IN G EN IER A

D E LA S
R EA C C IO N ES
B IO Q U M IC A
S
REACTOR DE ENZIMAS Y
CLULAS INMOVILIZADAS
Integrantes:
Antonio, Julio
Codorni, Mariano
Podetti, Celina
Trigo, Jos

Inm ovilizacin biocatalitica

Inmovilizacin es el proceso de adherir

un biocatalizador (enzimas aisladas o

clulas enteras) a un soporte solido. Cual
puede ser orgnico o inorgnico, tales
como derivados de celulosa, materiales
cermicos, oxidos metalicos,etc.

Principales ventajas de los sistem as de

biocatalizadores inm viles

Una separacin ms fcil de los

biocatalizadores del producto.

Una mayor estabilidad de los
biocatalizadores.
Configuraciones de reactor ms
flexibles.
No hay necesidad de remplazar
continuamente el biocatalizador.

Tcnicas de inm ovilizacin

Adsorcin
Aprisionamiento, Unin Cruzada
Formacin de enlace covalente

Inm ovilizacin
Clulas o enzimas fsicamente

confinadas en cierta regin definida

en el espacio, reteniendo sus
propiedades y actividades catalticas.
Combina la actividad elevada y
especifica de las biomoleculas, con
estabilidad qumica y mecnica del
soporte.

 Actividad afectada

Ventajas y desventaj
poras
proceso
Uso continuo
Reutilizacin
Control de

concentracin
Proteccin

inmovilizacin
Velocidad de
reaccin limitada
por velocidad
difusin
Heterogeneidad en
el sistema
Biocatalizador es
mas caro que
enzima nativa

Inm ovilizacin Irreversible

Implica el enlace del biocatalizador a

un soporte de manera permanente.

Enlace covalente
Enlace cruzado
Atrapamiento

Form acin de enlaces

covalentes
Se emplean cuando se requiere

estrictamente la ausencia de
enzimas en el producto.
Primero se necesita activar el
soporte.
Segundo se enlaza covalentemente
la enzima con el soporte.
Tercero se cuantifica la concentracin
de protena libre y de protena unida.

Form acin de enlaces

cruzados
No es necesario el uso de soporte, el

enlace se da entre enzimas.

Primero se debe tener preparada la
enzima en solucin.
Segundo se aade un agente de bajo
peso molecular.
Tercero se forman enlaces covalentes
entre los grupos funcionales que
forman agregados.

Atrapam iento
Oclusin de enzimas dentro de red

polimrica, que permite paso de

sustrato y productos.
Puede ser por atrapamiento en gel,
por fibras o por microencapsulado.
Se utiliza poco debido al limite de
transferencia de masa.

Inm ovilizacin Reversible

Enzimas puedes ser desprendidas del

soporte bajo condiciones no extremas.

Por adsorcin
Adsorcin no especifica
Adsorcin hidrofobica
Quelacin
Enlaces disulfuro

Por adsorcin
Emplea soportes con adsorbente

activo, que retienen enzimas por

interacciones inicas o fuerzas
dbiles.
Primero se pone en contacto la
enzima en solucin acuosa con el
soporte adsorbente.
Segundo se lava el soporte y elimina
enzima no inmovilizada.

Adsorcin no especifi
ca
Mtodo mas simple, basado en

enlace inico e interacciones dbiles.

Puentes de hidrogeno, fuerzas de var
der Waals, interacciones
hidrofobicas; enlaces inicos con
sales.

Adsorcin hidrofobica
Se manipulan las variables pH,

concentracin de sales y
temperatura.
La resistencia de las interacciones
radica en la hidrofobicidad .

Q uelacin o enlace m etlico

Se utilizan principalmente sales de

titanio y circonio.
Sales metlicas o hidrxido son
precipitados en el soporte por
calentamiento o neutralizacin.
El soporte es regenerado lavndolo
con un fuerte quelante (EDTA).

