El CICLO

CELULAR
Lic. T.M. Hctor Herrera
Reynoso
Esp. Citogentica Clnica

El Ciclo Celular

El CC es un proceso ordenado y
repetitivo en el tiempo en el
que la clula proliferante crece
y se divide en dos clulas hijas.

Los acontecimientos ms
importantes dentro del CC son
aquellos que tienen que ver con
la replicacin del genoma y la
segregacin de los genomas
replicados en las dos clulas
hijas formadas en la divisin,
las cuales reciben idntica
informacin cromosmica .

Qu es ciclo celular?
Conjunto

de evento que culmina con el

crecimiento de la clula y la divisin en dos
clulas hijas.
Este ciclo est compuesto por cuatro fases
G1, S, G2 y M.
Sin embargo algunas clulas estn en el
estado G0

Duracin del Ciclo Celular

Interfase

Mitosis

G1

G2

5 horas

7 horas

3 horas

1 hora

Mitosis
Profase

Metafase

Anafase

Telofase

36 min.

3 min.

3 min.

18 min.

El Ciclo Celular
PROCESOS
MOLECULARES
DURANTE EL
CICLO CELULAR
Detencin de la
sntesis de ARN.
Reduccin de los niveles de
AMPc
.
Disminucin de la sntesis
proteica (75%)
Fosforilacin de las
histonas
(en especial H1) durante la

condensacin de
cromatina

Por qu se da el ciclo celular?

Existencia

de un reloj molecular en las clulas

eucariotas. Este determina cuando debe dividirse.
Su activacin depende de seales extracelulares y
por crecimiento de la clula.
El CC comienza cuando los factores de crecimiento
se unen a la membrana de la clula.
Formado por un conjunto de protenas nucleares,
que integra los mensajes estimuladores e
inhibidores; si prevalece la cascada estimuladora,
pone en marcha el programa de divisin celular. .

GENES REGULADORES DEL CICLO CELULAR

Los genes que controlan el ciclo celular, pueden dividirse en dos
grandes grupos:
1.- PROTONCOGENES:
Genes que codifican protenas que regulan positivamente el CC.
Activan la proliferacin celular, para que las clulas quiescentes
pasen a la fase S y entren en divisin. Genes que codifican las
protenas del SISTEMA DE CICLINAS Y QUINASAS
DEPENDIENTES DE CICLINAS
2.- GENES TUMORES SUPRESORES

REGULACIN DEL CICLO CELULAR

La progresin del CC esta regulada por la formacin secuencial
y la activacin e inactivacin de un conjunto de molculas. Estas
molculas implican a las ciclinas y las quinasas dependientes de
ciclina (CDKs).
Las ciclinas (protenas que slo se expresan en el ciclo celular)
activan a las CDKs unindose a ellas. Las CDKs, una vez
activadas, fosforilan a protenas implicadas en procesos del CC
celular (sntesis de ADN y la mitosis).
Adems de esta serie de reguladores positivos del CC (CDKs y
ciclinas), existe una familia de reguladores negativos denominados
inhibidores de las CDKs (CDKIs) que bloquean la actividad de
uno o varios complejos CDK/ciclina, as como las CDKs
propiamente dichas .

CICLINAS
CICLINASYYQUINASAS
QUINASASDEPENDIENTES
DEPENDIENTESDE
DECICLINAS
CICLINAS(CDK)
(CDK)

Las ciclinas y las quinasas dependientes de

ciclinas (cdk) son el producto de protooncogenes y trabajan en asociacin en la
regulacin positiva del ciclo. Las cdks actan
fosforilando serinas y treoninas para
desencadenar procesos celulares. A ellas se
unen las ciclinas para regular el proceso con
intervencin de otros factores activadores.

CICLINAS
CICLINAS
CICLINAS

Son un grupo de protenas, de 36 a 87 kDa. Tienen en comn

una secuencia de unos cien aminocidos que interaccionan con
las Cdk.
De acuerdo al momento en que actan:
o Ciclinas G1. Representadas principalmente por la Ciclina D. Actan al

final del periodo G1 y promueven el paso de G1 a S (punto de restriccin).

o Ciclinas G1/S. Se activan al final de G1 y comienzos de S. Representadas

por la Ciclina E .
o Ciclinas S. Actan durante la fase S y son necesarias para iniciar la

replicacin del DNA. Se conoce la Ciclina A.

o Ciclinas mitticas (M). Promueven la mitosis. Se conoce la Ciclina B.

