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LOJA
AREA DE LA SALUD HUMANA
CARRERA DE MEDICINA
MODULO VIII
CATEDRA DE PATOLOGA
DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
MTODOS DIRECTOS
M TO D O S D E
D IA G N STIC O
M IC R O B IOTiene
Lcomo
GI
CO
objetivo primordial
DIAGNOSTICO
DIRECTO
identificar al microorganismo
especfico que est causando el
dao o la patologa
1. OBSERVACIN
Podemos distinguir dosMICROSCOPICA:
tipos
diferentes de muestras
a. Se emplean para
observar la
morfologa de
bacterias,
especialmente de
espiroquetas.
biolgicas:
1.Preparaci
ones en
fresco o in
vivo.
Tambin sirve para
observar inclusiones
(grasas, etc.)
EJEMPLOS:
Suero
fisiolgic
o
Solucin
de KOH
(10%)
Demostrar la
presencia de
Tricomonas y
Treponemas
Identificacin
de Hongos
Tinta
china
El frotis se
hace con la
nigrosina
para identificacin
del
CryotococcusNeofor
mans.
Son las ms
utilizadas en
Microbiologa por
dos razones:
2.Preparaci
ones fijadas
y teidas
1. La tincin
facilita la
visualizacin de la
bacteria
2. Con varios
colorantes
clasificamos la
bacteria en
distintos grupos
Tincin Simple:
con azul de metileno
Tincin de Ziehl-Neelsen
Tincin de Gram
Tincin de Wirtz-Conklin:
MTODOS
DIRECTOS
MEDIO DE
CULTIVO
CULTIVO
CULTIVO
MTODOS
DIRECTOS
MEDIOS DE CULTIVO
Condiciones
de los Medios
Cultivos
Luz
humedad
Temperatura
PH: acidez o
alcalinidad
Presin de
Oxgeno
MTODOS
DIRECTOS
MEDIOS DE CULTIVO
Clasificacin
Clasificacin
Slidos
Slidos
Agar
Agar 15%
15%
Semislidos
Semislidos
Agar
Agar 5%
5%
Lquidos
Lquidos
No
No contienen
contienen
agar
agar
MTODOS
DIRECTOS
Agar
nutritivo
Agar chapman
Staphylococcus
Agar de
Sabourand
MEDIOS DE CULTIVO
Agar
en
Sangre
MTODOS
DIRECTOS
MEDIOS DE CULTIVO
Hemocultiv
o
Coprocultivo
Urocultiv
o
MTODOS
DIRECTOS
IDENTIFICACIN
DEL
MICROORGANISMO
MTODOS
DIRECTOS
Identificacin
del
Microorganismo
Exmen
Microscpico
Cultivo de
Bacterias
Pruebas
bioqumicas para
identificar la
bacteria
Pruebas de
sensibilidad ante
los
antimicrobianos
METODOS INDIRECTOS
Son aquellos que reconocen la respuesta
inmune (humoral o celular) que desarrolla
el husped. Se basan en la deteccin de
anticuerpos especficos mediante tcnicas
inmunolgicas. Se va a buscar la
respuesta
del
sistema
inmune
del
hospedador frente al agente infeccioso.
(EIA, IF, western blot, etc.).
PRUEBAS DE
INMUNODIAGNSTICO
Conjunto de pruebas inmunoqumicas basadas en la
reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) aplicadas al estudio
de procesos infecciosos.
Evalan la respuesta inmune (humoral o celular) con el fin de
determinar
una
infeccin.
Con
muestras
biolgicas
(principalmente suero) para saber si un paciente est infectado
(infeccin aguda), o ha respondido inmunolgicamente a una
infeccin (infeccin pasada) o a una vacuna.
prueba
para
confirmar
la
presencia
de
una
seria
(probabilidad
negativa).
la
de
capacidad
estar
sano
para
descartarla
si
prueba
la
es
ELABORACIN DE LA RESPUESTA
INMUNE
Desde que se produce el contacto con
un antgeno, la respuesta inmune
humoral tarda en desarrollarse y
detectarse de una a tres semanas.
