UNIVERSIDAD ESTATAL

AMAZNICA
ANALISIS DE LAS
VITAMINAS

INGENERIA
AGROINDUSTRIAL
ANALISIS DE PRODUCTOS
AGROINDUSTRIALES
FERNANDA AILLON
DORITA CATAGA

CRISTIAN
CORREA
JOE SILVA

INTRODUCCION

IMPORTANCIA DEL ANALISIS

Las vitaminas y los alimentos desempean un papel
critico a la hora de determinar las necesidades
nutricionales para el ser humano

En factores importantes valoran la idoneidad

de la dieta para mejorar la nutricin humana
en todo el mundo

Tanto la industria como el consumidor

adquieren mtodo de ensayo fiable para
garantizar la exactitud de los alimentos

LOS MTODOS

LOS METODOS DEL BIOANALISIS

ENSAYOS MICROBIOLGICOS

Entre el tipo de ensayos que podemos encontrar son:

el fundamento, la niacina y el folato

EL FUNDAMENTO

LA NIACINA

LA NIACINA

Es un termino general que

incluye el acido flico
conjugado del poly-glutmico con la actividad
biolgica del acido flico

Hay que tener en cuenta

las diferencias en la
disponibilidad biolgica del
acido flico sinttico
utilizado para el
enriquecimiento de los
alimentos y el folato de los
alimentos

Representan una variada

coleccin de compuestos
que difieren en el estado
de oxidacin de la
estructura de anillo
pteridina

Los folatos son lbiles

frente a la oxidacin, la
luz, las perdidas trmicas
y la lixiviacin cuando se
procesan los alimentos

IMPORTANCIA DEL ANALISIS

La vitamina A

Caractersticas
Es sensible a la luz ultravioleta (UV), al aire, a las altas y bajas temperaturas, humedad
Antes de iniciar con el proceso se le adiciona un antioxidante

Mtodos

Cromatografa lquida de Alta resolucin, considerado el nico mtodo aceptable para proporcionar medidas
exactas de la actividad de esta vitamina en alimentos, a continuacin el mtodo de determinacin de la
vitamina en la leche y leche maternizadas basadas en la leche

El Fundamento

Se saponifica la muestra, extrayendo la vitamina A al disolvente orgnico y se la concentra

Se determinan niveles de todo tanto de trans retinol como de retinol ( retinol = vitamina A)
Por medio de cromatografa sobre una columna de slice

Los Puntos Crticos

Bajo luz artificial atenuada, cuidado con la oxidacin del retinol ( vitamina A mas antioxidante) se aade
exadecano para evitar la destruccin de los componentes de la leche

El Procedimiento

Como antioxidante de aade pirogalol previamente a la saponificacin

LOS CLCULOS
TODO TRANS RETINOL (MG/ ML)= (AT / AST WT DF )/V
DONDE

PROCEDIMIENTO DEL ANLISS DE LA VITAMINA A

MEDIANTE LA CROMATOGRAFA HPLC
PREPARACIN DE LA MUESTRA

AST = REA DEL PICO TODO TRANS RETINOL EN EL

PATRN

Transferir 40 ml de una leche maternizada a una leche comn, en un

matras de 100 ml, adicionamos 10 ml de solucin etanolica de pirogalol
al 2% y saponificamos con KOH etanlico ( 10 % de KOH Y 90 %
etanol) todo esto a temperatura ambiente durante 18 horas
utilizando vasijas de reflujo

WT = PESO DE LA MUESTRA ( MG)

EXTRACCIN DEL DIGERIDO

AT = REA DEL PICO TODO TRANS RETINOL EN LA

MUESTRA

V= VOLUMEN DE LA MUESTRA EN (ML)

DF=FACTOR DE DILUCIN
TODO CIS RETINOL ( MG/ ML) = (AC /ASC WC DF )/V
DONDE
AC = REA DEL PICO TODO CIS RETINOL EN LA
MUESTRA

Transferimos con pipeta 3 ml del digerido a un tubo de centrfuga de

15 ml y aadimos 2 ml de agua, Extraemos con 7 ml de hexano eter
repetimos la extraccin 2 veces con porciones de 7 ml , juntamos los
extractos en un matr aforado de 25 ml, Aadimos 1 ml de disolucin
de hexadecano y que se diluya con hexano, despus transferimos con
una pipeta 15 ml del extracto diluido con un tubo de centrfuga y
evaporamos bajo nitrgeno y disolvemos esto en 0,5 ml de heptano
PARMETROS PARA LA CROMATOGRAFIA