Las ciclinas son protenas de vida muy corta y se destruyen a

continuacin de su unin a las Cdk.

Ciclinas
Son protenas sintetizadas durante la interfase y destruidas al final de la
mitosis de cada ciclo. Actan como reguladoras de la actividad enzimtica
de las CDKs y su concentracin vara a lo largo de las diferentes fases del
CC.

Se han descrito diversos tipos de ciclinas: A, B1-B3, C, D1-D3, E, F, G,

H, I, K, L1-L2 y T1-T2.Todas ellas contienen un dominio relativamente
conservado responsable de su unin a las CDKs.

QUINASAS
QUINASASDEPENDIENES
DEPENDIENESDE
DECICLINAS
CICLINAS(Cdk)
(Cdk)

Actan cuando son activadas por las ciclinas

fosforilando molculas cruciales para la divisin celular.
La primera identificada se denomin factor promotor de
la mitosis (MPF)

Las cuatro cdk que activan las ciclinas en los seres

humanos son:
Cdk1, que interacta con las ciclinas M
Cdk2, que interacta con las ciclinas G1/S y S
Cdk4 y Cdk6, que interactan con las ciclinas G1.

Quinasas dependientes de ciclina (CDKs)

Las CDKs son molculas heterodimricas cuya funcin es
fosforilar residuos de serina y treonina de protenas
reguladoras especficas. Estos procesos se llevan a cabo cuando
las CDKs estn activadas por las correspondientes ciclinas.

Hasta el momento hay descritas doce quinasas dependientes de

ciclina: CDK1, CDK2, CDK3,CDK4, CDK5, CDK6, CDK7,
CDK8, CDK9, CDK10, CDK11 y CDK12 .

CDK4 y CDK6 forman complejos con las ciclinas D y

funcionan durante la transicin G0/G1,fosforilando a la protena
del retinoblastoma (Rb) y activando as la expresin de genes
necesarios para la entrada en la fase S.

Cell Cycle

Growth Factors

Role of E2Fs

E2F 1-3
M

Cyclin D1
CDK 4/6

pRB

E2FP 1-3

G2

G1

Cyclin E
CDK 2

E2F1/2, TK,
PCNA, DHFR,
Cyclin A/E
Pol ..
AAAAA

pRB
P

E2FP 1-3

Regulacin negativa del ciclo celular

Inhibidores de las quinasas dependientes de ciclina
(CDKIs):
Estas protenas inhibidoras de las CDKs estn implicadas en la
parada del CC en respuesta a varias seales antiproliferativas,
como pueden ser la privacin de factores de crecimiento,
citoquinas, dao en el ADN, etc.
Se dividen en dos familias: la CIP/KIP y la INK4, que difieren
en estructura, mecanismo de accin y especificidad.
La familia CIP/KIP incluye tres protenas: p21, p27 y p57, y
presenta una especificidad ms amplia que la familia INK4, ya que
sus miembros interactan e inhiben la actividad quinasa de los
complejos CDK2/ciclina E, CDK4/ciclina D, CDK6/ciclina D,
CDK2/ciclina A y CDK1/ciclina B.

La familia INK4 incluye cinco protenas: p14, p15, p16,

p18 y p19. A diferencia de las protenas de la familia
CIP/KIP, que se unen a complejos CDK/ciclina, la familia
INK4 se une slo a CDK en el sitio de unin de las ciclinas e
inhiben especficamente CDK4 y CDK6, implicadas en el
control de la fase G1.

Aparte de los inhibidores de quinasas dependientes de

ciclina, existen otros reguladores negativos del ciclo celular
que son los formados por los productos de los genes
supresores de tumores p53 y Rb que pueden interactuar y
modular las actividades de los complejos CDK/ciclina .

