CINETICAMICROBIANA

VELOCIDADDELCRECIMIENTOMICROBIANOrx
VELOCIDADDELCONSUMODESUSTRATOrs
VELOCIDADDELAFORMACIONDEPRODUCTOSrp
DR.BLGO.CARLOSE.VILLANUEVAAGUILAR
MICROBIOLOGIAINDUSTRIALYBIOTECNOLOGIAMICROBIANA

CINETICA MICROBIANA :
conceptos
ConquvelocidadsellevaacaboelBioproceso?

MecanismosdeReaccionesBiolgicasBsicas
enunProcesoFermentativo

LACINTICADELAFERMENTACIN:
I.

ESTUDIALA:
VELOCIDAD CRECIMIENTO MICROBIANO
( REPRODUCCIN ),
VELOCIDAD CONSUMO DE SUBSTRATO
(ALIMENTACION)

rx
rs

VELOCIDAD FORMACIN DE PRODUCTOS rp

(EXCRETA DE SUSTANCIAS)

II.

RESPECTO
AL

TIEMPO
O
CONDICIONE
S
QUE LO
MODIFICAN

SERELACIONAFUNDAMENTALMENTECONLAMEDICIONDE:
Velocidades
volumetricas

rx, rs, rp

Velocidades especificas
(CLCULOS DE CONSTANTES DE
VELOCIDAD)

u , q p , qs

III.SEDESCRIBELACINTICAMICROBIANAENCULTIVOBATCH.

CINETICA DEL
CRECIMIENTO
MICROBIANO
2.1.DESCRIPCIONQUIMICA
2.2.DESCRIPCIONBIOLOGICA
2.3.DESCRIPCIONMATEMATICA
2.4.TIPOSDEMODELOSMATEMATICOS

CRECIMIENTO MICROBIANO
DESCRIPCION QUIMICA

ACaHbOc + BO2 + DNH4OH

E CH O N + FCO2 + GH2O

DEFINICIN QUMICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Seriedereaccionesqumicasencadenaqueconducenalasntesisde
masacelular(biomasa)obtenidaalfinaldelproceso

Se traduce en una reaccin qumica estequiomtrica generalizada para

el crecimiento:

ACaHbOc + BO2 + DNH4OH

E CH O N + FCO2 + GH2O

FuentedeFuentedeFrmulabruta
CarbonoNitrgenodelamateria
yenergacelularseca.
A,B,D,E,FyG: molesdeloscompuestosrespectivos

Se aplica cuando la biomasa es el nico producto formado

Globalmenteelbioprocesoobedeceal:
Principiodelaconservacindelamateria

BIOMASAMICROBIANA:CHON

DerivadelanlisiselementaldelaMASAMICROBIANAproducida

Variablesegn:tipodecepamicrobianaycomposicindelmediodecultivo

Frmulasbrutaspropuestas:

LevadurasC6H11O3N;C6H1OO3N;C5H7O2N;C6H10,9O3,6N1,03

Representa;90%delabiomasaefectivamenteproducidaenlareaccin.

NOincluyecenizas,deaprox.10%delamateriaseca.

C6H11O3NPesomolecular(fraccinorgnica)=145

Silaclulatiene90%orgnicay10%cenizas
Elpesodelafrmulatotaldeunaunidadcelularser:
145/0.9=161.

De la relacin estequiomtrica
ACaHbOc + BO2 + D NH4OH

E CH O N + FCO2 + GH2O

SOx
Se establece las relacines:
X/S

= coeficienterendimientocelular
[ rendimientodeclulas sobre el sustratocarbonado]

x masacelularformada
s masadesustratoconsumido

X/O=[rendimientodeclulassobre elrequerimientodeoxgeno]
O

masadeoxigenoconsumido

CRECIMIENTO MICROBIANO
DESCRIPCION BIOLOGICA

DEFINICIN BIOLOGICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Crecimiento
a
individuos

nivel

(Ciclo
celular
celular)

Crecimiento

de

Aumentoeneltamao
delaclula,seguido
desudivisin
Losmicroorganismos
unicelularesaumentan
detamaoyluegose
dividenendospor
fisin binaria o gemacin

Crecimiento
a
poblacin

nivel

(Ciclo
de
crecimiento
Crecimiento poblacional)
Aumentoenlacantidad
declulas
Losmicroorganismos
unicelularesse
desarrollanprincipalmente
comopoblaciones de
clulas.