ASC = REA DEL PICO TODO CIS RETINOL EN EL PATRN

Columna ; 15 cm x 4,5 mm empaquetada con slice de 3 mm

WC = PESO DE LA MUESTRA ( MG)

Fase mvil ; Isocrtica , heptano

V= VOLUMEN DE LA MUESTRA EN (ML)

Deteccin; UV, 340 nm

DF=FACTOR DE DILUCIN

Flujo 1 2 ml/ min

RESULTADOS de tiempo de retencin de la vitamina en 4,5 y
5,5 min de Trans retinol y Cis retinol

LA VITAMINA E ( LOS TOCOFEROLES Y LOS TOCOTRIENOLES )

Caractersticas
Se encuentra en los alimentos en forma de 8 compuestos diferentes, estudio revela que la
ingesta de la vitamina e del ser humano solo se centraban en un tipo de vitamina e la
estereoismeras debido a que son compatibles con todos los tipos de metabolismos que
posee el ser humano
Mtodos
Cromatografa HPLC
El Fundamento
Productos alimentarios en general , se saponifica la muestra bajo reflujo, se extrae con
hexano y se inyecta en una columna de cromatografa HPLC de fase normal conectada a un
detector de fluorescencia
Los Puntos Crticos
Expuesta a la Oxidacin, tiene que estar en presencia del antioxidante siempre el pirogalol
con vasija protegida de la luz
El Procedimiento y Clculo

PROCEDIMIENTO PARA EL ANLISIS DE LA VITAMINA E MEDIANTE

LA CROMATOGRAFA HPLC
PREPARACIN DE LA MUESTRA
Aadimos 10 ml de pirogalol al 6 % en etanol, mezclamos con N2, Calentamos a
70 C durante 10 min, despus aadimos 2 ml de disolucin de KOH al 60 % ,
mezclamos y aadimos cloruro de sodio y agua, Extraemos 3 veces con hexano
al 01 % , juntamos extractos de hexano, aadimos despus 0,5 de MgSO4 y
mezclamos, despus procedemos a filtrar y diluimos al final con hexano
La margarina y lso untos de aceites vegetales , aadimos para esto 40 ml de
hexano al 0,1 % a una muestra de 10 g y mezclamos, aadimos 3g de MgSO4 ,
mezclamos y dejamos reposar durante 2 horas, filtramos y diluimos con hexano

PARMETROS PARA LA CROMATOGRAFA

Columna; Hibar RT , Lichorosorb 5m 25,0 cm x 46 mm
Fase mvil ; Isopropanol al 0,9 % en hexano
Flujo; 1 ml/ min
Detector; De fluorescencia
Resultado se obtiene vitamina E despus del reposo de la filtracin y el diluido

VITAMINA C
Caractersticas
La vitamina tanbien llamada cido ascrbico y cido dehidroscrbico es muy sensible al
deterioro por oxidacin, el cual es realizado por el pH alto y por presencia de iones
frricos y cpricos
El cido dehidroascrbico puede transformarse en cido ascrbico por tratamientos de
agentes reductores incluidos del beta mercaptoetanol y el ditiotreinol
Mtodos
Volumtrico y Microfluorimtrico
El Fundamento
Volumtrico
Que se oxide rpidamente por el tinte indicador, si es rosado quiere decir que se puede
convertir a cido ascrbico con un agente reductor conveniente
Microfluorimtrico
Medimos ambos el cido ascrbico y el cido dehidroascrbico que el primero despus de
oxidarse presenta fluorecencia en reacipn con la fenilenodiamina
Procedimiento
Volumtrico
Incluimos agentes quelantes como el cido etilenodiaminotetraactico, deber tomar un
punto rojo de coloracin durante 10 min para ser vlido

Los clculos para mtodo

Volumtrico
mg de cido ascrbico/g o ml de muestra ( C
x V x (DF/ WT))
Donde
C= mg de cido ascrbico /ml de tinte
V= ml de tinte consumidos en la valoracin de
la muestra diluida
DF = Factor de dilucin
WT= Peso de a muestra

Los clculos para mtodo

Microfluorimtrico
Mg de cido ascrbico/g o ml = ( ( A-B ) /( CD )) x S x DF/WT
Donde
A y c = Fluorecencia de la muestra y el
patrn respectivamente
B y D = Fluorecencia de los blancos de la
muestra y el patrn, respectivamente
S= Concentracin del patrn en mg/ml
DF= Factor de Dilucin
WT= Peso de la muestra en g

