Captura de hbridos para

PVH

Maby Vsquez

Hibrido :
Es el organismo
vivoanimalovegetalprocedente del
cruce de dosorganismospor
lareproduccin
sexualderazas,especiesosubespecie
sdistintas, o de alguna o ms
cualidades diferentes
Esta formado por elementos de distinta
naturaleza

Antigedad..
A partir del anlisis gentico, se ha postulado que en lagenealoga
humana, tambin se habra producido hibridacin con otras especies
homnidas ms antiguas, tales como elHomo neanderthalensis (de un
1% a un 4% de genes neandertales por persona, principalmente en
Europa),y con elHomnido de Denisova(la poblacin local que vive
actualmente enPapa Nueva Guinea, en elSudeste Asitico, le debe
al menos el 3% de su genoma por persona a los Homnidos de
Denisova).Incluso al analizar el porcentaje total deADNdelHomo
neanderthalensisdentro de la poblacin humana actual no africana
(no dentro de un solo individuo actual), este porcentaje aumenta
significativamente a un 20%.

Pruebas de deteccin del VPH

Mtodos de
140 mtodos
deteccin de VPH

Diagnstico
morfolgico

Deteccin
de
protenas
del VPH

Deteccin
de
secuencias
genmicas
del VPH

Alteraciones
citopticas
Estudio
citolgico o
histolgico

Inmunohistoq
umico

Anlisis
cualitativo
del DNA

Castao M, Hurtado G. Test de VPH (captura de hbridos II) en pacientes tratadas con radiofrecuencia. Archivos de Investigacion Materno
Infantil. 2012; 4 (1): 13-21

Pruebas de deteccin del VPH

Enfrentar el ADN con la
cadena complementaria a
la secuencia de ADN que
intentamos detectar

Hibridacin in situ
Sondas complementarias
marcadas con sustancias
radiactivas o con
colorantes

Reaccin en
cadena de
polimerasa (PCR)
Amplificacin multiplica
el nmero de copias de
un segmento de DNA si
est presente en la
muestra.
sensible capaz de
detectar la presencia de
muy pocas copias de
DNA del virus (entre 10 y
100 en cada muestra).

Captura de
hbridos
Sondas de RNA capaces
de detectar varios tipos
de VPH
Hbrido RNA-DNA
Ac especfico contra
hbridos ELISA
Dos sondas : bajo riesgo
Test
y altoHybrid
riesgo Capture

II

BR 6, 11, 42, 43, 44

AR o RI 16, 18, 31, 33,
35, 39, 45, 51, 52, 56, 58,
59, 68

Castao M, Hurtado G. Test de VPH (captura de hbridos II) en pacientes tratadas con radiofrecuencia. Archivos de Investigacion Materno
Infantil. 2012; 4 (1): 13-21

Pruebas de deteccin del VPH

La deteccin y tipificacin de VPH esta
indicada en:

Test de VPH en pacientes tratadas con radiofrecuencia

Clarificacin de los casos con citologa atipia de significado
incierto (ASCUS).

TODA MUJER DE CON

Seguimiento
tratados por lesiones cervicales.
LESIN de
DEpacientes
SOSPECHA,
CITOLOGA CON LESIN
Conducta en mujeres diagnosticadas de LSIL
ATPICA, Y RESULTADO
COLPOSCOPICO DE
SHILLER +

Castao M, Hurtado G. Test de VPH (captura de hbridos II) en pacientes tratadas con radiofrecuencia. Archivos de Investigacion Materno
Infantil. 2012; 4 (1): 13-21

Pruebas de Cribado
MUJERES QUE HAN INICIADO SU ACTIVIDAD SEXUAL
Y CON EDAD COMPRENDIDA ENTRE LOS 25 Y 65
AOS DE EDAD.
ANTES DE LOS 25
AOS
No se realizar ninguna
prueba de cribado
ENTRE LOS 25 Y 30
AOS
Citologa cervical cada 3
aos
Blad A, Saladrigues M, Gimferrer M, Quitllet F, Ortiz D, Piqu X, et al. Gua de cribado del cncer de cuello de tero en Espaa, 2014. Rev
Esp Patol. 2014;47(1):1-43