 Las

QUINASAS son polipptidos de 43 Kda, de estructura

bilobulada,con su extremo amino-terminal formando el lbulo menor.

En la hendidura entre ambos lbulos se encuentra su dominio
cataltico.

Esquema mostrando la estructura bsica de la CDK, como monmero inactivo. Se muestran, a la izquierda, los sitios que son
susceptibles de cambiar su actividad por fosforilacin. Mientras que la fosforilacin de la treonina 160 en el llamado lazo T se
requiere para la activacin de la quinasa, la fosforilacin de la treonina 14 y tirosina 15 la mantienen inactiva. El sitio
cataltico se encuentra dentro de la hendidura cataltica. La secuencia PSTAIRE permite a la CDK ensamblarse con una ciclina
para as transformarse en activa.

ACTIVACION DE CDKS

Por acoplamiento a una ciclina

CAKs (CDK Activating Kinases) las quinasas activadoras deCDKs

Esquema de los rasgos distintivos del pre-MPF o heterodmero CDKciclina mittica, previo a su activacin. La ciclina se ha
asociado con la quinasa a travs de la llamada caja de la ciclina. La ciclina tambin posee una zona, llamada caja de destruccin,
que asegura su proteolisis, previa su marcado con una cola de poli-ubicuitina a cargo de la ligasa E3 conocida como ciclosoma.
El heterodmero mostrado en esta figura ya est parcialmente activado por la fosforilacin (a cargo de la CAK o quinasa que
activa otras CDKs), que abre la hendidura cataltica de forma que el ATP puede ya penetrar en el bolso situado al final, prxima
al sitio cataltico. La quinasa Wee1 mantiene fosforilados los residuos T14/Y15, cuya defosforilacin activar de forma inmediata
dicha quinasa, transformando a este dmero en MPF si la ciclina es una de las mitticas.

El MPF o inductor de condensacin cromosmica mittica. Si comparamos a este dmero con el de la Fig. anterior,
vemos cmo se ha producido la defosforilacin de los residuos T14/Y15 mediada por la fosfatasa
Cdc25, lo que ha permitido el acople de la molcula de ATP en el bolso existente al final de la hendidura cataltica,
permitiendo su plena activacin como quinasa.

ACTIVACIN
ACTIVACINDE
DELOS
LOSCOMPLEJOS
COMPLEJOSCICLINA-Cdk
CICLINA-Cdk

T h r 1 7 0
M AT

c ic lin a H

T hr161
c d k 7

T hr14
Tyr15

C o m p le j o C A K d e s a c t iv a d o

F o s fo r ila c i n T h r 1 7 0
( p o r c d k 2 + c ic lin a A ? )

C o m p le j o c ic lin a -c d k d e s a c tiv a d o
T h r1 70 - P

T hr161
C o m p le jo C A K a c tiv a d o

F o s fo r ila c i n T h r 1 6 1
p or C A K
T h r161 - P

D e s f o s f o r i la c i n
T hr161

F o s fa ta sa
PP2a
C o m p le jo c ic lin a -c d k a c tiv a d o

T hr14
Tyr15

C o m p le jo c ic lin a -c d k d e s a c tiv a d o

INHIBICIN
INHIBICINDE
DELOS
LOSCOMPLEJOS
COMPLEJOSCICLINA-Cdk
CICLINA-Cdk
Los complejos ciclinas-Cdk pueden ser inhibidos por complejos
inhibidores (Cki), como la p27 y p21, que actan sobre las quinasas
que controlan G1 y S. Estos Cki se unen a la vez a la ciclina y a la Cdk,
bloqueando el sitio activo y de unin al ATP de la Cdk.

