Hovenia dulcis Thunberg

As flores so hermafroditas, pequenas,

branco-esverdeadas a creme e numerosas.
Polinizao: Melitofilia.
Disperso: Zoocrica.
Habitat: Desenvolve-se tanto no interior
como em bordas de florestas na Mata
Atlntica.
Distribuio geogrfica: China, Coria e
Japo.

Para debatermos:
Bibliografia

descreve

efeitos

inibitrios

no

crescimento de clulas de hepatoma humano

(linhagem HepG2) e de adenocarcinoma de clon
humano

(linhagem

HT29)

atravs

do

extrato

metanlico de folhas;
Material de campo x material in vitro: alelopatia e

outros fatores;
Tempo de incubao com o reagente WST-1;
Utilizao de leveduras.

Sugesto de outras metodologias

Mtodo MTT;

Mtodo NRU;

Mtodo QPT;

Citotoxicidade pelo mtodo de difuso em gar.

Mtodo MTT
Avalia atividade mitocondrial pelo metabolismo de

sais de tetrazolium.
Clulas
semeadas em
placas

Adio do
corante vital
MTT

Leitura em
espectrofotmetro

Incubao
por cerca de
30 minutos

Substituio
por DMSO

Mtodo MTT

Os parmetros de avaliao so a porcentagem de

morte celular e a IC50 (concentrao que inibe 50%

de crescimento celular);

Desvantagem: tem o mesmo princpio do WST-1,

porm com uma fase a mais, na adio de DMSO.

Mtodo NRU
um corante vermelho solvel em gua que mede a atividade de

reteno do corante pelos lisossomos das clulas viveis pela

intensidade de cor da cultura;

Concentra-se

nos

lisossomos,

fixando-se

por

ligaes

eletrostticas hidrofbicas na matriz lisossomal. Substncias que

danificam as membranas resultam no decrscimo de captura e
ligao do corante;

Quantificao

feita por espectrofotometria atravs de leitor

automtico de microplacas;

Mtodo NRU
Clulas
semeadas
em placas

Leitura

Adio do
extrato de
interesse e
incubao

Lavagem com
soluo de cido
actico

Adio do
corante
NRU e
incubao

Lavagem
com PBS

Atravs da curva do grfico com os resultados pode-se

encontrar o ndice de citotoxicidade (IC50) que significa a

concentrao do extrato que induz 50% de lise ou morte
celular e como consequncia a inibio de incorporao
do vermelho neutro.

Mtodo MTT e NRU

Desvantagens:

parmetros

dependentes

de

condies fisiolgicas das clulas, podendo ser

modificados

por

aspectos

como

densidade

secreo celular.

Vantagens: estes mtodos so precisos, sujeitos a

automao

com

as

clulas

crescendo

em

condies similares, podem ser comparadas por

esses mtodos.

Mtodo QPT
Este mtodo baseia-se na adsoro, eluio e medio

de densidade tica (D.O.) do corante Azul Brilhante de

Coomassie que cora as protenas;
Mede

a taxa de crescimento celular atravs

determinao colorimtrica da quantificao
protenas totais contidas em cultura celular;

da
de

Avaliao do efeito de uma determinada substncia

sobre o crescimento/proliferao celular, ou seja, o grau

de inibio do crescimento celular provocado pela
substncia em questo fornece um indicativo de sua
toxicidade;

Mtodo QPT
Desvantagens: quantifica as clulas indiretamente, ou seja,

de forma relativa quantidade de protenas totais e os

resultados obtidos so dependentes do tipo celular utilizado.

Vantagens:

teste

considerado
rpido,
sensvel,
reprodutvel, possui simplicidade de execuo, custo
relativamente baixo, requer reagentes com baixa
toxicidade, sujeito a automao, h possibilidade de se
estocar as placas para um processamento posterior,
repeties do ensaio utilizando as mesmas microplacas, e
no to dependente das modificaes fisiolgicas
celulares como os ensaios de viabilidade atravs da
avaliao do metabolismo celular.

