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UNIVERSIDAD YACAMB

VICERECTORADO DE ESTUDIOS A DISTANCIA


PROGRAMA MAESTRA EN CIENCIAS AMBIENTALES
SEMINARIO DE TRABAJO DE GRADO

Deteccin de las Tensiones Mecnicas y las


Enfermedades en Plantas de Ctricos (Citrus
limonia [L.] Osbeck) por Espectroscopa de
Fluorescencia
Luisauris Jaimes

INTRODUCCIN

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Fotosntesis

Este proceso se constituye por la fijacin de dixido de


carbono (CO2) atmosfrico, el cual se transformar en
materia orgnica (carbohidratos) para nutrir a la
misma planta y en la liberacin de oxgeno (O2) como
residuo.

Pigmento
s
accesorios

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Fotosntesis y
Clorofila

La clorofila es el principal
pigmento absorbente de luz
en la mayor parte de las
plantas verdes

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Fotosntesis y
Clorofila

Procesos bioqumicos que se


realizan en el estroma de
loscloroplastos

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Fotosntesis y
Fluorescencia
Estado
excitado

foton

Molcula
absorbe
fotn

Fotoqumica
Fluorescencia
Calor
Estado
basal

Pigmentos
fotosinttico

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Fotosntesis y
Fluorescencia
Los pigmentos fotosintticos
(o simplemente pigmentos)
son molculas que absorben
luz de una longitud de onda
especifica y reflejan la luz de
otras
Absorbancia:
se
define
como la proporcin de luz
incidente absorbida por una
molcula.
Transmitancia: se define
como la proporcin de luz
transmitida que atraviesa una
molcula.

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Fotosntesis y Estrs
Pese a que las reacciones qumicas
que convierten la luz solar en
energa qumica tienen un gran
rendimiento, la capacidad de estas
reacciones es limitada

Existe
una
situacin
de
estrs
cuando
el
metabolismo de la planta, su
crecimiento o desarrollo, se
vean bloqueados o limitados .

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Fotosntesis y Estrs
La medicin del impacto del medio ambiente en la fotosntesis es de
inters para la agronoma debido a que la productividad de la planta
depende fuertemente de los rangos fotosintticos en el entorno.

Medicin de fotosntesis
Materia Seca
Mtodo de Istopos de CO2
Electroqumicos
Manomtricos

Todos estos mtodos son


destructivos, invasivos o exclusivos
de laboratorio

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Fotosntesis y Estrs
Actualmente se emplea la teledeteccin area y satelital de color
de la vegetacin y la reflactancia
Carecen de especificidad y la
selectividad
necesaria
para
discriminar diferentes tensiones en
las plantas

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Espectroscopia de
Fluorescencia

Eliminar las
repercusiones
negativas que
conllevan los
mtodos
invasivos

Utilizar la luz
como va de
informacin, los
sensores o
tcnicas que
utilizan principios
pticos permiten
realizar
mediciones no
invasivas

Espectroscop
ia de
Fluorescencia
Inducida por
Laser
(LIF)
Tcnicas
espectrofotomtrica
s han sido de
inters es las
ultimas 2 dcadas

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Esquema General de un Sistema


de Espectroscopa LIF
En LIF la fuente de
emisin de luz es
proporcionada por
un laser

Fuente de luz de
excitacin

Monocromador

Detector de luz

Analizador y
procesador de la
seal elctrica

Aparato de
registro
(hardware y
software)

Celdas para
colocar la
muestra
(microcelda)

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Sistema de Espectroscopa LIF

Monocromaticidad
de la
radiacin
lser

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Ventajas de
Espectroscopa
LIF

Sintonizabilidad
de la longitud
de onda

Monocromaticidad
de la
radiacin
lser

Coherenci
a espacial
de la
radiacin
lser

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LIF en deteccin de estrs

El Cancro de los Ctricos o Citrus Canker (CC)


es una enfermedad causada por la bacteria
Xanthomonas axonopodis pv citri.