En cualquier sistema biolgico:

es el aumento
ordenadodetodosloscomponentesqumicosdeunorganismo

En los organismos unicelulares: es el aumento en el

nmerodeindividuosenlapoblacin

Lamayorpartedelestudiosobrecrecimientomicrobiano
serefierea:
crecimiento poblacinalmsqueacrecimientocelular

de
o

Crecimiento Poblacional
Puede darse en:

1. Sistemas cerrados
Noseaadealcultivonuevassustanciasnutritivas,
niseextraeparaeliminaralgnproductoterminal
delmetabolismo.

Cultivodiscontinuo
(batch,esttico,cultivoporlote
ointermitente)

2. Sistemas abiertos

CRECIMIENTO POBLACIONAL EN SISTEMA CERRADO

( CULTIVO DISCONTINUO O BATCH )
Ciclo de crecimiento y Curva de Crecimiento

Ciclo de crecimiento

Secuencia de eventos caractersticos

de la poblacin microbiana

Seiniciacuandounasolucinnutritiva
seinoculaconunmicroorganismo.

Curva de crecimiento

Grfica que describe el ciclo de crecimiento

Seobtiene:
graficandoelpesocelularseco(X,gL-1)
oconcentracincelularviable(N,clulasL-1)
respectoaltiempodeincubacin(t,horas)

CRECIMIENTO MICROBIANO
DESCRIPCION MATEMATICA

DEFINICIN MATEMATICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

1. Como se define el crecimiento?
Se define como un incremento en el nmerode clulas microbianas [dN] en una poblacin, lo cual
tambin puede ser medido como unincremento en la masa microbiana [dX].

2.

Como se define la velocidad de crecimiento?

Es el cambioen el nmero de clulas o masa celular porunidaddetiempo:

rx=dN/dtorx=dX/dt
La velocidad de aumento
de microorganismos en un
tiempo dado
es
proporcional a la masa de
bacterias ( X ) o al nmero
de bacterias ( N ) o a
cualquier otro componente
( Z ) presentes en ese
tiempo

MEDICION DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO

COMO PUEDE MEDIRSE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL ?

MEDICION DEL
CRECIMIENTO
COMO PUEDE MEDIRSE
EL CRECIMIENTO POBLACIONAL

CAMBIO

Mtodos de Medicin de Poblaciones Microbianas

CMO DETERMINAR EL NMERO DE CLULAS (N) O LA MASA CLULAR (X) ?
PROCEDIMIENTO GENERAL:
1.
2.

Tomar muestras del caldo de fermentacin

(suspensiones homogneas de clulas)
Determinar:

Numero de clulas N ( ufc/ml )

Masa celular X ( g/ml )
Hayvariosmtodospara:
contarclulasN o
estimarsumasaX

3. Determinar los parmetros

Mtodos
paracontarclulasy
estimarmasacelular
NMERODECLULAS
NUMEROTOTALDECELULAS
NUMERODECELULASVIABLES

MASACELULAR
METODOSDIRECTOS
METODOSINDIRECTOS

RECUENTOTOTALENPLACA(ufc)
CONTEODELNUMERODECOLONIAS(UFC)

METODODELAPLACAESTRIADA

METODODELAPLACAVERTIDA

METODODELASDILUCIONES

Parmetros de Medicin de Poblaciones Microbianas

Numeroclulas

DEFINICIONES

Porunidaddevolumen
(ml)

Duplicaciones
porunidaddetiempo

Intervalodetiempo
entredosduplicaciones

Masacelular

(RECUENTO)

(PESOSECO)

Concentracincelular
N

Densidadcelular
X
(g/ml)

(noclulas/ml)
TasadeDivisin
v

(horas-1)
Tiempodegeneracin
g

(horas)

TasadeCrecimiento

(horas-1)
Tiempodeduplicacin
td

(horas)

NATURALEZA Y EXPRESION CUANTITATIVA

DE LOS PARAMETROS DE MEDICION

Tasa de Divisin (v) y Tiempo de Generacin (g)

No

EJERCICIO1:
Si una suspensin celular pasa en 10 horas de crecimiento de 103 a
109 clulas, la tasa de divisin (v) y tiempo de generacin (g) ser:

Datos:
No=103clulas
N=109clulas
t=10horas

v=logN-logNo/log2(t-to)

=log109-log103/0.3010(10)

=6/3
=2duplicaciones/hora

g=1/v

=1/2
=0.5hora

EJERCICIO2
Calcular el tiempo de generacin de un microorganismo en un cultivo
quepasade2x104ufc/mla7x105ufc/mlen2.5h.