Form acin de enlaces disulfuro

Los enlaces qumicos y la interaccin

entre enzima y soporte son

complejos.
La estabilidad depende de
interacciones electroestticas,
interacciones estricas, cambios en
el estado de hidratacin y
reacomodos en la estructura de la
protena.

Sistem as de clulas
inm ovilizadas
Ventajas
Provee una mayor concentracin de clulas
Provee un reuso de clulas y la eliminacin de los costos de

procesos de recuperacin de clulas y reciclo de clulas.

Elimina el problema de lavado para grandes factores de
dilucin.
La combinacin de altas concentraciones de clulas y altas
velocidades de flujo permite productividades altas
La inmovilizacin provee unas condiciones ambientales
favorables para las clulas, y esto se traduce en una mayor
perfomance del biocatalizador (rendimientos de productos
ms altos, y velocidades mas altas).
Para algunas clulas, es importante protegerlas de grandes
esfuerzos de corte.

Sistem as de clulas
inm ovilizadas
Desventajas
El producto de inters debe ser

excretado por las clulas.

Los procesos difusionales toman una
gran importancia.
El control de las condiciones
ambientales es complicado debido a la
heterogeneidad del sistema.

Inm ovilizacin activa de

clulas
Atrapamiento fsico con matrices

porosas.
Encapsulacin.
Adsorcin de las clulas en la
superficie de soportes inertes.
Unin covalente.
Cross-linking

Inm ovilizacin pasiva de

clulas
Biofilm:

Eleccin delm todo de inm ovilizacin

LIM ITACIO N ES D IFU SIO N ALES EN

SISTEM AS D E EN ZIM AS
IN M O VILIZAD AS

Sb=concentracin del sustrato en el bulk (g/cm3)

Kl= coeficiente de transferencia de masa del lado del
lquido en (cm/s).

ENZIMAS INMOVILIZADAS

MATERIALES
DE SOPORTE
NO POROSOS

Enzimas
adsorbidas

MATERIALES
DE SOPORTE
POROSOS

Enzimas
atrapadas en
poros

CLULAS
INMOVILIZADAS

BIOFILM

PELLETS

Resum en:
Limita la velocidad de
difusin

Limita la reaccin qumica

COMPARABLES

EFECTOS DIFUSIONALES EN LAS ENZIMAS

UNIDAS A LA SUPERFICIE DE MATERIALES DE
SOPORTE NO POROSOS

velocidad de reaccin = velocidad de

transferencia de m asa

Ss no se puede m edir
experim entalm ente

Para enzimas inmovilizadas en un catalizador no poroso. La curva A resulta del

conocimiento de los parmetros cinticos intrnsecos y la carga de la superficie
de la enzima. La curva B es la ecuacin de transferencia de masa. La
interseccin de estas dos lneas es la velocidad de reaccin.

Cuando controla la reaccin qumica

Pseudoprimer
rden

Cuando el sistema est controlado por la

reaccin

EFECTOS DIFUSIONALES EN ENZIMAS

INMOVILIZADAS EN UNA MATRIZ POROSA

Asum iendo que:

Cintica de Michaelis- Menten

Soporte inerte

Lu eg o, ap lican d o con d icion es d e

con torn o
S = S s p ara cu an d o r= R
d S /d r= 0 cu an d o r= 0

S=1 y r=1
dS/dr=0 cuando r=

vel. reaccin qca

Vel. difusin
En el estado estacionario:

 Factor de efectividad
velocidad de reaccin con limitaciones
difusionales
velocidad de reaccin sin
limitaciones difusionales

Para una velocidad de reaccin de rden

cero
Para un gran rango del valor del modulo
de thiele

Para una reaccin de orden uno

Variables ms importantes son Vm y R ya que la

concentracin del sustrato, Km y De estn ya fijadas

CLULAS INMOVILIZADAS
Film s biolgicos
crecimiento de multicapas de clulas en la
superficie de un soporte slido

LIMITACIONES DIFUSIONALES EN UN
SISTEMA DE CELULAS INMOVILIZADAS:

r max= velocidad mxima de bioconversin (mg de Sustrato /h)

De= difusividad efectiva
es el espesor de la pelcula
So= Concentracin inicial del sustrato
en el bulk
Es d eseab le m an ten er el D a< 1 p ara
elim in ar la elim in acion es
d ifu sion ales cu an d o la
p rod u ctivid ad d e la p ob lacin d e
clu las n o m ejora con otros
m tod os.

