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ELISA
Los anticuerpos inducidos por vacunas o presentes en la poblacin en estudios
inmunoepidemiolgicos, pueden ser medidos por tcnicas in vivo e in vitro.
Entre los ensayos in vitro no funcionales para la deteccin de anticuerpos, el ELISA
(Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay)
Se apoya de tres
caractersticas
biolgicas
fundamentales
Especificidad
antgeno
anticuerpo
Poder cataltico
Especificidad de
las enzimas
Desarrollada
por
el
investigador suizo Peter
Perlmann
y
la
investigadora
Eva
Engvall,
de
la
universidad
de
Estocolmo en 1971
ELISA:
(ELISA)
Ventajas:
Los ensayos que usan como marcador enzimas presentan
ventajas tales como:
Se basa en:
1) El antgeno y anticuerpo pueden
enlazarse
a
una
superficie
portadora insoluble y retener su
reactividad inmunolgica.
2) Las enzimas tienen actividad
especfica alta y convierten una
cantidad relativamente grande de
sustrato en producto detectable, lo
que
permite
detectar
concentraciones muy bajas del
ligando.
3)
la
actividad
enzimtica
o
reactividad
inmunolgica de los conjugados se preserva y
permanece estable durante el anlisis y el
almacenamiento.
4) las enzimas no estn presentes en el lquido
biolgico que se va a analizar.
policlonal.
Estos
Enzimas
Se utilizan como Marcador por:
Su poder cataltico
Su alta especificidad
El amplio espectro de substratos que pueden usarse
Gran estabilidad de los conjugados
ELISA Directo
Las
placas
ELISA
se
preparan recubriendo los
pocillos con las soluciones
en las que se sospecha se
encuentra el antgeno. Se
incuban con anticuerpos
marcados.
Indican
la
presencia de antgeno en
la solucin analizada.
ELISA indirecto
Uso dos anticuerpos: uno primario contra
el antgeno y uno secundario marcado
contra el primario.
La deteccin tiene mayor sensibilidad por
presentar una amplificacin de seal
debida a la unin de dos o ms
anticuerpos secundarios por cada primario.
Es el ensayo ms popular, pues un mismo
anticuerpo secundario marcado y un
mismo
sistema
enzimtico
permiten
cuantificar
una
gran
variedad
de
antgenos.
ELISA HADA
1. Fijacin de anticuerpos especficos al soporte.
Lavado
2. Adicin de la muestra problema. Lavado.
3. Adicin de anticuerpos especficos del antgeno
a detectar (deben tener un eptopo diferente de los
anticuerpos con los que se han tapizado el
soporte). Lavado.
4. Adicin de anticuerpos conjugados con una
enzima anti-anticuerpos empleados en el paso
anterior. Lavado.
5. Adicin de un substrato.
ELISA Competitivo
El anticuerpo de la muestra va a competir con el
conjugado por un nmero limitado de sitios de unin del
antgeno. Habr ausencia de color en una muestra
positiva debido a que el sustrato no encontrar a la
enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el
anticuerpo presente en la muestra.
1. Fijacin insoluble
soporte. Lavado
de
anticuerpos
especficos
al
Aplicaciones
Enfermedades producidas por parsitos
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Enfermedades producidas por virus
Hormonas
Cuantificacin de inmunoglobulinas
Inmunocomplejos circulantes y Patologa Vegetal:
Enfermedades producidas por virus bacterias y por
hongos en plantas
Video:
https://www.youtube.com/watch?v=Jmrv137VQIA