Pruebas de Cribado
ENTRE LOS 30 Y 65
AOS:
Prueba de VPH cada 5
aos
Co-test cada 5 aos
Citologa cervical cada 3
aos

A PARTIR DE LOS 65
AOS:
Finalizar cribado previo
adecuado y negativo (10
aos) y sin
antecedentes de NIC o
CCU (20 aos)
Blad A, Saladrigues M, Gimferrer M, Quitllet F, Ortiz D, Piqu X, et al. Gua de cribado del cncer de cuello de tero en Espaa, 2014. Rev
Esp Patol. 2014;47(1):1-43

El Virus de Papiloma Humano

Tiene un genoma de aproximadamente
8000 pares de bases
Se aloja en las clulas basales del
epitelio escamoso estratificado y en
las clulas metaplsicas de la unin
cervicouterina

Segn su potencial oncognico se

pueden clasificar

Grupo de bajo riesgo

oncognico
Grupo de alto riesgo

Los subtipos 6,11, 42, 43

y 44
16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56,
58, 65 y 66

Su identificacin puede ser de utilidad para el

manejo clnico

Hibridacin "in situ - FISH

La tcnica permite la localizacin de
secuencias de cido nucleico, ADN, ARN
virales, ARN celular o ADN cromosmico, en
el lugar del tejido en el que se encuentra.
Permitiendo el anlisis de la regulacin temporal y espacial de la
expresin de genes
para identificar secuencias virales
Tambin se
en tejidos y proporcionar
utiliza
informacin sobre los mecanismos
patognicos de las infecciones
viraLes.
el ADN de la muestra no es extrado sino que es detectado
directamente en la clula intacta.

 Parte de un corte de tejido o de material citolgico extendido sobre

un porta (preferiblemente tratado con 3aminopropiltrietoxisilano).
1. El frotis citolgico se trata enzimticamente con:
A.proteinasa K
B. pronasa
C. se calienta en microondas,
con el fin de romper las envolturas celulares y permitir el acceso de la sonda
al ncleo durante la hibridacin (lo que no altera lamorfologa celular).
2. se procede a la desnaturalizacin del ADN cromosmico por calor
(95C) y
. aade una solucin que contiene la sonda con el ADN o ARN marcado con
. A. componentes radioactivos como P32I125S35, H3o
. B. componentes no radioactivos : peroxidasa, biotina o
digoxigenina complementarios a la secuencia genmica que buscamos
. Los mejores resultados se obtienen en tejidos fijados en formol o en
paraformaldehdo, y con menor xito, la hibridacin in situ tambin puede
ser aplicada a tejidos congelados o tras fijacin en alcohol u otros fijadores
coagulantes22.
. La sonda para la deteccin de un fragmento de ARN mediante hibridacin in
situ puede ser generada mediante RT-PCR utilizando determinado cebadores .

Captura de hibridos -prueba de

VPH-CH2
Es : una tecnologa de biologa molecular
Detecta : la presencia de DNA de los 13 tipos de VPH
considerados de alto riesgo oncognico en las clulas del cuello del
tero
A travs de : ensayo de hibridacin de cidos nucleicos en
microplaca que detecta los hbridos formados mediante una
reaccin que emite luz, con la seal amplificada.

Alto valor predictivo negativo

 La prueba de VPH-CH2 contiene una

mezcla de sondas correspondientes a
13 tipos de VPH de alto riesgo: 16,
18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58,
59, y 68.

Su deteccin es de utilidad para el tamizaje

del CCU y aspectos del manejo clnico de las
lesiones.

Es una tecnologa precisa, con una alta

sensibilidad, de alrededor del 90%
Menor especificidad, de alrededor del
93 %.

