UNIVERSIDAD TECNICA DE MANAB

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLINICO
CATEDRA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR II
Docente: Dra. Mayra Parraga
Nivel II paralelo C period acad. Oct. 2015 Feb. 2016

TEMA:
GENERACIN DE MOLCULAS DE ADN
RECOMBINANTES.
VESTORES PAR ADN RECOMBINANTE

GRUPO:
N2
TRABAJO PRESENTADO
POR:
o Pico Pinoargote Angie
o Moreira Ortiz Valerio
o Snchez Cantos Melany
o Ormaza Loor Nohelia
o Garca Mera Jazmn
o Rosales Demera Liss
o Chvez Jean Carlos

BIOLOGA
CELULAR Y
MOLECULAR II

PARALELO
A

PALABRAS CLAVES

Molcula Recombinante
Vector
Plsmidos
Endonucleasas
Fago
Bacterifago

GLOSARIO
Plsmidos: Son pequeas molculas circulares de ADN que pueden replicarse

independientemente.
Endonucleasas: Lasendonucleasasson enzimas que catalizan la ruptura de enlaces
fosfodister en diferentes regiones ubicadas en el interior de una cadena polinucleotdica.
Esto las diferencia de las exonucleasas, que catalizan la escisin de enlaces fosfodister en
los extremos de las cadenas.
Intrones.- Un intrn es una regin del ADN que debe ser eliminada de la transcripcin
primaria de ARN.
Splicing.- Corte o empalme
Bacterifagos.- son virus que infectan exclusivamente a las bacterias.
Fago.- es un virus bacterifago que infecta a la bacteria Escherichia coli.

GENERACIN DE
MOLCULAS DE ADN
RECOMBINANTE

Los plsmidos recombinantes que portan insertos de ADN humano

pueden ser introducidos en E. Coli , donde replican junto con las
bacterias para dar lugar a millones de copias del ADN .El ADN de
estos plsmidos puede aislarse , obtenindose grandes cantidades
de molculas recombinantes que contienen un fragmento nico de
ADN humano

Los fragmentos de ADN que pueden ser

clonados no se limitan a aquellos que
terminan en sitios de cortes de enzimas de
restriccion. Es posible aadir a los
extremos de cualquier fragmento de ADN
sea ligado a un vector y aislado como un
clon molecular.

Sintetizar una copia de ADN

a partir del ARN

ADN copia o ADN

complementario

Los genes
eucarioticos estn
interrumpidos por
secuencias no
codificantes o
intrones.
Splicing

CLONACIN DE
ADN
COMPLEMENTARI
O

VECTORES PARA ADN RECOMBINANTE

Para clonar insertos de ADNc de un tamao
reducido, con pocas kb

Los plsmidos
Existe un sitio de origen, la cual sirve para
sealizar al ADN polimerasa y marque el sitio
de clonacin dentro de la clula hospedadora
Generalmente se usan
Estos vectores portan un sitio de resistencia,
un ejemplo es poner un
antibitico( ampicilina) para crear una
resistencia en una bacteria

Ejemplo.- (Fig 4.19)clonacin con

vectores plasmidicos. El vector es
una pequea molcula circular que
contiene un origen de replicacin(ori),
un gen que confiere resistencia a
ampicilina(Amp) y un sitio de
restriccin(EcoRI) que puede utilizarse
para insertar ADN extrao. El ADN
pasajero(ADNc Humano) se liga al
vector y los plsmidos recombinantes
son usados para transformar E.coli.
Las bacterias se cultivan en un medio
que contiene ampicilina, por lo que
nicamente forman colonias las
bacterias que contienen el plsmido y
son resistentes a ampicilina. Cada
colonia de bacteria conteniendo el
plsmido puede entonces aislarse y
hacerse crecer en grandes cantidades,
para
aislar
los
plsmidos
recombinantes.

Un grupo de fragmentos de ADN son ligados a un

plsmido de ADN previamente dirigido mediante
una endonucleasa de restriccin. Las molculas de
ADN recombinantes resultantes se emplean a
continuacin para transformar E. coli.

Las colonias resistentes a antibiticos, que contiene el ADN plasmidico,

son seleccionadas. Puesto que cada plsmido recombinante da lugar q
una sola colonia resistente a antibiticos, las bacterias presentes en una
cualquiera de estas colonias contendrn su nico inserto de ADNc.

Las bacterias que contengan el plsmido de inters pueden crecerse en

grandes cantidades y extr5aerse su ADN. Las pequeas molculas
circulantes d ADN plasmidico, de las que menudo existen cientos de
copia por clulas, pueden repararse del ADN cromosmico bacteriano;
el resultado es ADN plasmidico purificado apropiado para el anlisis del
inserto clonado.

LOS VECTORES DE BETERIOFAGO TAMBIEN

SON EMPLEADO PARA EL AISLAMIENTO
TANTO DE ADN GENOMICO COMO LOS
CLONES DE ADNc A PARTIR DE CELULAS
EUCARIOTAS, ESTAS MOLECULAS
RECOMBINANTES PUEDEN SER
INTRODUCIDAS EN E. COLI, DONDE SE
REPLICA Y GENERAN MILLONES DE FAGO
PROGENIE QUE CONTIENE UN SOLO
INSERTO DE ADN.

En determinados estudios de anlisis de ADN genmico es preciso clonar fragmentos de

ADN mayores de lo que un fago puede portar. Existen 5 tipos principales de vectores
empleados con este fin: