INSULINA HUMANA

RECOMBINANTE

QUE ES LA INSULINA?

La insulina es una protena con

actividad hormonal que regula los
niveles de glucosa en la sangre,
aunque tambin participa en la
regulacin de otros procesos
fisiolgicos como la utilizacin de
algunos nutrientes, estimulacin de
la sntesis de glucgeno,
aminocidos, protenas y consumo
de lpidos.

El ADN recombinante es una

molcula de ADN artificial
formada de manera deliberada
in vitro por la unin de
secuencias de ADN provenientes
de dos organismos distintos.
La insulina humana
recombinante se ha expresado en
diversos organismos, incluyendo
bacterias, levadura, hongos,
clulas y rganos de animales y
plantas transgnicas.

HISTORIA

En Mxico, se ha calculado que su

consumo en 1989 fue de 56 kg y para el
ao 2000 fueron requeridos entre 81 y
100 kg de la hormona.
Hasta 1982 toda la insulina utilizada para
el tratamiento de la diabetes era extrada
de pncreas de porcino y bovino, sin
embargo, en algunos individuos provoca
una respuesta inmune. Adems, la
disponibilidad de pncreas de los
animales mencionados es limitada.

Sir Frederick Grant Banting

descubri la insulina en el ao
de 1921 gracias a unos
experimentos que haba
realizado, teniendo como
antecedentes los trabajos de
Shafer y otros quienes haban
observado que la diabetes se
ocasionaba por la carencia de
insulina ya que suponan que
est controlaba el metabolismo
del azcar en la sangre y su
eliminacin por la orina.

Charles Best ayudo a Banting a

aislar la protena, despus ligaron
el conducto pancretico de varios
perros y obtuvieron un extracto
de pncreas libre de tripsina.
Despus, provocaron una diabetes
experimental en otros perros y,
una vez desarrollada la
enfermedad, comprobaron que la
administracin del extracto de
pncreas de los primeros reduca
o anulaba la glucosuria de los
segundos con esto haban
descubierto por fin la insulina.

La produccin de insulina humana en E. coli a partir de 1980 y su

aprobacin para uso clnico en 1982 revolucionaron la biotecnologa.
La insulina es el primer caso de protena producida por ingeniera
gentica, esto fue posible por el desarrollo de tcnicas que permitieron
transferir informacin gentica de un organismo a otro y expresar esa
informacin en el organismo husped.
La primera protena recombinante aprobada como medicamento fue
justamente la insulina, en 1982, para el tratamiento de pacientes con
diabetes mellitus. Hasta ese entonces los pacientes deban inyectarse
insulina extrada del pncreas de vacas o cerdos. Despus de la
comercializacin de la insulina por la compaa Eli Lilly en Estados
Unidos, se han desarrollado distintos mecanismos de penetracin de la
insulina al organismo, de modo de procurar una mejor calidad de vida a
quienes necesitan del suministro exgeno de la misma, evitando su
introduccin al organismo por inyeccin.

USOS CLNICOS

Diabetes tipo 1: condicin en la

que el cuerpo no genera insulina y,
por lo tanto, no puede controlar la
cantidad de azcar en la sangre
Diabetes tipo 2: condicin en la
que el azcar en sangre es
demasiado alta porque el cuerpo
no produce ni usa insulina
normalmente

FUNCINES
o
o

o
o
o

Estmulo de la captacin de glucosa

Estmulo de la sntesis de glucgeno e inhibicin de su
degradacin en hgado y msculo.
Estmulo de la gluclisis.
Inhibicin de la gluconeognesis heptica.
Estmulo de la captacin y almacenamiento de grasas
por el tejido adiposo.
Inhibicin de la liplisis en tejido adiposo.

PRODUCCIN

Existen dos rutas para la obtencin de insulina

humana utilizando microorganismos
modificados por ingeniera gentica. Una de
ellas, consiste en producir por separado ambas
cadenas para, posteriormente, asociarlas
qumicamente. La otra se basa en la produccin
de proinsulina que es procesada hasta insulina
madura mediante mtodos enzimticos.

Corte del ADN circular del plsmido con enzimas

de restriccin, para generar extremos cohesivos.
Corte del ADN que queremos multiplicar. Se debe
asegurar que los extremos del plsmido y los del
ADN a insertar sean complementarios y puedan
unirse.
Unin del gen que queremos introducir (inserto)
por medio de la enzima ADN-ligasa y luego
introducimos el plsmido con inserto en bacterias.
Seleccionamos las bacterias que hayan introducido
el plsmido con la ayuda de antibiticos. Dado que
los plsmidos contienen un gen de resistencia a
antibitico, al exponer las bacterias a ese
antibitico, slo las que hayan incorporado el
plsmido sobrevivirn, mientras que las que no lo
tengan morirn.

Huspedes de expresin microbiano E. coli

Ventajas
Gran cantidad de vectores a usar
Altsima eficiencia de transformacin
Fermentaciones muy bien conocidas
Recuperacin y lisis celular muy sencilla
Desventajas
Problemas de contaminaciones con pirgenos
A veces baja expresin
No glicosila las protenas
Protenas no se exportan

Tcnicas involucradas

PCR: Esta tcnica se fundamenta en

la propiedad natural de los ADN
polimerasas para replicar hebras de
ADN, para lo cual se emplean ciclos
de altas y bajas temperaturas
alternadas para separar las hebras de
ADN recin formadas entre s tras
cada fase de replicacin y, a
continuacin, dejar que las hebras de
ADN vuelvan a unirse para poder
duplicarlas nuevamente.

GENERACIN DE SONDAS: Son

fragmentos de ADN o ARN de simple
cadena complementarias a la regin de
ADN o ARN que queremos encontrar.
Contienen alguna "marca" que permite
revelar su unin a la secuencia elegida
y de esa manera revela presencia de la
regin buscada. pueden ser marcadas
durante su sntesis utilizando
nucletidos marcados con istopos
radiactivos. La sonda navega por el
interior de la clula hasta encontrar
una secuencia complementaria a ella.
Una vez que esto ocurra se formar
una doble cadena que permitir
detectar la presencia de esta secuencia.

ELECTROFORESIS EN GEL: nos

permite saber la carga que poseen
los polipptidos, y separar los
diferentes polipeptidos
resultantes de las variaciones del
experimento del ADN
recombinante. Al poner la mezcla
de molculas y aplicar un campo
elctrico, stas se movern y
debern ir pasando por la malla
del gel de manera las ms
pequeas avanzarn ms y las
ms grandes quedarn cerca del
lugar de partida.

BIBLIOGRAFA
o

http://www.scielo.org.co/pdf/rfmun/v53n4/v53n4a05.pdf

http://www.ejournal.unam.mx/cns/no34/CNS03408.pdf

http://www.redalyc.org/pdf/1812/181220509063.pdf

http://
www.facmed.unam.mx/bmnd/gi_2k8/prods/PRODS/Insu
lina%20humana%20is%C3%B3fana.htm
http://
www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/pcr.pdf