COPROLOGIE

Cycle biologique
dEntamoeba histolytica
Dessins de Van NGUYEN-ANH
In Dictionnaire de Parasitologie de P.BOUREE

Diagnostic parasitologique
Intrt:
Diagnostic individuel
Enqute pidmiologique
Difficults et limites
(Diagnostic dorientation)

Diagnostic parasitologique
Milieux biologiques

Selles (coprologie)

Kopros

Urines
Sang
Autres
Peau, LBA, MO, Muscles.
Ectoparasites

Parmi tous les prils, le moindre nest pas le fcal

Gandhi, activiste indpendantiste

indien, estimait que le dveloppement
des sanitaires tait un objectif plus
important que l'indpendance.

En Afrique, la moiti des lits d'hpital sont occups par des patients souffrant
de maladies vhicules par les matires fcales.

Compte rendu

L'accs aux toilettes, enjeu mondial de dveloppement

LE MONDE | 28.10.08 | 15h05 Mis jour le 28.10.08 | 15h05

Pour rduire la pauvret dans le monde et amliorer la sant des dshrits, la mthode la
plus simple est de construire des toilettes. C'est la conclusion laquelle est parvenu le Rseau
international sur l'eau, l'environnement et la sant (Inweh), branche canadienne de l'Universit
des Nations unies. Dans un rapport rendu public le 20 octobre, ce groupe de rflexion
recommande aux gouvernements une approche plus coordonne et intgre des questions
d'approvisionnement en eau potable et d'accs des sanitaires fonctionnels.
Les chiffres font frmir : environ 2,5 milliards de personnes - plus d'un tiers de
l'humanit - utilisent des latrines qui n'offrent pas de garantie contre le
dveloppement de maladies lies aux matires fcales. Et 1,2 milliard n'ont d'autre
ressource que de dfquer dans la nature, selon des donnes collectes par
l'Organisation mondiale de la sant et l'Unicef. Ces personnes passent une demi-heure
en moyenne chaque jour faire la queue dans des installations publiques ou pour trouver un
endroit isol. Soit deux jours ouvrs par mois.
L'impact sanitaire est considrable. Les maladies diarrhiques tuent 1,8 million de
personnes chaque anne. On estime que 88 % de ces affections ont pour origine un manque
d'hygine et d'accs des sanitaires srs. Les enfants, dont 5 000 meurent chaque jour, paient
le plus lourd tribut.
En Afrique subsaharienne, la moiti des lits d'hpital sont occups par des patients souffrant de maladies vhicules par les matires
fcales. Dans le monde, 200 millions de tonnes d'excrments humains finissent dans des rivires chaque anne, contaminant les eaux
de surface, voire les nappes phratiques, avec leur lot de bactries, virus et autres parasites.
Cet enjeu sanitaire figure

rarement au premier plan de l'agenda international. "La question reste

taboue, reconnat Zafar Adeel, directeur de l'Inweh. Les politiques hsitent aborder ces problmes dans leurs discours. Ce n'est
pas "poli"." Les Nations unies ont surmont cette aversion. 2008 a t dclare anne mondiale de
l'assainissement. Et le dveloppement des toilettes tait l'un des objectifs du millnaire, dfinis en 2000 : diminuer par
deux le nombre de personnes n'ayant pas accs des sanitaires d'ici 2015.
En Occident, "les systmes de distribution d'eau sont souvent anciens. Seront-ils capables d'encaisser des vnements

COPROLOGIE
Selles
Parasites recherchs : kystes, ufs, larves,
adultes
Prlvement
Mesure des lments parasitaires
Techniques de concentration
et techniques particulires

Diagnostic coprologique

Entamoeba
coli

Douve de Chine

Entamoeba
histolytica

Entamoeba
hartmanni

Petite Douve
Bothriocphale
segmente
embryonne

Ascaris
typique

atypique

Grande
Douve

Trichocphale

Schistosoma
intercalatum

Endolimax

Giardia

Hymenolepis
nana

Taenia

Oxyure

Ankylostome

Schistosoma
mansoni

Chilomastix

Iodamoeba

Hymenolepis
diminuta

Dipylidium

Schistosoma
japonicum

10m
Entamoeba
coli

Entamoeba
histolytica

Entamoeba
hartmanni

Endolimax

Giardia

Chilomastix

Iodamoeba

50m

Douve de Chine

Petite Douve

Bothriocphale

Taenia

Hymenolepis
nana

Hymenolepis
diminuta

50m

Ascaris

Trichocphale

Oxyure

Ankylostome

Dipylidium

100m

Grande
Douve

Schistosoma
intercalatum

Schistosoma
mansoni

Schistosoma
japonicum

Prlvement

dysenterie amibienne

Mesure des lments parasitaires

Etalonnage du Microscope

Micromtre oculaire

Etalonnage du Microscope
Dterminer la longueur couverte en m par une division du micromtre oculaire

Remplacer loculaire normal par loculaire micromtrique.