Citotoxicidade pelo mtodo de difuso

em gar:
Clulas
semeadas
em placas de
Petri

Retirada do meio
e adio de
soluo com gar

Anlise
microscpica
(integridade
celular)

Adio do
corante
NRU e
incubao
Anlise
macroscpica
(presena de
halo)

Toxicidade: medio (quando houver) do halo com rgua

milimtrica. A presena de um halo claro ao redor do

material testado demonstra que houve lise e morte celular,
liberando o corante vermelho neutro incorporado nas clulas.

Citotoxicidade pelo mtodo de difuso

em gar:

Vantagem: uma tcnica qualitativa que pode ser utilizada

para materiais de diferentes constituies fsicas, inclusive

para materiais oleosos como os cosmticos, devido sua
praticidade e convenincia.
Desvantagem: a medio com regra milimtrica

trabalhosa e subjetiva, a substncia que se deseja

testar tem que se difundir pelo gar, enquanto na
microplaca o contato direto.

Referncias
Ao

anti-inflamatria e citotoxicidade sobre clulas ntegras e tumorais da

apigenina e TT-farnesol Tese de ps-graduao em Sade e Desenvolvimento de
Edilson Jos Zafalon UFMS (2012);

Avaliao da citotoxicidade induzida por produtos cosmticos pelo mtodo de

quantificao de protenas totais em clulas 3T3 Tese de Mestrado Acadmico em

Vigilncia Sanitria de Clarice Lima do Canto Abreu Programa INCQS (2008);
"Determination of melamine in dairy products using electromembraneLPME followed

by HPLC" - Armin Fashi, Mohammad Reza Yaftian Abbasali Zamani (Abril de 2015);
"Development and validation of an HPLC/DAD method for the determination of 13

sulphonamides in eggs" - Simona Summa, Sonia Lo Magro, Antonio Armentano,

Marilena Muscarella (Abril de 2015);
"Novel HPLC Fluorescence methodology for the determination of methylglyoxal and

glyoxal. Application to the analysis of monovarietal wines Ribera del Guadiana" - M

Isabel Rodrguez-Cceres, Mnica Palomino-Vasco, Nielene Mora-Diez, M Isabel
Acedo-Valenzuela (Abril de 2015);
"Synthesis of a Molecularly Imprinted Polymer for Melamine Analysis in Milk by HPLC

with Diode Array Detection" - Leandro Figueiredo, Lucia Santos, Arminda Alves
(Dezembro de 2014).

Referncias
"PADRONIZAO DO MTT COMO UM TESTE DE VIABILIDADE CELULAR EM

FRAGMENTOS CORTICAIS DE RINS DE RATOS" - Lissa Akari Tutida, Lus Alberto

Batista Peres, Maria Emlia Favero, Vinicius Daher Alvares Delfino - Centro de
Cincias da Sade, Universidade Estadual de Londrina / UEL);
"Standardization of MTT-Assay in a Cold Preservation Model as a Tool for

Assessment of Kidney Cell Viability" - Luis Alberto Batista Peres1, Vinicius

Daher Alvares Delfino2, Altair Jacob Mocelin2, Lissa Akari Tutida2, Maria Emlia
Favero2, Tiemi Matsuo2 - Universidade Estadual do Oeste do Paran /
UNIOESTE);
"Teste in vitro de citotoxicidade: estudo comparativo entre duas metodologias"

- Sizue Ota Rogero; Ademar Benvolo Lugo; Tamiko Ichikawa Ikeda; urea
Silveira Cruz - Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP;
Site da Anvisa: http://www.anvisa.gov.br/cosmeticos/guia/html/pag05.html;

CONTINUAR...
Os parmetros de avaliao observados so a porcentagem de morte celular e a

IC50

Teste de fototoxicidade: A base deste teste a comparao da citotoxicidade de um

agente qumico testado com ou sem exposio adicional a doses no txicas de luz
UVA. A citotoxicidade expressa na determinao da dose dependente que reduz o
crescimento celular utilizando-se um corante vital, vermelho neutro.
A concentrao de um agente qumico testado reflete a inibio da viabilidade celular

em 50%, calculada usando-se um modelo adequado de curva que expressa a resposta

da curva de concentrao.

Atravs desta curva pode-se encontrar o ndice de citotoxicidade (IC50%) que significa

a concentrao do extrato que induz 50% de lise ou morte celular e como

conseqncia a inibio de incorporao do vermelho neutro.