P21 o P27
T h r1 6 1 - P

T h r1 4
T yr1 5

C o m p le jo c ic lin a - C d k in h ib id o

T h r1 6 1 - P

T h r1 4
T y r1 5

C o m p le jo c ic lin a - C d k a c t iv a d o

DESTRUCCIN
DESTRUCCINDE
DELOS
LOSCOMPLEJOS
COMPLEJOSCICLINA-Cdk
CICLINA-Cdk

C ic lin a E
C dk2

S C F a c tiv a d o

C dc20
A P C in a c tiv o
A P C a c tiv a d o

C ic lin a B
C dk1

U b iq u itin a

U b iq u itin a

ACCIN
ACCINDE
DELAS
LASCICLINAS
CICLINASG1
G1YYG1/S
G1/S
R b

a c tiv a d a
C IC L IN A S
T h r1 6 1 - P

E 2 F

C d k 4
C d k 6

in a c t iv a

C o m p le jo

T h r1 4
T y r1 5

C ic lin a
a c t iv a d o

P
E 2 F

a c tiv a d a
R b

T r a n s c r ip c i n d e
p a r a la f a s e S

in a c tiv a d a

C IC L IN A S
T h r1 6 1 - P

g e n e s

C d k 2

C IC L IN A S
C ic lin a

G 1

C o m p le jo

G 1 /S

T h r1 4
T y r1 5

C ic lin a
a c t iv a d o

C d k 2
C ic lin a
C d k 2
C IC L IN A S

R e p lic a c i n

G 1 /S

d e l D N A

C IC L IN A S S
T h r1 6 1 - P
T h r1 4
T y r1 5
C d k 2
C ic lin a
C o m p le jo a c t iv a d o

ACCIN
ACCINDE
DELAS
LASCICLINAS
CICLINAS SS
O C R
( c o m p le jo
d e
r e c o n o c im ie n t o
d e l
o r ig e n
d e
r e p li c a c i n )

O r ig e n
d e
r e p li c a c i n

d c 6

c m

C o m p l e jo
p r e - r e p lic a t i v o

d k 2
C

I C

C ic li n a
L I N A S
S

U
P

G
M

a c t iv a d o

b iq u it in a

ACCIN
ACCINDE
DELAS
LASCICLINAS
CICLINAS M
M
C
T h r 1 6 1
C

I C

L I N

T h r 1 4
T y r 1 5

d k 1

ic lin a

T h r 1 7 0

T h r 1 6 1

o m

C o m p le j o
a c t iv a d o

p le jo

i c lin a

B - C

a c t i v a d o

T h r 1 4
T y r 1 5
C

d k 1

G
S

Q u i n a s a
W e e 1

T h r 1 6 1

T h r 1 4
- P
T y r 1 5
-

C o m p le j o
C ic lin a
d e s a c t iv a d o

B - C

d k 1

F o s f a t a s a
C d c 2 5
T h r 1 6 1

C o m p le j o
a c t iv a d o

G
M

T h r 1 4
T y r 1 5
C

i c lin a

B - C

d k 1

El complejo ciclinas M-Cdk

fosforila las siguientes
proteinas durante la mitsis:
Lminas nucleares al final
de la profase para la
disolucin de la envoltura
nuclear;

La protena condensina
que condensa los
cromosomas;
Protenas reguladoras del
huso mittico,
El complejo APC que
separa las cromtidas
hermanas.

REGULACIN
REGULACINDEL
DELCICLO
CICLOCELULAR
CELULAR
La regulacin del crecimiento y divisin celular es muy compleja.
Existen puntos de restriccin que impiden la continuacin del CC,si la
clula no cumple con las condiciones para pasar a la siguiente etapa, de
tal modo que, si no se cumplen esas condiciones, el ciclo se detiene. Los
puntos de restriccin son:
Punto de restriccin R: Ocurre en la fase G1, aqu la clula comprueba
que ha generado la masa necesaria para seguir adelante y comenzar la
sntesis de ADN y que las condiciones ambientales son favorables.
Punto de restriccin G2-M : que ocurre al final de la fase G2, en el que
la clula debe comprobar dos condiciones antes de dividirse: que ha
duplicado la masa de modo que puede dar lugar a dos clulas hijas, y
que ha completado la replicacin del ADN, y slo lo ha hecho una vez.
Punto de restriccin M : que ocurre en mitosis y que slo permite
continuar con la divisin celular si todos los cromosomas estn alineados
sobre el huso mittico.

Puntos de Control de Ciclo Celular

Punto de restriccin R.

Punto G2-M.

Punto M.

