FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

EFP INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

MICROBIOLOGIA GENERAL
TEMARIO
Crecimiento Supervivencia y Muerte de
Microorganismos
Esterilizacin y desinfeccin
Agentes antibacterianos.

Blgo. Julio IBAEZ

OJEDA
Docente D.E.N.
jibanezo@hotmail.com
Cel: 976799595 RPM:

CRECIMIENTO BACTERIANO
Aumento (incremento) ordenado en todos los componentes
de un MO, Por lo que, el aumento de tamao que resulta
cuando una clula capta agua, lipidos o polisacridos no es
un aumento verdadero.
La multiplicacin celular es una consecuencia del
crecimiento. En organismos unicelulares (bacterias), la
multiplicacin conduce a un aumento en el nmero de
individuos dando lugar a una poblacin o cultivo.

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MEDICION DEL CRECIMIENTO

Puede medirse por:
A. Concentracin Celular
Nmero de clulas viables por unidad de
volumen de cultivo. Se usa en estudios de
gentica microbiana o en investigaciones de
clulas.

B. Concentracin de la Biomasa
Peso seco de las clulas por
unidad de volumen de cultivo. til
en estudios de bioqumica o
nutricin microbiana.
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CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Log B1 = k (t1-to) = Densidad de Biomasa
Bo
2.3
t1 to = 2.3 Log (N1/No) = Concentracin Celular
K

n = Log N1 Log No
Log 2
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B1 = Biomasa en tiempo 1
Bo = Biomasa en tiempo 0
B = Magnitud de crecimiento en un periodo determinado
n = Numero de generaciones
N1 = Nmero total de bacterias
No = Nmero de bacterias iniciales

Crecimiento Lento = K = 0.02h-1 Cada g. de clulas

produce 0.02 g. De celulas/h
Crecimiento Elevado = K = 4.3 h-1 Cada g. de clula
produce 4.3 g. De celulas/h.
Concentracin Biomasa = Peso seco de clulas/unidad
de volumen de cultivo.
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CICLO CELULAR
Proceso de desarrollo de una bacteria de
forma aislada. A lo largo del ciclo celular,
tiene lugar:
1. Replicacin del material de la bacteria
2. Sntesis de sus componentes celulares
3. Crecimiento para alcanzar un tamao
doble del inicial y
4. Divisin por biparticin de la bacteria
para dar lugar a dos clulas hijas.
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PERIODOS DEL CICLO CELULAR PROCARITICO

1. Fase C ( a la S eucaritica): replicacin del ADN
cromosmico;
2. Fase D ( a G2 + M): se distingue porque su
terminacin coincide con el final de divisin
celular;
3. Fase Innominada ( a la G1 eucaritica): sntesis
activa de ARN y otros elementos citoplasmticos.
La caracterstica del C.C: las fases C y D son
relativamente constantes, y por lo tanto, cuando
disminuye el tiempo de generacin (g), lo hace a
expensas de la fase G1.
Asi en Escherichia coli, C = unos 40 y D = unos 20.
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El tiempo que requiere una clula para

completar su ciclo es muy variable y
depende de factores nutricionales y
genticos. El intervalo que transcurre en la
formacin de dos clulas a partir de una
clula se llama generacin y el tiempo
requerido para esto es el tiempo de
generacin.

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CICLO CELULAR EN FUNCIN DEL TIEMPO DE

GENERACIN
Ejemplo E. coli en distintos tiempos de generacin.
A. Cuando g > C + D
Existe fase "G1" (intervalo que precede a la replicacin). Se
observan periodos diferenciados entre s (de sntesis de ADN
y de divisin celular).
B. Cuando g = C + D
Ya no existe G1, y cada ronda de replicacin comienza
inmediatamente tras la precedente divisin celular (es decir,
cada clula hija recin nacida se embarca inmediatamente
en replicar el cromosoma, y una vez que ha terminado de
replicarlo, la clula inicia la divisin celular).
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C. Cuando g <C+D
Las rondas de replicacin de un ciclo se inician antes
de que haya terminado la divisin celular del anterior
(superposicin parcial entre fases C y D).
D. Cuando g <C
ya no se puede detectar fase D como tal. La sntesis
de ADN es continua durante todo el ciclo. Se
inician rondas de replicacin cromosmica antes de
que haya terminado la anterior. Esto se traduce en
que los cromosomas muestran un tpico patrn de
replicacin dicotmica y en que dichos
cromosomas pasan a cada clula hija ya
embarcados en una nueva ronda de replicacin.
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Una caracterstica del ciclo celular es que,

cuanto ms rico es un medio, y por lo tanto
menor es el tiempo de generacin (g), mayor
es el tamao medio de las clulas. Es decir,
los individuos de una cepa bacteriana que
est en un medio rico son ms grandes que
los individuos de esa misma cepa creciendo
en un medio pobre.

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CURVA DE CRECIMIENTO DE
POBLACIONES
Es la representacin grfica del logaritmo del
nmero de clulas frente al tiempo. La curva
terica
sera
una
recta
pues los
microorganismos
estaran
creciendo
constantemente pero en la prctica la curva
presenta distintas fases:

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FASE DE REZAGO o F. de ADAPTACION (Fase A o

LAG)
Representa a un periodo en el cual las clulas
empobrecidas en metabolitos y enzimas como
resultado de las condiciones desfavorables
producidas al final del cultivo previo, se adaptan al
nuevo ambiente.
FASE B
Se forman enzimas y metabolitos intermedios que se
acumulan hasta alcanzar concentraciones que
permiten que el crecimiento se reinicie. Es de gran
actividad fisiolgica.
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FASE EXPONENCIA (C), SOSTENIDA o LOGARITMICA