Datos:
No=2x104ufc/ml
N=7x105ufc/ml
t=2.5horas
g=?

v=logN-logNo/log2(t-to)

=log7x105-log2x104/0.3010(2.5)

=5.854.30/0.7525
=1.52/0.7525
=2duplicacionesxhora

g=1/v
=1/2
=0.5h

EJERCICIO3
Sipartimosde104ufc/mlenuncultivoquetieneuntiempodegeneracin(g)de2h
cuntasclulastendremosalcabode4,24y48hdecultivo?Grafiquelacurvade
crecimiento
Datos:

Formula

No=104ufc/ml
g=2horas
N=?
t=4,24,48horas

logN=logNo/nlog2
g=t/n
Reemplazandonport/g:
logN=logNo/t/g(log2)

CalculodeNa4horas

CalculodeNa24horas

CalculodeNa48horas

logN=logNo/t/g(log2)
=104/4/2(log2)
=4/2(0.3010)
=4/0.602
=6.65
N=antilog6.65
N=4.4x106ufc/ml

logN=logNo/t/g(log2)
=104/24/2(log2)
=4/12(0.3010)
=4/3.612
=1.11
N=antilog1.11
N=12x106ufc/ml

logN=logNo/t/g(log2)
=104/48/2(log2)
=4/24(0.3010)
=4/7.224
=0.546
N=antilog0.546
N=35x106ufc/ml

Tasa de Crecimiento () y Tiempo de Duplicacin (td)

TASA DE CRECIMIENTO () :

ECUACIN DIFERENCIAL

Lapoblacinmicrobianaencrecimiento
es un sistema que se multiplica
autocatalticamentedemodoque:

rx = X
dx / dt = X

Lavelocidaddecrecimiento, rxesproporcionala
la densidad celular X, ya presente y sigue la
cinticadeunareaccindeprimerorden.
Describe la velocidad de crecimiento, rx durante
lafaseexponencial(yfasededeclinamiento)

Despejando:

= dx/dt . 1 / x
Estaecuacineslaformadiferencialdelaecuacinde
crecimiento Se puede usar para describir el
crecimientoencualquieretapaduranteelciclodeeste.

TASA DE CRECIMIENTO () :

dx/dt

ECUACIN INTEGRAL
lnX=lnXo+(tto)
Antilogaritmo

Integrando:

x = xo . e

dx/x=dt
x

dx/x=dt
to

xo

x=xo.e

lnX-lnXo=(tto)

xo

Despejando

= ln x - lnxo / (t - to )

to

velocidad especfica de crecimiento rapidez de

aumento de la densidad celular por unidad de tiempo (h -1)

Estaecuacinesla formaintegraldelaecuacindecrecimientoSoloseaplicaenelcrecimientoexponencial
(dondeesconstante).Seadaptamuybienalosdatosexperimentalesdelafaseexponencial.

TIEMPO DE DUPLICACION (td) :

x=xo.e
2xo=xo.e
2=e

Intervalodetiempoentredosduplicacionesdela
densidadcelular

x=2xoParaunaduplicacindelamasacelularinicial

td

td

logaritmonatural

ln2=td

td=ln2/
TASA DE CRECIMIENTO
=ln2/td
=0.693/td

Nmerodeduplicacionesdedensidadcelularporhora

=2.303log2/(td)
=2.303(0.301)/(td)

=0.693/td

EJERCICIO4
Deducir la relacin que hay entre el tiempodeduplicacin(td) y la tasa
de crecimiento () de un cultivo a partir del modelo matemtico del
crecimiento exponencial.microbiao

Calculo de la Tasa de Crecimiento ( )

=Velocidadespecficadecrecimiento

SecalculaapartirdelasdensidadesXoyXmedidasenlostiempostoy

tsegnlaecuacin(1)osusequivalencias(2)y(3):
(1)=lnx-lnxo/(tto)
(2)=logx-logxo/loge(tto)

(3)=(log10x-log10xo)2.303/(tto)
donde:loge=0.43429.

