EXTENSIONES O FROTIS

SANGUNEO

Consiste en recubrir parcialmente un porta con

una gota de sangre, de tal manera que las clulas
de sta se dispongan formando una sola capa de
ellas.

UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES

El estudio de las extensiones sanguneas es

esencial para:
El

anlisis morfolgico de las clulas hemticas

Realizacin del recuento diferencial leucocitario
Distincin de una autntica trombopenia de una
pseudotrombopenia producida por agregados
plaquetarios.
Comprobacin de las alarmas que proporcionan los
autoanalizadores hematolgicos

PARTES DE UNA EXTENSIN

CABEZA
Es

la zona inicial de la extensin.

Es la regin ms gruesa.
En ella se encuentra una mayor proporcin de
linfocitos, y los hemates forman aglomerados (pilas
de monedas).

PARTES DE UNA EXTENSIN

CUERPO
Es

la zona media del frotis.

Su espesor es el apropiado.
En ella existe una adecuada proporcin entre los
distintos tipos de leucocitos.
Contiene la "zona ideal" de observacin, que
corresponde a la porcin que limita con la cola

PARTES DE UNA EXTENSIN

COLA.
Es

la zona final de la extensin.

Suele tener un aspecto redondeado.
Es la regin ms fina.
En ella se encuentra una mayor proporcin de
leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y
adems. los hemates estn deformados y presentan
una tonalidad uniforme.
En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las
plaquetas, sobre todo si son grandes.

BORDES.

Contienen

una mayor proporcin de leucocitos grandes.

Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles
de reconocer por estar deformadas o destruidas

PARTES DE UNA EXTENSIN

COLA.

CARACTERSTICAS DE UNA
BUENA EXTENSIN.
La cabeza ha de estar cerca de uno de los
extremos del porta.
La cola debe estar cercana al otro extremo del
porta, pero sin llegar a l.
El borde de la cola tiene que estar finamente
deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el
nombre de "barbas".
Toda la extensin ha de ser fina y homognea.

DEFECTOS DE UNA EXTENSIN

Excesiva longitud y escaso grosor o escasa

longitud y excesivo grosor:
Inadecuado

tamao de la gota de sangre

Un error en la velocidad
Un fallo en el ngulo de extensin de la misma.

Presencia de escalones o estras

Falta

de uniformidad en el deslizamiento de la gota.

Existencia de abundantes zonas

redondeadas que carecen de sangre
Presencia

de restos de grasa o de suciedad en el porta

Extremo final excesivamente dentado.

REALIZACIN DE UNA
EXTENSIN SANGUNEA

TINCIONES
HEMATOLGICAS

Son un conjunto de procesos que conducen a la

coloracin de las estructuras que componen las
clulas sanguneas
Aumentar el contraste entre esas estructuras y el
medio que las rodea
Permite que las clulas sean visualizadas
microscpicamente con mayor facilidad

TIPOS DE TINCIONES
Pueden clasificarse :
Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas
que se pretende colorear
Vitales
No

vitales

Atendiendo la frecuencia con la que se hacen

dividen en:
Tinciones

tradicionales
Tinciones especiales

TINCIONES VITALES Y NO
VITALES
Las tinciones vitales y supravitales se practican
sobre clulas que estn vivas.
Las Tinciones Vitales

La

introduccin de un colorante en la circulacin de

un organismo vivo.
El verde Jano
El azul de metileno.

Las Tinciones Supravitales

Practicada

proceden

en Clulas aislados del organismo del que

Las Tinciones no Vitales:

Se

realizan sobre clulas muertas

TINCIONES TRADICIONALES Y
ESPECIALES.
Colorantes que derivan de la Anilina. Estos
colorantes se renen en 4 grupos:
Colorantes cidos:

Tienen

afinidad por las estructuras alcalinas de las

clulas
El principal de ellos es la eosina.

Colorantes bsicos:
Tienen

una especial afinidad por las estructuras

cidas de las clulas,
Uno de ellos es el Azul de Metileno.

Colorantes neutros:
son

sales de un cido y de una base coloreados.

Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro.
Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.

Colorantes indiferentes:
Son

los que no tienen afinidad por estructuras cidas

o bsicas.
Son insolubles en el agua
Tien a aquellas sustancias que tienen un poder de
disolucin superior al del lquido empleado para
preparar la solucin colorante.
Uno de ellos es el Sudn III

Tambin

Hay combinaciones de colorantes que dan lugar a

tinciones Polcromas.

Panptica cuando se utilizan sucesivamente

sustancias colorantes neutras
Pancrmica cuando se aplican todas las
sustancias colorantes neutras juntas

ROMANOWSKY:
Fue el primero que tuvo la idea de realizar una
de estas combinaciones.
Constan :
Colorante cido (eosina)
Colorantes bsicos (tiacinas).
Las Tiacinas son el azul de metileno y sus
derivados obtenidos por Desmetilacin
Oxidatiya (colorantes tipo azur).

Las tinciones realizadas con colorantes de tipo

Romanowsky, que ms frecuentemente se
emplean en el diagnstico hematolgico
Wright

Giemsa

DENOMINACIN DE LAS
ESTRUCTURAS COLOREADAS.
Atendiendo a sus apetencias tintoriales. De las
clulas
Estructuras acidfilas u oxifilas:

Fijan

colorantes de naturaleza cida

Si captan la eosina, se dice que son eosinfilas
Adquieren un color rosado.

