UNIVERSIDAD PRIVADA NORBERT WIENER

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

TECNOLOGA MDICA EN
LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA
PATOLGICA

INMUNOLOGIA

MICROLINFOTOXICIDAD
EN PLACAS DE TERASAKI
PROFESOR: CARLOS BALTODANO HONORES
ALUMNO: QUICHIZ CHINGA JORGE NICOLS

FUNDAMENTO
Este mtodo se basa en el empleo de anticuerpos especficos
contra
diferentes alelos del HLA (molculas de clase I y de clase II).
Cuando estos anticuerpos reconocen al antgeno contra el cual
son
especficos, y en presencia de complemento, se produce la
lisis celular

COMO SE REALIZA
Extraccin de sangre del paciente
Aislamiento de clulas mono nucleares (centrifugacin en

gradiente de Ficoll)
Siembra de clulas en fosas de placas de Terasaki
previamente sensibilizadas con sueros policlonales contra
diferentes alelos del HLA.
Incubacin (unin de los Ac a las molculas de clase I o de
clase II del HLA)
Agregado de fuente de complemento (suero de conejo)
Incubacin y lisis de clulas que unieron Ac en la etapa
anterior
Agregado de un colorante de contraste para diferenciacin
de clulas vivas y muertas (diacetato de fluorescena)
Observacin microscpica y clasificacin.

VARIANTE DE LA PRUEBA:
METODO DE LA ANTIINMUNOGLOBULINA
Extraccin de sangre del paciente
Aislamiento de clulas mononucleares (centrifugacin en

gradiente de Ficoll)
Siembra de clulas en fosas de placas de Terasaki
Incubacin (unin de los Ac a las molculas de clase I del
HLA)
Incubacin con IgG de conejo anti-inmunoglobulinas
humanas
Agregado de fuente de complemento
Incubacin y lisis de clulas que unieron Ac
Agregado de un colorante de contraste para diferenciacin
de clulas vivas y muertas (diacetato de fluorescena)
Observacin microscpica y clasificacin o "scoring

VENTAJAS
Tcnica sencilla que requiere poco equipamiento

sofisticado (microscopio invertido de pifluorescencia)

DESVENTAJAS
La tcnica debe realizarse sin interrupcin desde su inicio hasta su

finalizacin, dado que se trabaja con clulas viables.

No se detectan Ac no fijadores de complemento, excepto en la variante
que emplea la anti-inmunoglobulina
Alto costo
Baja resolucin
No existen sueros contra alelos poco frecuentes
La mayora de los sueros no son monoespecficos y adems presentan
reactividad cruzada con otros alelos, la alta homologa e identidad entre
muchos eptopes de las molculas de clase I y de clase II del HLA permite
agrupar a estas molculas en "grupos de reactividad cruzada" o "CREGs"
No adecuado para tipificacin de donantes cadavricos (en especial en el
caso de trasplante de mdula sea)
Interpretacin difcil por escasez de sueros mono especficos y
reactividades cruzadas
No se detecta homocigosis (en general se informa 1 alelo y el otro se
informa como "blanco")
Ambigedades (no se pueden definir determinadas combinaciones de
alelos)