Punto de restriccin R
En

este punto, se decide si la clula entra en

divisin, se da entre G1-S
Ciclinas (aumentan de nivel) y se conbinan
con la cdk.
Transferencia de fosfatos de ATP a pRb.
La pRb fosforilado libera a factores de
transcripcin (E2F).

Punto G2-M
Intervienen

complejos formados por dos

tipos de ciclinas B y las quinasa Cdc2.
Los complejos se acumulan durante la
interfase y son activados y translocados al
nucleo al comienzo de la mitosis.
Estas moleculas controlan el estado del
ADN celular,duplicado en la fase S.

Sucesos de la fase M
Es

el periodo ms llamativo del ciclo

celular.
Tradicionalmente la mitosis se divide en 4
etapas: Profase, Metafase, Anafase y
Telofase.
Para que se inicie la fase M, juega un papel
importante la accin de FPM.

Dianas del MPF

Profase
Condensacin

de
cromosomas, por las
condensinas.
Son fosforiladas
directamente por las
quinasas Cdc2.
Se producen cambios
en el citoplasma.

Condensacin de cromosomas
Alteracin

molecular

Fosforilacin

de

Fosforilacin

de

histona H1.

histona H3.

Prometafase
Periodo

de transicin
entre la profase y la
metafase.
Los microtbulos del
del huso mittico se
anclan a los
cinetocoros de los
cromosomas
condensados.

Metafase
Movimiento

de los
cromosomas hasta
alinearse en placas
metafsicas en medio
del huso.
Inicio de la regulacin
del punto M.

Regulacin del punto M

Punto

de control durante la transicin de

metafase a anafase.
Se asegura de que no haya erores en la
formacin del huso, alineamiento de
cromosomas y se produsca un reparto
igualitario entre las dos celulas hijas.
Esta mediado por la accin de las
ubiquitinas.

Anafase
La

accion de la
ubiquitina ligasa
(complejo promotor de
la anafase).
Activacion del
CPA,degrada los
reguladores claves:
Scc1 cohesinas y
ciclina B

MPF

Complejo promotor de la anafase

Degradacin de
Pds1

Esp1

Degradacin de
la cohesina
Scc1

Separacin de la
cromtidas hermanas.
Puesta en marcha de
la anafase.

Degradacin
de la ciclina B

Inactivacin del
MPF

Salida de la
mitosis.
Citocinesis

CiclinaB

APC

Cdc2
APC

Inibidor
Anafase

CiclinaB

Cdc2

G2

Profase

Metafase

Anafase

Telofase

G1

Telofase
Los

nucleos se
regeneran y los
cromosomas se
descondensan.
Durante este proceso los
poros nucleares se
reensamblan y las laminas
desfosforiladas se asocian
para reconstituir la lmina
nuclear

Citocinesis
Es

el paso siguiente
tras la conclusin de la
mitosis.
Suele comenzar en la
anafase tardia,
coordina la divisin
nuclear y
citosplasmatica.
Se desencadena por la
inactivacin del MPF.

Interacciones Moleculares

Regulacin del CC y el Cancer

Cuando

la celula se empieza a proliferar

descontroladamente y escapan a los controles de la
divisin y muerte celular.
Existencia de genes sanos relacionados al control
de crecimiento y supervivencia celular, la alteracin
de estos induce a la aparicin de clulas cancerosas.
Protooncogen (normal)- Oncogen (alterado)
Gen supresor de tumores- Inhibe produccin
anormal de clulas. (Defecto = cdo. Cancerosos).

Agentes
fsicos

Agentes
qumicos

Agentes
biolgicos

Predisposicin
gentica
Clula normal

Agentes carcinogenticos

Mutacin

Clula transformada

Iniciadores
Promotores

proceso
de
mltiples pasos

Oncogenes
Genes

Genes supressores
Genes de reparacion

6 a 7 eventos en 20 a 40 aos

Secuencia Adenoma-Carcinoma
~ 57 aos

~ 7 - 8 aos

~ 65 aos
Otras
alteraciones

Epitelio
normal

Epitelio
hiperproliferativo

Adenoma
precoz

Adenoma
intermed.