Disposer sur la platine du microscope le micromtre-objet.
Etablir la mise au point des 2 chelles et faire concider les O des deux chelles.
On repre une division du micromtre oculaire qui se superpose exactement une
division du micromtre-objet ; ces deux divisions doivent tre recherches le
plus loin possible du O , de faon obtenir une meilleure prcision.
On peut ainsi en dduire la longueur de chaque division du micromtre oculaire.
Effectuer lopration pour les deux objectifs x 10 et x 40.

Micromtre objet

Micromtre oculaire

Exemple : 18 divisions du micromtre oculaire couvrent 300 m

1 division couvre donc 16,66 m

Micromtre oculaire

Techniques de concentration

Mthode diphasique: acto-actique / ther

Mthode par flottation : ractif iodo-mercurique

Mthode diphasique: acto-actique / ther

1- Dilution homogne
selles + acto-actique
- Pr dilution : 1 goutte pour examen direct
- Poursuivre la dilution
- Laisser sdimenter 10 30 sec les gros dbris

Examen Direct

2- mulsionner : oblitrer lorifice avec le pouce et agiter vivement

dilution fcale + ther

ther
dilution fcale

mulsion

3- Centrifuger 3 min 2500 trs/min : 4 couches se superposent

Phase thre
Dbris
Phase aqueuse
Culot denrichissement : PARASITES

4- Isolement du culot de centrifugation

- Dcoller lanneau de dbris avec les mors dune pince
- Eliminer dun geste sec les 2 phases liquides et lanneau
- Remettre rapidement le tube lhorizontale
Passer un tampon de coton sur les parois internes du tube
- Agiter le tube pour remettre en suspension et prlever la pipette Pasteur

Mthode par flottation : ractif iodo-mercurique

Technique de JANECKSO et URBANYI modifie
1- Dilution homogne
Selles + Eau distille

2 - Tamiser

3 - Centrifuger 2 3 min 3000 trs/min

4 - Centrifuger 2 min 2000 trs/min
Eliminer la phase aqueuse
Prlever 4 5 gouttes du film superficiel
Diluer le culot avec le ractif iodomercurique
avec une anse mtallique

Technique de KATO et MIURA

(claircissement par la glycrine)

NUMERATION DES UFS

Cette technique permet dapprcier lintensit dune infestation (Ankylostomes),
de juger de lefficacit dune thrapeutique

Frottis pais de KATO et MIURA

Principe : technique de dcoloration des selles qui permet de distinguer les ufs de
parasites dans une prparation des selles rendue translucide.

- Glycrine
100 ml
- Eau distille
100 ml
- Solution de vert malachite 3 %
1 ml
Bandes de cellophane adhsive de 20 x 30 mm immerges dans
la solution de glycrine pendant 24 heures.
Technique: Sur une lame porte-objet, dposer 50 mg de selles, recouvrir par une
des bandes de cellophane imprgne, presser laide dun bouchon de caoutchouc pour
rpartir rgulirement la selle; laisser claircir une heure temprature ambiante. Examiner
rapidement car un sur-claircissement risquerait de faire passer inaperu certains ufs
(Ankylostomes, Schistosomes).
Les rsultats sont rendus en nombre dufs par gramme de selles.

techniques particulires

sol humide
t> 25
oeuf

larve

larve strongylode
infestante

Coproculture
Strongles et Ankylostomes
Mthode en boite de Ptri

Selles

Eau
Lames + papier filtre
Incubation 25 28 C
Ajouter de leau chaque jour

Strongles : larve rhabditoide

2 jours

larve strongyloide

Ankylostomes :uf 24 heures larve rhabditoide 6 jours

larve
strongyloide
!!! Larves strongyloides infestantes par voie transcutane

techniques particulires
Mthode de BAERMANN et LEE
concentration des larves des Strongles

sol humide
t > 20
larve rhabditode
larve strongylode
infestante

Strongyloides stercoralis

Mthode de BAERMANN et LEE

Mthode biologique de concentration des larves des Strongles

selles

tamis + gaze

eau tide

raccord caoutchouc + pince

pipette

larve strongylode

Les larves se collectent dans la pipette en 2 3 heures .