Es una medida de la velocidad del crecimiento celular durante la fase de

crecimiento exponencial.
Para un tipo de microorganismo dado depende principalmente de la composicin
y concentracin del medio de cultivo, inhibidores, temperatura y pH.

EJERCICIO 5
Calcularlatasadecrecimiento(,expresadaenh-1)deuncultivobacterianoquepasa
deproducir3.0g/ldebiomasatotalaproducir10g/len50min.

Solucin
Mtodo Ecuaciones

=lnX-lnXo/(t-to)=logX-logXo/loge(t-to)=(log10X-log10Xo)2.303/(t-to)
=ln10-ln3/(0.833)=log10-log3/0.434(50)=(log1010-log103)2.303/(50)

=2.30-1.1/(50)=-/0.434(50)=(-)2.303/(50)
=/50=/=()2.303/50

=h-1=h-1=h-1

Tambin relaciona la velocidad de incremento de N y

cualquier componente celular dado (Z):
En trminos matemticos:
dN / dt = N
dZ / dt = Z
donde:
N
Z

numero de clulas / ml
Cantidad de cualquier componente dado / ml

EJERCICIO 6

El cultivo tiene 104 clulas/ml en el tiempo to y 108 clulas/ml 4 horas mas tarde en
un sistema de cultivo batch con agitacin. Determine la velocidad especfica de
crecimiento
Solucin
Mtodo Ecuaciones

=lnN-lnNo/(t-to)logN-logNo/loge(t-to)(log10N-log10No)2.303/(t-to)

=ln108-ln104/(4h)log108-log104/0.434(4h)(log10108-log10104)2.303/(4h)

=20.7-11.5/49-5/0.434(4h)(8-4)2.303/4
=9.2/49.5/1.736(4)2.303/4

=2.303h-1=2.303h-1=2.303h-1

EJERCICIO7

Relacin Tasa de Crecimiento ( ) y Tasa de Divisin ( v )

(1)g=1/v
(2)td=ln2/
Al comparar la tasadecrecimiento con la tasadedivisinv
el nmero de clulas (N) y la masa celular (X) no coinciden y la relacin entre ambas
medidas se altera en el curso del crecimiento de un cultivo esttico.
Sin embargo, si se determina X o N y se comparan en condiciones que el incremento
deN sea exactamente igual al incrementodeX (clulas estndar)) se tiene:

g=td
Estoes:(1)=(2)1/v=ln2/

Despejando:
=ln2.V

PROBLEMA
Deducir la relacin que hay entre el tiempo de generacin (g) y la
tasa de crecimiento () de un cultivo a partir de las ecuaciones de
crecimiento.

(1)g=1/v
(2)td=ln2/
g=td
(1)y(2)1/v=ln2/

Entonces:
g=ln2/

REPRESENTACION GRAFICA
DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL

LaFase

exponencial

constituyeelperiodomas
adecuadoparadeterminarla
tasa de divisin,(v)yla tasa
de crecimiento,();
debidoalaconstanciarelativa
delatasadedivisin.

Selellama crecimientoexponencialogeomtrico
aaquellaprogresinqueaumentapormultiplicacindeuna
cantidadconstantellamadarazn.

Representacin Aritmtica

queda
curva

No es adecuada para expresar un

numero
grande
de
divisiones
celulares, ya que segn sea la medida
elegida solo pueden reconocerse las
primeras o solo las ultimas divisiones
celulares.

.
e

El crecimiento exponencial
representado
por
una
exponencial.

Cuando en el eje de ordenadas se

representa el nmero de clulas o la
masa celular, y en el eje de abscisas el
tiempo, expresadas ambas magnitudes
en unidades aritmticas.

X(g/L)

t(horas)

Representacin
semi-logartmica
Cuando en el eje de ordenadas se
representa el logaritmo del nmero de
clulas o de la masa celular y en el eje de
abscisas el tiempo, este expresado en
unidades aritmticas
El crecimiento exponencial
representado por una lnea recta.