Adenoma
tardio

Adenocarcinoma

Metstasis
Mutacin
de APC

5q

Superexpresin
de COX-2

Mutacin
de K-ras

Hipometilacin
de DNA

12p

LOH 18q LOH 17q

DCC
Mutacin
de p53

Cada uno de estos cambios en la fisiologa celular, adquiridos durante el desarrollo de los tumores, representa una
ventaja en la lucha contra los complejos sistemas de defensa con que cuentan las clulas para mantener estable la
armona funcional de los tejidos.

ESTUDIO CITOGENTICO :
I. Cultivo Celular
II. Anlisis Cromosmico

Lic.TM. Hctor Herrera Reynoso

Esp: Citogentica y Biologa Molecular

CULTIVO CELULAR
Los

cultivos celulares son un procedimiento

tecnolgico de mantenimiento y estudio de clulas
vivas en un medio artificial que permite reproducir,
de manera bastante fiable, las condiciones biolgicas
que las clulas tienen en su lugar de origen.

Potencialmente

todas las clulas son cultivables, pero

cada una de ellas presenta peculiaridades y
requerimientos especficos.

Cultivo Celular
Existen

varios modelos diferenciados de cultivo celular:

A.- Segn su estructura:
1.- Cultivo de rgano
2.- Cultivo de tejido
3.- Cultivo de clulas aisladas
.- El cultivo de clulas aisladas es un sistema biolgico
que logra la supervivencia fuera del organismo de
clulas independientes, pero capaces de dividirse y
mantener sus funciones in vitro. Esta modalidad se
denomina cultivo en monocapa o suspensin y es la ms
utilizada habitualmente.

Cultivo Celular
Principales modelos de CC

Clulas mesenquimatosas
Fibroblastos
Condrocitos
Clulas musculares
Adipocitos
Osteoblastos
Clulas endoteliales

. Clulas hematopoyticas
Mdula Osea
Clulas linfoides
Clulas mieloides
Clulas eritroides

. Clulas gonadales
. Hibridomas

. Clulas Neuroepiteliales y Parenquimatosas

Clulas epidermicas, queratinocitos y melanocitos
Neuronas corticales y medulares
Clulas de la glia
Clulas endocrinas
Hepatocitos
Clulas renales
Clulas bronquiales y pulmonares

. Clulas tumorales

Cultivo Celular
B.- Segn la fuente de obtencin de clulas:
1.- Cultivos Primarios: cuando las clulas o tejidos procedentes de un ser
vivo crecen sin haber pasado previamente por una fase de crecimiento in
vitro.

2. Cultivos secundarios: cuando se obtiene de la resiembra de otro cultivo.

A partir de este punto se puede hablar de lneas celulares estables (clulas
que mantienen sus caractersticas de una forma constante y homognea a lo
largo del tiempo).

El Medio de Cultivo
1. El Sustrato
. Materiales
. Recipientes

2. La fase gaseosa
Oxgeno
Dixido de carbono

Vidrio
Plstico (Poliestireno)
Microsoportes
Sustratos metlicos
Matrices tridimencionales
Interfaces
Haces microcapilares permeables
Nuevos dispositivos ( Opticell)

3. Condiciones fsico-qumicas y
fisiolgicas:
ph, osmolaridad, T, viscocidad, composicin del medio (aas,
vitaminas, glcidos, hormonas, factores de crecimiento, antibiticos,
antifngicos, suero)

Botellas y Placas de Cultivo

Cultivo Celular
. Condiciones Fisico-qumicas y fisiolgicas del medio de cultivo
.- Condiciones fisico-qumicas

- pH (7.0 7.2))
- Osmolaridad: 290-320 mOsm/Kg
- Temperatura : 37C (mamfero),
aves (38.5C), epitelio ratn (33C), insectos (28C)
- Viscocidad: Suero
.- Condicones fisiolgicas : Concentracin de sustancias en el medio.
- BSS
- Aminocidos, vitaminas, glcidos
- Sustancias orgnicas
- Hormonas, factores de crecimiento
- Suero
- Antibiticos/antifngicos

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

MEDIOS DE CULTIVO CELULAR

Son compuestos que contienen : Todos los aminoacidos,

vitaminas,cofactores, coenzimas, enzimas, sales, iones,
indicadores de pH.