Sntomas: Pueden observase en la fruta,


hojas, tallos, espinas y ramas de las
plantas.
Daos: Causa muerte regresiva, disminucin de
la calidad de la fruta, cada prematura de las
frutas y defoliacin severa

De fcil dispersin
Cancro de los ctricos causada por
Xanthomonas axonopodis pv. Citri.
Fuente: Web APS

MATERIALES Y METODOS

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A. Modelos estrs mecnico y


cancro de los ctricos

Cultivo bacteriano de
Xanthomonas
axonopodis en Agar
nutritivo (NA)

Suspensin
bacteriana en
tampn fosfato

La suspensin se
ajusto
espectofotomtricam
ente a 108 u/ml

Se confirmo la
desidad cultivando
en placas en NA

(A) Plantas sanas solamente


estresadas mecnicamente, (b)
Plantas estresadas de forma
mecnica y enfermas, (c) Solo
plantas enfermas, y (d) las
plantas de control sin estrs

Plantas de
invernadero
podadas 50
das antes de
la inoculacin

Induccin
Inoculacin
de estrs
con lamecnico
cepa

Belasque et al., (2008)

MATERIALES Y METODOS

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B. Sistema de Espectroscopia de
Fluorescencia Inducida por Laser.

Unidad portatil
Spectr-Cluster

Se hizo mediciones en el
da de los procedimientos
de induccin de estrs
mecnico y la
enfermedad antes de su
aplicacin (0), y 6, 13,
20, 27, 33, 42, 49, 55, y
60 das despus

Un
espectrmetro,
que funciona en
el rango de 350 a
850 nm

Las mediciones se
llevaron a cabo
manteniendo la sonda
a una distancia de 2
mm por encima de la
hoja para evitar el
contacto directo

II) una fibra en forma


de Y, que entrega la
luz lser a travs de
una fibra central y
recoge la
fluorescencia del
tejido usando otras
seis fibras

III) una fuente de


excitacin a 532
nm (laser) con
una potencia
total del orden de
10 mW

Belasque et al., (2008)

MATERIALES Y METODOS

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C. Anlisis de Espectros de
Fluorescencia
En la literatura, es muy comn el uso de diferentes proporciones de
fluorescencia para detectar diferentes tensiones. Hay tres relaciones
comunes
(i) Azul al rojo [fluorescencia azul / fluorescencia
roja (BF / RF)], que se define por la relacin entre la
intensidad de fluorescencia a 452nm y la intensidad
de fluorescencia a 685 nm

(ii) Azul al rojo lejano [fluorescencia azul /


fluorescencia rojo lejano (BF / RF)], que se define
por la relacin entre la intensidad de fluorescencia
a 452nm y la intensidad de fluorescencia a 735 nm

(iii) Roja a rojo lejano [fluorescencia roja /


fluorescencia rojo lejano (RF / FRF)] definido por la
relacin entre la intensidad de fluorescencia a
685nm y la intensidad de fluorescencia a 735 nm

Belasque et al., (2008)

MATERIALES Y METODOS

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C. Anlisis de Espectros de
Fluorescencia

El BF / RF y relaciones BF / FRF slo se


pueden obtener mediante excitacin UV

Por lo tanto, la fluorescencia inducida por


lser a 532 nm se limita a suministrar
slo el RF / relacin de FRF

Belasque et al., (2008)

MATERIALES Y METODOS

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C. Anlisis de Espectros de
Fluorescencia
El espectro de fluorescencia se debe a la emisin de clorofila
La luz en la regin verde excita el ChlF directamente mientras que
la luz en la regin UV-azul excita la fluorescencia de la clorofila y
otros pigmentos

Belasque et al., (2008)

RESULTADOS Y DISCUSIN

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Fig. 2. (A) relacin FR / FRF (b) FM


como una funcin del tiempo despus
de la inoculacin de plantas de
ctricos (Citrus limonia [L.] Osbeck).
Sanas (cuadrado slido) hojas sin
tensin mecnica (control), (crculo
relleno) sanas con tensin mecnica,
las hojas infectadas (slido tringulo)
del
cancro
ctrico
sin
tensin
mecnica, las hojas infectadas del
cancro ctrico (tringulo invertido
slidos) con una tensin mecnica.

Belasque et al., (2008)

CONCLUSIONES

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Se demostr que la espectroscopia de fluorescencia inducida


por laser (LIF) se puede utilizar para la deteccin de esfuerzos
mecnicos y de la enfermedad.
La capacidad de la LIF para discriminar diferentes
enfermedades en las plantas de naranja aun queda por
determinar; sin embargo, actualmente se estn llevando a
cabo experimentos en el campo para probarlo.

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