La primera clase de inmunoglobulinas
que aparece son los anticuerpos de la
clase
M,
que
por
lo
general
desaparecen pronto.
INMUNIDAD HUMORAL
Inmunoensayo:
HEMOAGLUTINACIN INDIRECTA:
Para realizar esta prueba se utilizan antgenos ligados a eritrocitos, para
detectar anticuerpos especficos. Los eritrocitos se pueden sensibilizar con
diversos antgenos y se pueden utilizar como sistema indicador.
Inhibicin de la
Hemoaglutinacin (IH):
Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI):
Western Blot:
INMUNOGLOBULINAS
Su funcin es unirse al
antgeno, actuando como
receptoras de seales
antignicas o bien colaborar
en la destruccin antignica.
INMUNOGLOBULINA M (IgM)
Tiene
capacidad
neutralizante,
precipitante,
aglutinante,
fijar
complemento, activar la respuesta
inmune,
ejerce
su
accin
normalmente
en
los
espacios
intravasculares.
No
se
encuentra
de
modo
significativo
en
el
espacio
intersticial, se encuentra confinado
a la sangre y no atraviesa la
placenta
INMUNOGLOBULINA G (IgG)
Esta
Ig
posee
capacidad
neutralizante,
precipitante, de fijar complemento, de unirse a
clulas NK y a macrfagos (opsonizacin) y son
capaces de atravesar activamente las membranas
biolgicas.
INMUNOGLOBULINA A (IgA)
La
propiedad
ms
importante
viene
determinada por su capacidad de unirse por el
extremo Fc a la pieza secretora, gracias a la
cual puede ser secretada por las mucosas y
glndulas exocrinas, ejerciendo su accin ms
importante en la superficie de mucosas y
lquidos biolgicos (sobre todo IgA2).
INMUNOGLOBULINA D (IgD)
La concentracin de esta
inmunoglobulina en suero es
muy baja (20 ug/mL).
INMUNOGLOBULINA E (IgE)
CONCENTRACIONES DE
INMUNOGLOBULINAS EN
SUERO
DIAGNSTICO MICROBIOLGICO
RECOLECCIN Y MANEJO DE LAS
MUESTRAS
SANGRE
- Hemocultivo es importante en la sepsis, la
bacteriemia, tromboflevitis infecciosa, los
aneurismas fngicos
Los parsitos son detectados en frotis de
sangre perifrica
La sangre debe ser recogida antes de la
antibioticoterapia
Almacenamient
o
Medio de
cultivo. No
congelar
Almacena
r
Recoleccin
despus de la
fiebre y
catarro
Depende de
bacteriemia Numero
transitoria,
de
intermitente y muestras
continua
2a3
hemocultivos
con intervalos Hemocultivo
de 30 a 60 min s separados
o de pocos
minutos
- En adultos se
recoge 20 a 30
ml de sangre
- Recien
nacidos y
nios de 1-5ml
Contaminant
es de
muestra
Streptococcu
Streptococcu
s
s viridans
viridans
Bacillus
Bacillus
Corinebacteriu
Corinebacteriu
m
m
Propionibacteriu
Propionibacteriu
m
m
Muestra
Muestra
arterial
arterial
Tcnicas de
recoleccin de
sangre
Neutralizacin de
anticuerpos, leucocitos y
antimicrobianos
Catter
Catter
intravascular
intravascular
Diluir la sangre en un medio en proporcin 1:10
Centrifugacin
- La muestra puede retrasarse 8 hora sin efectos
adversos
- Mayor recuperacin de Staphylococcus aureus,
algunas enterobacterias y hongos (Histoplasma
capsulatum
- Disponibilidad directa de colonias para el test de
sensibilidad
- No se
puede encontrar S. pneumoniae,
Haemophylus influenzae o anaerobios
- Mayor riesgo de contaminacin
Deteccin de virus
Viremia se produce
en la incubacin o
los 2 primeros das
de los sntomas
La recoleccin de
sangre con
venopuncin o un
catter
intravascular son
adecuadas
Para separar:
- leucocitos se
recoge sangre con
anticoagulante.
