Universidad autnoma de

UnidadNayarit
Acadmica de
Ciencias Qumico
Biolgicas y
Farmacuticas
Unidad de Aprendizaje:
ANLISIS FARMACUTICO
Integrantes:
Castaeda Godnez Jess Antonio
Castro Zambrano Amrica del Carmen
Lpez Alvarado Alejandra
Palomar Armas Luz Mara

25-septiembre-2012

La prueba tiene como objetivo determinar

las alteraciones fisiolgicas de las
membranas oculares de conejos sanos
que se pueden presentar despus de la
aplicacin de la muestra.

Animales:
Seleccionar
seis
conejos
albinos
sanos
que
no
presenten
defectos
o
irritabilidad ocular visible y
que no hayan sido utilizados
en otro prueba de irritabilidad
ocular.

Los
animales
deben
mantenerse en condiciones
optimas a fin de evitar la
presencia
de
material
extrao que pueda causarles
irritacin ocular.

Procedimiento:
Para muestras liquidas
instilar 0.1 ml y para
polvos o semislidos
depositar 100 mg,para
sustancias en forma de
escamas
y
grnulos
compactar tanto como
sea posible sin alterar o
romper la forma de las
partculas.
Mantener
el
parpado
cerrado por un segundo.
Utilizar como testigo el ojo
que permanece sin tratar

Colocar al animal en un
cepo,
sujetar
con
suavidad
pero
firmemente hasta que
permanezca quieto
Separar
cuidadosamente
el parpado inferior hacia
fuera del globo ocular a
manera de formar un
recipiente en donde se
instila la muestra.

Examinar los ojos a las 24

h,48h y 72 h, registrar el
grado de irritacin ocular.

Realizar las lecturas de

las reacciones con una
lupa y lmpara.

Si al efectuar las lecturas se tienen dudas

examinar los ojos aplicando en la cornea
una gota de fluorescena sdica estril al
2.0 % ,eliminar el exceso cloruro de sodio
estril al 0.9 %, las reas daadas se
observan de color amarillo.

Medicin de la Reaccin de
Irritabilidad en los Animales
Se considera una reaccin positiva cuando se
observa alguna de las siguientes alteraciones
en los ojos de los animales.
1.Ulceracin de la crnea,se manifiesta como un

punteado fino
2.Opacidad de la crnea; ligera opacidad del brillo
normal
3.Inflamacin del iris; ligera depresin o arruga o
un ligero enrojecimiento de las vasos
sanguneos circuncorneales
4.Inflamacin de la conjuntiva: inflamacin con

Interpretacin
La prueba se considera satisfactoria si solo uno
de los animales presenta reaccion positiva.
La muestra es irritante si cuatro o ms de los
animales
presentan
reaccin
positiva.La
segunda prueba se considera positiva si tres o
ms de los animales presentan reaccion
positiva, en este caso, la prueba debe repetirse
por tercera vez con otros seis animales ,si en
esta ltima repeticin un animal presenta una
reaccin positiva a muestra se considera
irritante.

PRUEBAS PARA IRRITABILIDAD

CUTNEA

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN

Esta prueba pone de manifiesto las
PIEL
reacciones inflamatorias locales que se
presentan sobre la piel intacta y piel
erosionada
de
conejos
albinos
previamente rasurados despus de la
aplicacin de una sustancia.
Animales. Utilizar seis conejos albinos

sanos, adultos con peso de 2 kg a 3.5

kg.

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN

PIEL
Procedimiento
Un da antes de la prueba; sujetarlos firmemente

en cepos y rasurar el rea dorsal de cada animal

a uno y otro lado de la columna vertebral, de la
regin escapular a la lumbar. Evitar la irritacin
mecnica y retirar el pelo suelto.
El da de la prueba delimitar cuatro reas de 4
cm por lado; en dos de ellas, intercaladas, hacer
una incisin cuidando de no lesionar la dermis o
causar sangrado.
Aplicar en las cuatro reas 0.5 mL o 0.5 g del
producto.

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN

PIEL
Procedimiento
Cuando se trate de polvos, estos pueden

humedecerse para formar una pasta; cubrir

cada rea de aplicacin con un parche de
gasa cuadrado de 2.5 cm de largo y grosor
de dos monocapas. Asegurar los parches
con tela adhesiva y proteger los bordes
para evitar fugas del producto.
Cubrir el tronco de cada animal con
material impermeable para mantener los
parches en su lugar y retardar la
evaporacin.