Lnx

queda

La velocidad de crecimiento (u) viene

dada por la pendiente de dicha recta; es
tanto mayor cuanto mayor sea la
pendiente de la recta.
Debido a que el crecimiento exponencial
se caracteriza por la relacin lineal entre
el log del nmero de clulas y el tiempo
se habla tambin de crecimiento
logartmico.

n
l

=
X

ln

Xo

)
to

( t

Grafico:
Velocidadesdecrecimiento
representadassobre
escalasaritmticaylogartmica.

METODO GRAFICO PARA CALCULAR EL VALOR DE

1.Se calcula a partir de la ecuacin:
2.Reordenando a una lnea recta:
Resulta:
3.Graficando ln X/ Xo Vs t (tiempo)

ln X - ln Xo = ( t to )
y
= a x
ln X / XO
= (t)

lnX/XO

= a = Pendiente

(t)

Cuando es constante dar una lnea recta de pendiente (h -1)

En este caso la velocidad especifica de crecimiento ser la pendiente (a) de la lnea
recta obtenida segn se observa en el grafico.
El valor de es suficiente para definir la velocidad de crecimiento de un cultivo .

EJERCICIO 2:

El cultivo tiene 104 clulas/ml en el tiempo to y 108 clulas/ml 4 horas mas tarde en un
sistema de cultivo batch con agitacin. Determine la velocidad especfica de crecimiento
Solucin:
Mtodo Grfico:
Grafique:lnN/Novst

lnN/No=(t)
lnN/Noy=ax
=a=Pendiente

Para:lnN/No=9.21t=4horas
Aplicandolaecuacindelnearecta(y=ax):lnN/No=t
=9.21/4
=2.30h-1
La pendiente: es igual a 2.30 h -1

Rendimiento
Rendimiento(X):
Es igual a la diferencia entre la biomasamxima y la biomasainicial:

X=Xm-Xo

(en gramos de peso seco/ L)

Coeficientederendimiento(Y=X/S):
La relacin entre el rendimiento y el consumo de sustrato (X / S) tiene un
inters especial.
Si ambas magnitudes se expresan en unidades de peso, se denomina el cociente
coeficienteeconmicoocoeficientederendimiento

Y=X/S

( g masa celular / g sustrato consumido)


De los resultadosexperimentalesdelestudiodelcrecimiento se puede
deducir el valor del coeficientederendimientocelularYx/s.

Yx/s=Xm-Xo/SoS

S : Concentracinresidualdesustrato, casi siempre tiende a cero y

despreciable con respecto a So
So : Cconcentracininicialdesustrato
Yx/s : Se expresa en gramos de masa celular producido /
por gramo de sustrato metabolizado (rendimiento ponderal)
o por mol de sustrato metabolizado (rendimiento molecular)

CoeficientedeRendimientoMolar(Ym=g/mol)
Cuando el coeficientederendimiento se expresa en:
gramos de masa celular / molesdesustrato.
CoeficientedeRendimientoEnergtico(YATP=g/molATP)
Cuando el coeficientederendimiento se expresa en:
gramos de masa celular / molesdeATP

Puede calcularse cuando se conocen tanto la va de degradacin de un

sustrato como la energa (ATP) obtenida de dicha degradacin.

TIPOS DE MODELOS MATEMATICOS

DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO

TASADECRECIMIENTOVSCONCENTRACINDE
NUTRIENTES

Existendiversasexpresionespara.Lamasdifundidaes:

Cuando S Ks toma el valor de max y rx solo depende de

X
S = concentracin del
sustratolimitante

max = velocidad de
crecimiento
especificamxima
Ks = constante de
saturacin

Ks

ElValordeKsestainversamenterelacionadoconla
afinidaddelmicroorganismoporelsustrato.
En general Ks tiene valores muy bajos (mgL-1) por tanto
concentraciones bajas de S son suficientes para hacer
que = max
Las bacterias poseen valores de max cercanos a 0.9 h-1
Las levaduras 0.45 h-1 y los hongos filamentosos 0.25 h1;
De todos modos debe ser determinado experimentalmente
para cada caso en particular.

CRECIMIENTO MICROBIANO
Y SU
RELACION CON EL AMBIENTE

EFECTO DE TEMPERATURA

EFECTOS DEL PH

EFECTO DE ALTA CONCENTRACIN DE NUTRIENTES

EFECTO DE NUTRIENTES INSOLUBLES EN AGUA