Las clulas se encuentran en una fase sostenida, la
velocidad de crecimiento es mayor y constante. La masa
aumenta en forma exponencial hasta que sucede dos cosas:
Que uno o ms nutrientes se agoten
Que se acumulen productos txicos e inhiban el crecimiento
(H2O2).
En ella la velocidad de crecimiento es mxima y el tiempo de
generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias
consumen los nutrientes del medio a velocidad mxima. Esta
fase corresponde a la de infeccin y multiplicacin dentro del
organismo del agente infeccioso. Aumento regular de la
poblacin que se duplica a intervalos regulares de tiempo
(G).
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En MO aerobios el nutrimento que se

vuelve limitante y generalmente el O2. As
cuando la concentracin celular pasa de
aproximadamente 1 x 107 bacterias/ml., la
velocidad decrece al menos que se
incremente el O2 al medio por burbujeo.

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FASE ESTACIONARIA MAXIMA (E)

Ante la acumulacin de productos txicos o agotamiento
de nutrimentos el crecimiento cesa por completo. Sin
embargo, en la mayora de los casos existe un recambio
celular en esta fase, generando una prdida lenta de
clulas por muerte, lo cual es compensado exactamente
por la formacin de nuevas clulas a travs del
crecimiento y divisin.
FASE DE DECLINACION O FASE DE MUERTE
Aquella donde el ndice de muerte supera al de la divisin
celular. Frecuentemente, despus que la mayora de las
clulas han muerto, la velocidad de mortalidad disminuye
en forma drstica de tal manera que un pequeo nmero
de sobrevivientes pueden permitir en el cultivo pro meses
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o aun
aos.

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Tipo de Cuadrado

Area
[cm2]

Volumen
[ml]

Factor
[1/Volumen
]

Cuadrado total

1.00 x 10-2

2.00 x 10-5

5.00 x 104

Cuadrado grande

4.00 x 10-4

8.00 x 10-7

1.25 x 106

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Cuadrado
pequeo

2.50 x 10-5

5.00 x 10-8

2.00 x 107

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DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS:

Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa
de una poblacin bacteriana. Se determina la cantidad
existente de un determinado cido nucleico (generalmente
DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la poblacin.
DETERMINACION DE NITROGENO:
Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa
de una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para
determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una muestra
en relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede
analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-,
NH4+, el nitrgeno proteico mediante absorcin en UV,
Reaccin de Biuret, Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total
mediante la Digestin de Kjeldahl.
INCORPORACION DE PRECURSORES RADIACTIVOS:
Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa
de una poblacin bacteriana. En esta tcnica se adiciona al
medio un compuesto marcado radiactivamente que puede ser
incorporado a la clula, y luego se determina la cantidad de
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marca
incorporada por toda la poblacin.

ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN
ESTERILIZACION:
Eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un
objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que
no pueden contaminarse nuevamente.
SANITIZANTE:
Agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es
seguro para la salud de la poblacin. Slo es aplicable sobre objetos
inanimados.
DESINFECTANTE:
Agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas
tales como habitaciones.
ANTISEPTICO:
Agente que controla y reduce la presencia de microorganismos
potencialmente patgenos sobre piel y/o mucosas (slo pueden aplicarse
externamente sobre seres vivos).
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AGENTES ANTIBACTERIANOS
Provocan prdida de la viabilidad en los
microorganismos:
Fsicos:
Calor, radiaciones.
Qumicos:
Oxido de etileno, formaldehdo, agentes
oxidantes, soluciones antispticas.
Provocan
una
separacin
de
los
microorganismos de la sustancia lquida:
Filtracin:
Se eliminan los microorganismos presentes en
un fluido.
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AGENTES FSICOS
Rojo incipiente
Accin directa de la llama
Calor Seco

Incineracin
Accin directa de la llama

Accin directa de los

generadores de calor

Estufa de calor seco

Bao Mara hirviente

Calor Hmedo

Accin del agua caliente

Ebullicin directa
Accin del vapor de agua

Radiaciones

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Calentamiento repetido

Autoclave

Ionizantes
Ultravioletas

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EL AUTOCLAVE
Es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y
que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100C. Una
temperatura de 121C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo
de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos
formadores de esporas.
Ventajas del calor hmedo:
Rpido calentamiento y penetracin
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos txicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Econmico.
Desventajas del calor hmedo:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos
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LA ESTUFA DE ESTERILIZACIN
Es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco.
Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave.
La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos
de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin,
mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden
ser esterilizados a ms de 160C.
Ventajas del calor seco:
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de
sustancias viscosas no voltiles.
Desventajas:
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido
a la baja penetracin del calor.
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INCINERACIN
Se utiliza para destruir material descartable contaminado.
ACCIN DIRECTA DE LA LLAMA
Se lleva al rojo el material de metal como hansas,
lancetas, agujas de diseccin.

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RADIACIONES
Su accin depende de: El tipo de radiacin, El tiempo de exposicin y
La dosis.
Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales
para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales
termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc.
Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque
producen alteraciones de los componentes.
Ultravioletas:
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que
forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Son
escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
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AGENTES ANTIMICROBIANOS

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Inhibidores de la Sntesis de la Pared

Penicilinas
Cefalosporinas
Monobactamas
Carbapenemes
Peptdicos
Otros
Alteracin de la permeabilidad de la Membrana Celular
Polienos
Polimixinas
Imidazoles

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Inhibidores de la Sntesis de Acidos Nucleicos

Quinolonas
Ansamicinas
Sulfonamidas
Diaminopirimidinas
Otros.
Inhibidores de la Sntesis de Protenas
Tetraciclinas
Aminoglucsidos
Anfenicoles
Lincosamidas
Macrlidos
Otros.
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