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN PIEL

Procedimiento
A las 24 y 72 h de exposicin, retirar los parches y

evaluar las reacciones resultantes de acuerdo con

la tabla 0515.1. Sumar los valores para eritema y
formacin de escaras, as como para la formacin
de edema a las 24 y 72 h tanto para piel intacta,
como para piel erosionada (cuatro valores por cada
una).
Los ocho valores se dividen entre cuatro para dar
el valor de irritacin. (Tabla 0515.2). El valor
registrado para cada lectura es el valor promedio
de los seis animales de prueba.
Con base en el valor obtenido de irritacin, las
muestras se clasifican en alguna de las categoras
enlistadas en las Tablas 0515.3 y 0515.4.

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN PIEL

Tablas
Tabla 0515.1
Reaccin cutnea
Valor
Eritema y formacin de
No eritema
0
Eritema muy ligero (apenas
1
escara
perceptibles)
Eritema bien definido
2
Eritema de moderado
3
Eritema severo a formacin ligera
4
de escaras (heridas en
profundidad)
Formacin de edema
No edema
0
Edema muy ligero (apenas
1
perceptibles)
Edema bien definido (bordes del
2
rea conspicuos por elevacin
definida)
Edema moderado (elevacin de
3
aproximadamente 1 mm)
Edema severo (elevacin mayor de
4
1 mm y extendindose mas all del
rea de exposicin)

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN PIEL

Tabla 0515.2. Ejemplo de la obtencin del valor de irritacin de
una muestra en prueba
Reaccin cutnea
Tiempo de Valor
exposicin
(h)
Eritema y formacin Piel intacta
24
2
de escara
Piel intacta
72
1
Piel erosionada
24
3
Piel erosionada
72
2
Subtotal
Formacin de edema Piel intacta
Piel intacta
Piel erosionada
Piel erosionada
Subtotal
Total
As, el grado de irritacin es 12/4=3

8
24
72
24
72

0
1
1
2
4
12

MGA 0515. IRRITABILIDAD EN PIEL

Tabla 0515.3. Interpretacin de
resultados
Valor Interpretacin
Piel
0
No irritante
intacta
0,9
1
Ligeramente
1,9
irritante.
Requiere
medidas de
proteccin
durante su uso.
2 4 Muy irritante
(evitar su uso)
Piel
0
No txico para
erosionad
0,9
los
a
componentes
de la piel
erosionada.
1
Ligeramente
1,9
txico. Requiere
medidas de
proteccin
durante su uso.
2 4 Muy txico
(evitar su uso)

Tabla 0515.4. Reacciones mixtas.

Piel
Piel
Interpretacin
intact erosiona
a
da
0 0,9 0 0,9
No irritante
1 1,9 No irritante

Para piel intacta puede ser inocuo

24

Para piel erosionada se requieren

medidas de proteccin durante su
uso.
No irritante para piel intacta
Evitar el contacto con la piel

1 1,9

0 0,9

Puede ser inocuo para piel intacta y

erosionada. Se requieren medidas
de proteccin durante su uso.

1 1,9

Puede ser inocuo para piel intacta.

Se requieren medidas de
proteccin durante su uso.
Evitar su uso sobre piel erosionada.

24

24

Muy irritante para piel intacta y

para piel erosionada. Evitar su uso

VALORACIN DE INSULINA

VALORACIN DE INSULINA

La evidencia ms notable de la

actividad de la
insulina es la disminucin
repentina de la glucosa sangunea.

VALORACIN DE INSULINA
Mtodo para determinacin de glucosa en
sangre de conejo
1. Solucin de referencia (SRef)
Disolver la cantidad adecuada de Sref de
insulina en una solucin acuosa
de fenol o cresol.
Debe contener 40 unidades de insulina por
mililitro.
Conservar en refrigeracin sin llegar a la
congelacin, permanece estable 6 meses.

VALORACIN DE INSULINA
2. Diluciones de la solucin de referencia.
D. de Referencia 1 = 1,0 u/mL
D. de Referencia 2 = 2,0 u/mL
3. Dilucin de la muestra.
En base a la potencia terica:
D. Solucin 1 = 1,0 u/mL
D. Solucin 2 = 2,0 u/mL
En caso de insulina neutra inyectable, ajustar el pH de la muestra entre
2,5 y 3,5 antes de hacer la
dilucin.