Estructuras basfllas
Fijan

colorantes de naturaleza alcalina

Adquieren un color azulado

CAUSAS DE ERROR EN LAS

TINCIONES REALIZADAS A
FROTIS SANGUNEOS

Si la tincin es demasiado Rosa

Un

pH bajo del colorante.

Un tiempo de coloracin insuficiente.
Un lavado excesivamente prolongado

Si la tincin es demasiado Azul

Un

grosor excesivo de la extensin

Un pH alto del colorante.
Una coloracin excesivamente prolongada.
Un lavado insuficiente.

Si tras la tincin aparecen artefactos o/y

precipitados en la extensin:
Un

empleo de portaobjetos sucios.

Una falta de filtracin del colorante.
Una coloracin excesivamente prolongada.
Un secado del colorante durante la tincin.
Un lavado insuficiente

TINCIONES
TRADICIONALES

TINCIN GIEMSA
Es una tincin diferencial:
Utilizan azul de metileno y sus productos de
oxidacin (azur A, azur B y azur C) como
colorantes bsicos,
Utiliza eosina como colorante cido
Requiere que la muestra sea fijada previamente
con alcohol metilico

TINCIN DE WRIGHT.
Es una solucin de:
Eosina
Una mezcla de:
Azul

de metileno (del 50 al 75%)

Azur B (del 10 al 25%)

Alcohol Metlico.
No requiere que la muestra sea fijada
previamente con alcohol metilico

TINCIN PANPTICO RPIDO

Este mtodo de tincin diferencial es un sistema

que ana:
La

policroma
la calidad que proporcionan los mtodos clsicos
(Giemsa y Wright)
Rapidez de ejecucin (15 segundos solamente).

Es un mtodo de inmersin

Usa:

Solucin

n 1: Solucin alcohlica de triarilmetano.

Solucin n 2: Solucin tamponada de xanteno.
Solucin n 3: Solucin tamponada de tiazina.
Agua destilada.

Las coloraciones obtenidas en las clulas

sanguneas son similares a las de la tincin de
Wright y Giemsa.

NOTA:
Segn la proporcin de azul de metileno y de
eosina que compongan el colorante tendremos
distintos mtodos de tincin.
Entre ellos, los ms conocidos son:

El

de Giemsa,
El de Wright,
El de Leishman
El pan ptico de Pappenheim

TINCIONES
ESPECIALES

TINCIONES ESPECIALES
Peroxidaza
Sudan Black B
Esteraza Especifica
Esteraza Inespecifica
Fosfataza Alcalina Leucocitaria
Fosfataza Acida
Acido Periodico de Schif
Perls o Azul de Prusia

PEROXIDAZA
Neutrofilos y eosinofilos (mieloperoxidaza)
Monocitos apenas positivos
Lifocitos y hematies nucleados negativos
Se usa para diferenciar las LL de LM
La enzima es sensible a la luz el calor y el
metanol
La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados

SUDAN BLACK B
Detecta los fosfolopidos y los lipidos
intracelulares
Neutrofilos y eosinofilos positivo
Monocitos apenas positivos
Lifocitos negativos
Se usa para diferenciar las LL de LM
Se usa e frotis de sangre periferica y medula osea
frescos
La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados

ESTERASA ESPECIFICA
Permite identifica los granulocitos
Los monocitos y linfocitos son negativo
Reacciona bien en cortes parafinados
Se usa para diferenciar entre el sarcoma
granulocitico y el linfoma de celulas grandes
(histiocitos) de aspecto similar.
Tmb identifica en hematopoyesis extramedular
Identificacion de mastocitos

ESTERASA INESPECIFICA
Identifica monocitos
Negativo en neutrofilos y eosinofilos
Histiocitos, macrofagos, megacariocitos: positivos
Algunos carcinomas de celulas epiteliales son
positivos
Se usa para identificar monocitos en LM y de
histiocitos tisulares
No reacciona en cortes parafinados
Tendria valos en leucemias megacariociticas.

FOSFATASA ALCALINA
LEUCOCITARIA
Tiene actividad en los tejidos hematopoyeticos, en
el citoplasma de los neutrofilos, los osteoblastos,
las celulas endoteliales vasculares, y algunos
linfocitos.
Presente en patologias como:

En

los neutrofilos de pacientes con LMC

Hemoglobiniria paroxistica nocturna
Purpura trombocitopenica idiopatica
Mononucleosis infeccionsa
La sarcoidiosis
La anemia pernisiosa
Sindrome mielodisplasico

FOSFATASA ACIDA

Se encuentra en todas las clulas hematopoyeticas

Mayor actividad en los macrofago y osteoclastos
Identifica leucemia de clulas vellosas

 Acido

Periodico de Schif

Detecta

glucgeno intracelular
La mayora de las clulas hematopoyeticas son PAS
positivas
No sirve para detectar LLA de la LMA
Podra ser til para detectar Eritroleucemia

Perls
El

o Azul de Prusia

hierro celular se dispone en forma de ferritina y

hemosiderina
Permite reconocer el hierro en los hemates
nucleados (Sideroblastos), los histiocitos y los cuerpos
de Pappenheimer eritrocitario.
Se aplica a los cortes y extendidos de medula sea

OTRAS TINCIONES

Azul de toluidina

Verde metilo-pironina

Desoxinucleotidil tranferaza terminal.

ESO ES TODO