas tiles.
Conocida: ingeniera de vas
metablicas (IVM).

Melaninas polmeros papel protector en

varios organismos.
Caracteristicas fisico-qumicas, diversas
aplicaciones:
Resinas de intercambio inico o
catinico.
Semiconductor amorfo.
Fotoprotector.
Antioxidante
Agente antiviral

MATERIALES Y
MTODOS.
Cepas mantenidas en medio lquido o
solidificado.
La cepa CFN42 de R. etli (medio PY)
La cepa E. coli XL 1 Blue fue usada en
experimentos de clonacin.
cepa W3110 para la expresin del gen
melA.

BACTERIAL STRAINS AND

GROWTH CONDITIONS
Cepa R etli CFN42 medio: 5g de extracto de levadura,
10g de caseina y 10 ml de CaCl2 a 0.7 M. por cada
litro.
El medio de crecimiento clonacin de melA LuriaBertani (LB) lquido y slido: 5g extracto de levadura y
10 g NaCl. por cada litro.
Fase exponencial, se inocul en medio M9
suplementado con 0.1 mM de IPTG (Isopropil--D-1tiogalactopiransido), 40 g/mL de CuSO2, 2 g/L de
glucosa y 0.4 g/L de L-tirosina en polvo, para iniciar a
una densidad ptica a 600 nm (DO 600) de
aproximadamente 0.1.

BACTERIAL STRAINS AND

GROWTH CONDITIONS
El antibitico concentracin 200 g/ml de
Ampicilina cuando las cepas de E. coli que
contenan el plsmido.
Casena slida medio produccin de melanina
contenida: 1 g de glucosa, 5 g NaCl, 0.1 g
CaCl2, 10 g bactotryptone, 15 g agar casena,
0.4 mg CuSO4 y 2 g I-tirosina. por litro
Matraces bafleados de 250 mL a 30C y 300
rpm en una incubadora de agitacin marca
New Brunswick Scientific, modelo C24KC.

PLASMID CONSTRUCTION
5melA 5' CCG AAC GTC CAT GGC GTG GCT
GGT CGG C3
3melA 5' CCG GAG CCC GGG TGT TAG GCG
GAC AC3
El cambio secuencial del nucleotido en el
codn inicial no causa ningn cambio en la
secuencia de la protena.
Prolina se cambi por una Alanina ocurrida en
la segunda posicin.
Protocolo de desnaturalizacin 95 C/3 min

CONCLUSIONES
Se clon y expres el gen melA de R. etli
en E.coli.
La cepa W3110 de E. coli transformada
por el plsmido pTRCmelA produjo
eumelanina a partir de tirosina.
En cultivos lquidos se determin que se
obtienen rendimientos de conversin de
tirosina en eumelanina cercanos al 100%
del terico.

AUTORES
Expression of the melA gene from Rhizobium
etli CFN42 in Escherichia coli and
characterization of the encoded tyrosinase
Natividad Cabrera-Valladares.
Alfredo Martnez.
Silvia Piero.
Vctor H. Lagunas-Munoz.
Raunel Tinoco.
Ramn de Anda.
Rafael Vzquez-Duhalt.
Francisco Bolvar.
Guillermo Gosset.
Departamento de Ingeniera Celular y Biocatlisis, Instituto de
Biotecnologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Apdo.
Postal 510-3, Cuernavaca, Mor. 62250, Mxico

GRACIAS