VALORACIN DE INSULINA
4. Volumen de diluciones para administracin
Usualmente vara entre 0,3 mL y 0,5 mL para cada
animal de
prueba.
El volumen de la dilucin de referencia deber ser el mismo que de la solucin a
probar.

5. Animales e prueba.
Conejos de un solo sexo
> 1,8 Kg.
NO usar hembras gestantes
Mantenidos con dieta adecuada y acceso a agua todos los das excepto durante la
prueba.

VALORACIN DE INSULINA
6. Procedimiento.
4 Grupos iguales
NO menos de 6 conejos por grupo
Mantener a los animales en ayuno de 12 a 14 h antes de la

prueba,
privar a los conejos de todo alimento y agua durante la
prueba, hasta despus de colectar la ltima muestra de
sangre.
Inyectar por va subcutnea, efectuando una segunda

inyeccin al da siguiente, o a ms tardar una semana

despus de la primera administracin.

VALORACIN DE INSULINA
Grupo
Primera
Segunda
Diluciones
de la
solucin de
inyeccin
inyeccin
referencia
Solucin 1
D. de 1Referencia DRef
1 = 21,0 u/mL
D. de Referencia 2 = 2,0 u/mL
2

DRef 1

Solucin 2

3. Dilucin
de
la
muestra.
3
Solucin 2
DRef 1
En base a la potencia terica:
D. Solucin 1 = 1,0 u/mL
4
Solucin 1
DRef 2
D. Solucin 2 = 2,0 u/mL

VALORACIN DE INSULINA
CLCULOS.
Grupo

Diferencia

Respuesta
individual

Respuesta total

D.Ref 2 Solucin 1

Y1

T1

Solucin 2 D.Ref 1

Y2

T2

Solucin 2 D.Ref 1

Y3

T3

D.Ref 2 Solucin 1

Y4

T4

VALORACIN DE INSULINA
1
Da
Conej
o

Da

Da

Da

Preparacin

Conej
o

Preparacin

Conej
o

Preparacin

Conej
o

Preparacin

S2 U1

S1 U2

U2 S1

U1 S2

65

72

112

104

13

118

144

19

105

91

116

160

126

112

14

119

149

20

83

67

73

72

62

58

15

42

51

21

125

67

47

93

10

86

63

16

64

107

22

56

45

88

113

11

52

53

17

93

117

23

92

84

63

71

12

110

113

18

73

128

24

101

56

S2 - U1
U = D.Ref

S1 - U 2
S = muestra

U2 - S1

U1 -S2

VALORACIN DE INSULINA
1
Conejo Diferencia
S2 - U 1

Respuesta
Ind. (Y)

65 - 72

-7

116 - 160

-44

73 - 72

47 93

-46

88 - 113

-25

63 71

-8

Y1 = (-130) +1= -129

Y2 = -187

Y3 = -45

Y4 = -152

VALORACIN DE INSULINA
Cuando el No. de conejos utilizados durante la

prueba es igual en cada grupo, calcular Ta y Tb

Ta = -T1 + T2 + T3 -T4
Tb = T1 + T2 + T3 +T4
Donde

T1, T2, T3

T4

corresponde a la respuesta total.

Ta = -(-129)+(-187)+(-45)-(-152) = 49
Tb = -129+(-187)+(-45)+(-152) = -513

VALORACIN DE INSULINA
El logaritmo de la potencia relativa de las

soluciones de la prueba es = M
CLCULOS.
M= 0,301 Ta/Tb
0,301(49/-513)
0,301(0.095516)
M= 0,028750

La potencia de la muestra en unidades por

mililitro es igual al antilogaritmo (log R+M)

:
R= Vs/Vu
Vs = Unidades /mL de Sref
Vu= mL aplicados de la solucin de prueba
Vs = 40 unidades
Vu = 0,5 ml

R= 40/0,5 = 80

VALORACIN DE INSULINA
Clculo de la potencia de la muestra.
Antilog
Antilog
Antilog
Antilog

( log R+M)
(log 80 + (-0,02875)
(1,90308 + (-0,02875)
(1,87433)= 74,87382

Temperatu
ra

como respuesta a la presencia de agentes

pirognicos, principalmente endotoxinas
bacterianas despus de la inoculacin por
va endovenosa de una solucin estril.

Termmetros, sensores,
sondas