- Suero se recoge
sin anticoagulante
Las muestras
deben ser llevadas
rpidamente al
laboratorio o dejar
a 4C en la noche
(excepto VIH,
llevar en 6 horas)
Deteccin de parsitos
Recoleccin
En tubos con anticoagulantes y transportadas
rpidamente al laboratorio
Si se envan despus se deben fijar con alcohol
Frotis directo
Diagnstico definitivo con tincin de las
muestras
( Giemsa)
Observacin
Primero con bajo aumento para detectar
microfilarias
Despus se examina en el lente con aceite de
inmersin
FLUIDOS CORPORALES
Lquido Cefaloraqudeo
Diagnstico
Meningiti
s
Encefaliti
s vrica
Lquido Cefalorraqudeo
Tejidos
La histopatologa sirve
para diferenciar entre
infeccin y malignidad
Ojo
Muestras
Conjuntivales
Agentes
etiolgicos
S. aureus
S. Epidermidis
H. Influenzae
S. Pneumoniae
C. Trachomatis
Adenovirus
Recoleccin de
muestra
- Se obtienen de la
parte superior e inferior
de la conjuntiva tarsal
con
una
torunda
humedecida
-Se debe inucular la
muestra en el medio de
cultivo
- Si es cultivo viral se
recogen 2 muestras
Deteccin de
Chlamydia
trachomatis
- Se tie con Giemsa y
debe
examinarse
clulas con inclusiones
intracitoplasmaticas
basoflicas
Ojo
Agentes etiolgicos
S. aureus
S. Pneumoniae
Pseudomona aeruginosa
Moraxella
Muestras
Corneales
Recoleccin de muestra
Cuando el cultivo se sospecha
negativo
Tracto respiratorio
Muestras Nasofarngeas
C. Trachomatis
Sarampion
Neumona
Difteria
Pertussis
S. aureus
Recoleccin de
muestra
Aspirados
Lavados
Frotis
Medio de
transporte
adecuado
Agentes
etiolgicos
Recoleccin de la
muestra con una
torunda con la punta de
polister
Tincin con cuerpos
fluorescentes o con
ELISA
C.
Trachomatis
Bordetella
pertussis
Recoge con lavados o
frotis
Cultivo de Agar Regan
Lowe o Agar BordetGengou
Recoleccin de muestra
con una torunda de
polister
Cultivo con agar con el
5% de sangre de oveja
o agar sal de manitol
S. aureus
Tracto respiratorio
Muestras de Garganta
Con frotis con
torunda y se
colocar en un
cultivo para virus
o bacterias
respectivamente
Recoleccin de muestras
Agente etiolgico
Streptococcus de
grupo A
Herpes simple
CMV
Enterovirus
H. Influenzae tipo
B
S. Aureus y S.
pneumoniae
M. Pneumoniae
Angina de Vincent
Esputo y aspirado
traqueal
Recoleccin
Primera hora de la maana
Recoger 5 a 10 ml de muestra con tos profunda o inducir
con aerosoles
Aspirado traqueal
Transporte
Muestras deben someterse a screening
Se tie con Gram
Observacin
Con bajo aumento primero
No se pide screening con M. pneumonia, Lgionella y
micobacterias
1. Recogida
de la mitad
de la miccin
2. Sondaje
3. Aspiracin
suprapubica
Al principio, un
crecimiento 10 o
mas CFU de
bacterias hera
indicativo de
infeccin.