Existen distintos medios de cultivo los cuales se seleccionan

dependiendo del tipo de muestra tipo de clula a cultivar y
lograr que estos respondan adecuadamente con un crecimiento
celular.

Los medios de cultivo celular se seleccionan dependiendo del tipo

de estudio citogentico a realizar (Cultivo de alta resolucin,
Estudio de fragilidad cromosmica, etc) o del tipo de anomala
cromosmica a demostrar (Estudio de X frgil).

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

Medios de Cultivo ms Utilizados
1. Medio McCoys 5A Modified
.- Cultivo Sangre Perifrica (Linfocitos)
.- Cultivo Mdula Osea
2. Medio RPMI 1640:
.- Cultivo Sangre Perifrica (Linfocitos)
.- Cultivo Mdula Osea
.- Cultivo de Tumores (clulas neoplsicas)
3. Medio Tc199:
.- Cultivo Sangre Perifrica (Linfocitos)
.- Cultivo Mdula Osea
4. Medio Ham F10 Ham F12
.- Cultivo de piel
.- Cultivo de clulas fetales

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

5. Medio Chang B + C
.- Cultivo piel
.- Cultivo clulas fetales
.- Cultivo de vellosidades coriales
.- Cultivo de Tumores ( clulas neoplsicas)
6. Amniomax
.- Cultivo de clulas fetales
.- Cultivo de vellosidades coriales
7. Medio PB-Max Kariotyping Medium
.- Especfico Cultivo de linfocitos
8. Medio Marrow- Max Kariotyping Medium
.- Especfico para Cultivo de Mdula Osea

Cultivo Celular: Estudio citogentico

SUPLEMENTOS
.- Adems del medio de cultivo base, las clulas requieren para su
crecimiento y divisin celular de suplementos, los cuales sern
utilizados dependiendo del tipo de clulas que se desea cultivar y
del tipo de estudio citogentico requerido.
1.- SUERO BOVINO FETAL (SBF) : se utiliza a diferentes concentraciones:
5% para el estudio de cromosoma X frgil
20% para el cultivo de SP y MO
30% para el cultivo de clulas fetales
30% para el cultivo de tumores
2.- PENICILINA + ESTREPTOMICINA: utilizado como antibiticos para
evitar la contaminacin bacteriana.
3.- ANTIMICOTICOS: como la Fungizona para evitar el crecimiento de
hongos, si es que fuera necesario.

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

SUPLEMENTOS:
4.- L- GLUTAMINA: Es un aas que en su forma levgira mejora el crecimiento
celular.
5.- ESTIMULANTE MITOGENICO: Utilizado para estimular el proceso de
mitosis en el cultivo de linfocitos. Como:
- Fitohemaglutinina (PHA)
- Concavalina A (ConA)
- Pockeweed Mitogen
Adems se utilizan suplementos o reactivos especficos cuando se
requieren realizar estudios citogenticos especiales como:
.- Estudio Cromosoma X frgil: Se cultiva la SP (linfocitos) en medio
TC 199 RPMI 1640 pero deficientes en cido flico, ms L-glutamina
bien utilizando la Fluorodeoxiuridina (FUdR) Metotrexate (MTX)
que son inhibidores de las enzimas que participan en la sntesis de
novo del cido flico.

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

Medios de
Cultivo
y Suplementos

. Formas de
presentacin
diferentes.
. Medio Lquido y en
polvo
. Microcultivo

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

Preparacion de los
Medios de Cultivo
. Pesar el medio
. Diluir en agua destilada
. Agitar
. Aadir Suplementos
P+S
L-Glutamina
SBF
. Ajustar el pH

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

Esterilizacin de los Medios de Cultivo
. Sistema de filtracin al vacio
. Filtros millipore 0,22um
. Bomba de vaco
. Alicuotar en frascos estriles
. Control de esterilidad en estufa a 37C por 48 hrs.

Cultivo Celular: Estudio Citogentico

Guardar los
medios de
Cultivo en
congelacin a
4C 20C
hasta su uso.