PROCEDIMIENTO DE ANLISIS DE LA VITAMINA C

VALORACIN CON 2, 6 DICLOROINDOFENOL
PREPARACIN DE LA MUESTRA
Pesamos y extraemos mediante la homogeneizacin de la muestra una disolucin de
cido metafosfrico cido actico , Filtramos el extracto de la muestra y diluimos
aproximadamente hasta una concentracin final de 10 a 100 mg de cido ascrbico /
100 ml
PREPARACIN DEL PATRN
Pesamos 50 mg de cido ascrbico y diluimos 100 ml con disolucin estractamentede
cido metafosfrico cido actico
VALORACIN
Valoramos tres duplicados de muestras del patrn y de las muestras con unas
disolucin de dicloroindofenol hasta un punto final sea un color rosa que persista al
menos 10 min

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO MICROFLUORIMTRICO

PREPARACIN DE LA MUESTRA
Prepar la muestra y extraemos 2 g de Norit lavado a los cidos a 100 ml de cada
disolucin , agitamos enrgicamente y filtramos
PREPARACIN DE LOS BLANCOS
Transferimos 5 ml de cada uno de los filtrados a sendos matraces aforados de 100
ml conteniendo 5ml de disolucin de H3BO3 y NaOAc , dejamos reposar durante
15 min agitando ocacionalmentey los marcamos como blancos de muestra la
formacin de quinaxolina fluorecente nos indica la presencia de vitamina C , con
ello transferimos 2 ml de cada disolucin a sendos t3 tubos
DETERMINACIN DE LA MUESTRA
Transferimos 5ml de cada una de las disoluciones del patrn y la muestra a sendos
matraces aforados de 100 ml que contengan cada uno 5 ml de NaOAc trihidratado
al 50 % y aproximadamente 27 ml de agua, diluimos las muestras y transferimos 2
ml de disolucin del patrn o muestra a cada uno de los conjuntos de tres tubos
para la fluorescencia
FORMACIPON DE LA QUINOXALINA
Aadimos 5 ml de disolucin acuosa de fenilenodiamina (20 mg en 100 ml) a cada
uno de los tubos de la muestra y el blanco , agitamos y dejamos reposar durante
35 min a temperatura ambiente

La Vitamina B1 La Tiamina
Caractersticas

Presente en los alimentos como son tanto de origen animal , presente en los peces de agua
salada, como el atn y en vegetales como las semillas secas

Mtodos

Procedimiento Fluorimtrico del tiocromo

El Fundamento

A continuacin la extraccin e hidrlisis enzimtica de los steres fosfatados de tiamina y de

la purificacin de la cromatografa, basada en la tiamina oxidada en el tricromo

Los Puntos Crticos

El tricromo es muy sensible a la luz, la tiamina es sensible al calor, sensible al pH alcalino las
oxidaciones deben sr llevadas con rapidez y precisin

El Procedimiento

Analisamos la tiamina, el tratamiento enzimtico pueden no ser necesarios con

determinadas matrices, tales como concentrados vitamnicos que contienen tiamina no
fostorilada y otras sustancias que pudiesen intervenir con la determinacin de la vitamina

Los Clculos

EL ANLISOS DE LA TIAMINA MEDIANTE

EL PROCEDIMIENTO DEL TRICROMO

g de tiamina /g =( S SB / Std Stdb )

x C/a x 25 /Vp x Vo /WT )

PREPARACIN DE LA MUESTRA

A= Alcuota tomada , ml

Pesamos la muestra que contenga

aproximadamente 10 a 20 g de tiamina ,
adicionamos HCl , mezclamos y sometemos al
autoclave durante 15 min a 121 C, y dejamos
enfriar a continuacin, Ajustamos el pH a 4,5 y 5,0
con HCl, aadimos la disolucin del enzima e
incube durante 3 horas, a 45 C y 50 C, Enfriada la
muestra procedemos a ajustar pH de 3,5, diluimos
en agua hasta enserar , mezclamos y filtramos,
Sometemos la disolucin patrn de tiamina al
mismo tratamiento enzimtico

25 = volumen final del eluido de la

columna ml

o HIDRLISIS ENZIMTICA

Vp = Volumen pasado a travs de la

columna cromatogrfica ml

o PURIFICACIN DEL EXTRACTO DE LA MUESTRA

Donde
S y SB = Fluorescencia de la muestra y del
blanco de la muestra,
respectivamente
Std Stdb = Fluorescencia del patrn y del
blanco, respectivamente
C= Concentracin del patrn g/ml

Vo = Volumen de dilucin de la muestra

o FORMACIN DEL TRICROMO

GRACIAS