Infecciones
reales con
menos de
10 CFU
pueden
producirse
en:
Bebes y nios; en
hombres y personas
con sonda , que se han
tratado con antibiticos
Ahora mujeres
jvenes con
vida sexual
activa y
sintomatologa
uretral aguda
CULTIV
O DE
ORINA
Comprobar las
muestras de
orina con tincin
de Gram es
rpido y
econmico
10 CFU/ml se
considera
significativo en
presencia de
piuria
En hombres
con
sintomatologa,
un crecimiento
de 10 CFU/ml
o mas se
considera
infeccin
TRACTO G EN ITAL
1.til pra
detectar
detectar
agente
etiologico de la
vulvovaginitis y
vaginosis
4. Tambin son
tiles para el Dx
el pH vaginal y
el test del olfato
SECRECION
ES
VAGINALES
2.En mujeres
pospuberales
los patgenos
mas comunes
3. Una
preparacin en
fresco es el test
mas adecuado
para el
diagnostico
Garderella vaginalis
Candida
Trichomonas vaginalis
MUESTRAS
ENDOCERVICALE
S
1. Se obtienen
con la ayuda
de un
especulo
Determinar
agente
etiolgico
de la
cervicitis
2. Se recogen
con una
torunda o un
cepillo
endocervical
Identificar
personas
asintomticas
con un
organismo que
causa
enfermedad de
transmisin
sexual
3. El manejo
de las
muestras varia
en funcin del
microorganism
o
N. gonorrhoeae
Chlamydia
trachomatis
VHS
EXUDADO
URETRAL
Para diagnostico de
enfermedades de
transmisin sexual
Se recogen por lo
menos 2 horas
despus de la
miccin
Las condiciones en
funcin del tipo de
torunda y
transporte son las
mismas para
muestras
endocervicales
N. gonorrhoeae
Chlamydia
trachomatis
LESIONES VESICULARES
EN LOS GENITALES
Para
confirma
r
infeccin
por VHS
Se
realiza
cultivo
del
liquido
vesicular
El VHS
tambin se
puede
detectar con
tincin
directa
MATERIAL DE ULCERAS
GENITALES
Para identificar:
VHS,
Haemophilus
ducreyi,
Treponema
pallidum,
Chlamydia
trachomatis
Se realiza
cultivo del
liquido
vesicular
El VHS tambin
se puede
detectar con
tincin directa
1. til
para
determi
nar el
agente
Cultivo bacteriano
etiolgi
y deteccin de
co de la
toxinas en las
diarrea
heces
infeccio
sa o
intoxica
cin
aliment
aria
Se recomienda cultivo
celular, test de ELISA y
examen directo en el
microscopio
H ECES
LA RECOLECCION, EL
TRANSPORTE Y EL
ANALISIS SON
DIFERENTES PARA
CADA GRUPO.
2.Diag
nostico
de
botulis
mo
3.
Infecci
ones
causad
as por
adeno
virus,
entero
virus
4.Patog
enos de
transmi
sin
sexual
5.
Protoz
oos
intesti
nales y
helmin
tos
El anlisis incluye
preparar una solucin
salina y de yodo y
teir las muestras
frescas
Observacin
microscpica
PIEL Y LESIO N ES
SU BCU TN EAS
1.El liquido
puede extraerse
con una aguja
y una jeringa o
con una torunda
4.Para detectar
bacterias tincin
con Gram y para
hongos tinte de
plata, calcofluor
blanco o rojo
VEJIGAS,
BULAS Y
PUSTUL
AS
3. El anlisis de
muestras de
vejigas o
pstulas para
detectar virus
incluye un cultivo
celular
El anlisis sirve
para detectar
virus, bacterias y
hongos.
2.Se preparan
las extensiones
y luego se tien
Pueden
ser
primaria
s
O de
cbito
ULCERA
S
CUTANE
AS
2.El
manejo
de las
muestr
as para
hongos
y
bacteria
s es
diferent
e
GRACIAS
BIBLIOGRAFIA