Hace necesaria la aplicacin de una

segunda prueba de tamizaje Triage
para identificar del grupo de mujeres
que resulten VPH positivas

Aquellas con lesiones precancerosas

o cncer, que debern ser luego
confirmadas histolgicamente
La citologa como prueba de triage ha sido
implementada por pases que ya han introducido la
prueba de VPH-CH2 como tamizaje primario, como por
ejemplo el caso de Mxico

Estudio en la india
Evalu el impacto de tres diferentes mtodos de
tamizaje en la reduccin de la incidencia y
mortalidad por CCU .
En dicho estudio las tasas de incidencia y
mortalidad fueron significativamente mayores
en las mujeres tamizadas con citologa (Pap) o
inspeccin visual con cido actico (IVA) que
en las mujeres tamizadas con la prueba de VPHHC2
El tamizaje mediante la prueba de VPH
contribuy a alcanzar una reduccin de casi
el 50% en la tasa de mortalidad

Recomendaciones de edad y
frecuencia para la prueba de VPH-CH2
Entre 30 y 64 aos
El pico de la prevalencia se ubica
en el grupo de mujeres menores
de 30 aos
La recomendacin de la IARC-OMS
es no tamizar con prueba de VPH a
las mujeres menores de 30 aos
Cada 3 aos en caso de resultado
negativo.

Toma de las muestras para la

prueba de VPH-CH2
Se utiliza :
- Un cepillo especialmente diseado,
- Un pequeo tubo colector que
contiene un medio lquido.
La toma de la muestra es
similar a la del Pap:
- La mujer se recuesta en una
camilla,
- Un profesional de la salud extrae
con el cepillo una muestra de clulas
del cuello del tero.
- Esa muestra se coloca en el tubo, y
es enviada al laboratorio

Almacenamiento y trasporte de las

muestras de la prueba de VPH-CH2
Conservacin de los tubos de
toma de muestras:
Conservar a temperatura
ambiente (15-30 C).
No utilizar despus de la fecha
de caducidad indicada en la
bolsa.

 Se pueden conservar y transportar las

muestras hasta 2 semanas a
temperatura ambiente. El transporte al
laboratorio NO requiere refrigeracin.
En el laboratorio se pueden conservar
hasta 1 semana ms a 4 C, y hasta 3
meses a -20 C.

Resultados de la prueba de VPHCH2

Una
prueba
de
VPH negativa :
significa que no se
ha
identificado
ADN de VPH de
alto riesgo en las
clulas del cuello
uterino.

Una prueba de
VPH positiva:
indica
la
presencia
de
cualquiera de los
13 VPH de alto
riesgo
oncognico en la
mujer. No tipifica

Pautas de seguimiento y tratamiento del

tamizaje basado en la prueba de VPH
Si la prueba de
VPH es negativa:
se recomienda
volver a realizarla
a los 3 aos.

Si la prueba de
VPH es positiva
y la citologa es
normal:
se recomienda
repetir la prueba a
los 12 meses.
Si la prueba de VPH
vuelve a dar positiva:
se recomienda la
realizacin de una
colposcopa, cualquiera

Ventajas del CH-2

Una
mejor
evaluacin
diagnstica
morfolgica cito colpo histolgica
Deteccin de HPV en pacientes con PAPs
anormales o indeterminados (ASCUS) y/o
imgenes colposcpicas no concluyentes.
Falta de correlacin colpo-cito-histolgica.
Lesiones
de
bajo
y
alto
grado
diagnosticadas por citologa y/o histologa
en los que es necesario descartar la
presencia de tipos vrales oncognicos
Control post tratamiento de las lesiones
intraepiteliales.
La deteccin de DNA HPV por Captura
Hbrida puede utilizarse como mtodo de
screening complementando al PAP.

HC2

FISH

Los valores predictivos

positivos
37%
32%
valores predictivos
93%
100% : EvaluarLos
OBJETIVO
la Captura Hbrida 2 (HC2) y la hibridacin
in
negativos
90%
situ100%
fluorescente (FISH) para la deteccin de la neoplasia
Sensibilidad
48%
28%
intraepitelial
cervical 2 o peor (CIN 2 +) en pacientes
con
Especificidad
diagnstico citolgico de lesin intraepitelial escamosa de bajo
grado (LSIL).

Conclusin: Estos datos preliminares sugieren que las pruebas de

pescado puede ser til para determinar qu pacientes con LSIL son ms
propensos a tener CIN 2 + en el seguimiento clnico.

 Gracias