Soutirer 10 ml de liquide; centrifuger lentement; examiner le culot.

Scotch test
Enterobius vermicularis

Taenia saginata

Culture damibes

Etalement de selles
Srum de cheval
coagul

Srum de RINGER
Etalement de selles
Srum de cheval
coagul

Prlvement

multiplication en 24 48 heures 37C

Examen dune prparation microscopique

Recherche et identification dufs dHelminthes et de kystes de Protozoaires
Examen systmatique entre lame et lamelle de la prparation selon le schma suivant

1 parcourir la lamelle lobjectif x 10; chaque lment intressant est

observ puis mesur l' objectif x 40
les ufs dHelminthes sont ainsi identifis.
lidentification des kystes de Protozoaires seffectue ensuite
lobjectif x 100 immersion; elle peut tre facilite par la coloration des structures
nuclaires par la coloration Violet cristal Fuchsine basique .

PROTOZOAIRES

FORMES VEGETATIVES DAMIBES

Taille

Pseudopodes

Mobilit

Cytoplasme

Noyaux

Entamoeba
coli

20 30m

Courts,
larges,lents.
Plusieurs la
fois.

Endoplasme
grossirement
granuleux.
Grosses vacuoles
bourresdinclusions.

Visibles ltat frais.

Chromatine irrgulire.
Caryosome pais, en
gnral excentr

Entamoeba
histolytica

12 25m
jusqu 40

Longs,
hyalins.
Un seul la
fois.

++++

Endoplasme finement
granuleux. Vacuoles
petites et peu
visibles. Hmaties

Difficiles voir ltat

frais.Chromatine
rgulire. Caryosome
central et punctiforme.

Entamoeba
histolytica /
dispar

12 15 m
jusqu 25

Effils,
hyalins,
rapides

+++

Endoplasme finement
granuleux.
Ectoplasme hyalin et
transparent.

Difficiles voir ltat

frais.Chromatine
rgulire. Caryosome
central et punctiforme.

Entamoeba
hartmanni

4 10m

Allongs,
hyalins.

++

Ectoplasme et
endoplasme peu
distincts.
Petites vacuoles.

Difficile voir ltat

frais.Chromatine paisse
en amas. Caryosome de
grande taille, en gnral
central.

Endolimax
nanus

8 10 m
jusqu 15

Arrondis, en
boule, clairs.

Ectoplasme et
endoplasme peu
distincts.
Petites vacuoles.

Non visibles ltat

frais. Caryosome de
grande taille, ovalaire,
excentr.

Iodamoeba
butschlii

8 15 m

Longs, en
doigt de gant,
rfringents.

Endoplasme et
ectoplasme peu
diffrencis.
Vacuoles +++
Inclusions +++

Non visible si vivante;

visible si morte.
Gras caryosome central,
arrondi, entour de
granules.

KYSTES DAMIBES
Taille

Forme

Cytoplasme

Cristallodes

Noyaux

Entamoeba
coli

15 20 m

Arrondie
Ovalaire

Clair, hyalin,
rfringent
Vacuoles +

Difficiles
voir
Forme
daiguille

18
Chromatine irrgulire
Caryosome pais et
excentr

Entamoeba
histolytica
dispar

12 14 m

Arrondie

Granuleux
Vacuoles ++

Prsence
irrgulire,
Forme de
saucisse

14
Chromatine rgulire
Caryosome central et
punctiforme

Entamoeba
hartmanni

3 10m

Arrondie

Vacuoles +++

Prsence
irrgulire,
Trapus,
Forme de
saucisse

14
Chromatine paaisse
Caryosome de grande
taille

Endolimax
nanus

8 10 m

Ovode
Rectangulaire

Hyalin

Nant

14
Caryosome en tche

Iodamoeba
butschlii

8 15 m

Polymorphe

1 vacuole
iodophile

Nant

14
Caryosome de grande
taille entour dun halo
claur

Rhizopodes
Entamoeba
histolytica

Entamoeba
hartmani

Entamoeba
coli

Endolimax nanus

Iodamoeba butsclii

Flagells
Giardia intestinalis

Chilomastix mesnilii

Autres PROTOZOAIRES parasites de lappareil digestif

Rhizopodes:
- Amibes
- Blastocystis hominis

Coccidies:

Cryptosporidies

Cyclospora

coloration dHenriksen Pohlenz

Isospora belli

( Microsporidies )
coloration de Weber

Sarcocystis hominis

Coloration des Cryptosporidies

Technique
dHENRIKSEN et POHLENZ

- Etaler sur une lame une goutte de selles liquides ou de culot de concentration
- Fixer au Mthanol 5 mn puis scher
- Colorer par la Fuchsine phnique 1 heure
- Rincer leau du robinet
- Diffrencier par H2SO4 2% 10 20 secondes
- Rincer leau du robinet
- Contre-colorer au Vert de Malachite 5% 5 mn
- Rincer leau du robinet puis scher
- Lecture lobjectif x 100

Les Cryptosporidies prennent une teinte qui varie du rose ple au rouge vermillon ,
alors que les levures se colorent en vert.

Cryptosporidium sp

Cryptosporidium sp

Isospora belli

HELMINTHES

Trmatodes
Schistosoma
mansoni

Schistosoma
intercalatum

Schistosoma
japonicum

(schistosomes)

Trmatodes
(douves)
Grande Douve Fasciola hpatica

Petite Douve Dicrocoelium dendriticum

( segmente )

( embryonne)

Douve de Chine Clonorchis sinensis

Cestodes

Bothriocphale
Diphyllobothrium latum

Tnia
Taenia saginata, T. solium

Hymenolepis
nana

Hymenolepis
diminuta

Taenia saginata

Ver entier : 2 10 m

Segment mr
limin isolment

Nmatodes

Crudits
Mains sales

Eau

Ascaris
Ascaris lumbricoides
typique

Trichocphale
Trichuris trichiura

atypique

Nmatodes

Ankylostome
Ancylostoma duodenale
Necator americanus

Oxyure
Enterobius vermicularis
Dipylidium caninum

Ascaris lumbricodes

femelle

3 5 cm

Trichuris trichiura

mle

Artfacts

SPORES VEGETALES
Pouvant tre confondues avec des kystes ou des ufs

SPORES VEGETALES
Pouvant tre confondues avec les ufs dAscaris

Pollen dartichaut

SPORES de CHAMPIGNONS
Pouvant tre confondues avec des kystes ou des ufs

Spore de morille

Spores de bolet de pin

Spores de truffe

CRISTAUX

Charcot Leyden

Acides gras
Oxalate de calcium

ARTEFACTS DIVERS

Cellule amidon

Poil vgtal

Cellules palissadiques
de lgumineuses

uf dacarien

Spire vaisseau du bois

CHAMPIGNONS

levures

arthrospores

Autres prlvements

Urines
- Schistosoma haematobium 150m
- peron terminal court dans laxe de luf
- ple oppos lperon arrondi
(parfois prsents dans les selles indpendamment de
toute souillure par les urines)

- Trichomonas vaginalis

Prlvement vaginal
- Trichomonas vaginalis

30m

forme vgtative

Tubage gastroduodnal
- Giardia intestinalis (forme vgtative)
- Strongylodes stercoralis (larves)
- Douves hpatobiliaires (ufs)
- Schistosoma japonicum (ufs)

LBA ou crachats

- Paragonimus westermani (ufs)

- 100 m
- opercule aplati rompant le contour ovode
- Scolex invagins lors de la rupture dun kyste hydatique pulmonaire

- Strongylodes stercoralis (larves)

Muscle
- larves de Trichinella spiralis

Coloration des Microsporidies

Technique de WEBER

- Raliser un frottis trs mince sur 1 cm2 avec 10 l de selle liquide, scher
- Fixer au Mthanol 5 mn puis scher
- Colorer au WEBER 90 mn
- Dcolorer dans lalcool actique 10 secondes
- Rincer rapidement dans lalcool 90
- Dshydrater successivement 1 mn par alcool 95, alcool absolu, xylne
- Montage au Depex

Microsporidies

Microsporidies

L B A : Pneumocystis carinii

L B A : Pneumocystis carinii