V crecim iento fi
lm < < < < V consum o de sustrato
S e asume estado estacionario

la m xim a velocidad de fl
ujo delsustrato en
ausencia de lim itaciones difusionales esta dada por
la siguiente ecuacin:

As= rea superficial del biofilm disponible para el

flujo de sustrato
Ns= flujo de sustrato
L = espesor del biofilm

= M dulo de Thiele m odifi

cado

Form acin de pellets

La ecuacin adimensional de
transporte de sustrato

condiciones de contorno

Solucin

Bioreactores de clulas y enzimas

inmovilizadas

Operacin Batch
Operacin
Continua

Reactor de flujo pistn

Se considera un balance de masa del

sustrato limitante referido a un elemento
diferencial
-F dSo = Ns a A dz
Ns= - De( dS/ dy) ]y=L = ( rm So/ Ks+
So) L
Ks ln (Soi/so)+ (Soi-So)= rm L a AH/F

ln (Soi/so)= rm L a AH/F Ks

R eactores enzim ticos que

em plean enzim as
inm ovilizadas

A P LIC A C IO N ES D E
EN Z IM A S IN M O V ILIZ A D A S

 Aplicaciones analticas: biosensores

Aplicaciones medicas: tratamientos

con enzimas inmovilizadas

Aplicaciones industriales: industria
qca, farmaceutica, alimentaria y de
tratamiento de residuos

Biosensores
Usados en medicina,

control de calidad de
alimentos, control
medioambiental.

Ventajas
Instrumentacin barata

y sencilla
Anlisis muy sensible
Permite el uso de
muestras con color o
turbias que no se
podran medir con
mtodos
espectroscpicos

Aplicaciones de Biosensores
Diagnostico clnico: Se pueden detectar

niveles sricos de glucosa, lactato y ac

rico mediante electrodos enzimticos
disponibles comercialmente.
Actualmente, se busca deteccin de
frmacos, clulas y virus patgenos
Control de calidad: pueden determinar el
grado de contaminacin microbiana,
medir el azcar presente en bebidas, etc
Control de la polucin: Analizadores de
contaminadores de agua, detectan la
presencia de residuos txicos, pesticidas,
herbicidas o microorganismos

Aplicaciones m edicas
Existen muchas

enfermedades
causadas por una
alteracin o carencia
de una determinada
enzima. El
tratamiento con
estas enzimas
inmovilizadas
permitira una accin
ms prolongada.

Aplicaciones Industria
Industria Farmacutica
Obtencin de antibiticos -lactmicos.

Industria Alimentaria
Hidrolisis de protenas
Hidrolisis de hidratos de carbono
Mejora de caractersticas organolepticas
Obtencion de edulcorantes y aditivos
Otras

Lactasa (-galactosidasa)
Permite la conversin de la lactosa en sus
monosacaridos componentes glucosa y galactosa.
La eliminacin de este azcar en la leche se puede
conseguir tratandola con -galactosidasa de levaduras
inmovilizada en fibras de acetato de celulosa

Tratam iento de aguas

residuales

Mtodo para la reduccin de nitratos a

nitritos en aguas residuales empleando

enzimas inmovilizadas
El benceno es otro compuesto muy
txico que puede ser degradado
mediante clulas de Pseudomonas
putidaatrapadas en geles de
poliacrilamida.