ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

ANLISIS INSTRUMENTAL
PROCEDIMIENTO DE VALIDACIN DE UN MTODO PARA
CUANTIFICAR MERCURIO EN SANGRE POR ESPECTROSCOPA
DE ABSORCIN ATMICA CON DESCOMPOSICIN TRMICA Y
AMALGAMACIN

RESUMEN

El mercurio es un txico ambiental que produce numerosos efectos adversos en la salud

humana y en los ecosistemas naturales. La ingesta excesiva de metilmercurio procedente

del pescado contaminado produce toxicidad neurolgica, reproductiva y cardiovascular.
Para realizar este objeto de estudio los lmites de deteccin y cuantificacin fueron de

0,103 g/L y 0,313 g/L, respectivamente. La sensibilidad analtica encontrada fue de

12080 Abs/ng Hg. La curva de calibracin es lineal entre 0 y 100 g/L. La pendiente
obtenida con adiciones estndar de mercurio est incluida dentro del intervalo de
confianza de la curva de calibracin con patrones acuosos, por tanto no hay efecto matriz.
El mtodo propuesto se considera sensible, robusto, exacto y preciso para biomonitorizar

la concentracin de mercurio en sangre como indicador de riesgo para la salud.

INTRODUCCIN
El mercurio se puede encontrar en tres estados de oxidacin:Hg0(metlico), Hg+(mercurioso) y Hg2+

(mercrico). Las formas mercuriosa y mercrica pueden formar numerosos compuestos inorgnicos y
orgnicos1.El mercurio es un txico ambiental que provoca gran cantidad de efectos adversos tanto en
la salud humana como en los ecosistemas naturales. Este elemento contamina el medio ambiente a
travs de erupciones volcnicas, cementeras, minera, combustin de fsiles entre otras, y a partir de
depsitos creados por emisiones naturales y antropognicas, que nuevamente pasan a la atmsfera
introducindose en los ciclos biolgicos.
La mayor parte de Hg elemental se evapora y permanece en la atmsfera donde reacciona con el

ozono y otros oxidantes para formar compuestos inicos, bastante solubles, que acaban depositndose
en la tierra o en el agua con la lluvia ola nieve. El mercurio, una vez depositado, se transforma en
metilmercurio por la accin de determinadas bacterias sulfato reductoras y se bioacumula en los
organismos acuticos incorporndose en la cadena trfica de alimentos.
Las fuentes de exposicin principales a mercurio en la poblacin general son el consumo de pescado y

otros pro-ductos marinos, las amalgamas dentales y algunas vacunas.

 En la sangre, el mercurio derivado de las sales de mercurio inorgnico se distribuye igualmente

entre las protenas plasmticas y hemates, mientras que el mercurio derivado de los
organomercuriales se fija especialmente en loshemates5, principalmente en los grupos SH de la
hemoglobina. Por tanto, la sangre es un buen marcador biolgico para evaluar la exposicin al
metilmercurio procedente principal-mente de la ingesta de pescado contaminado.
El anlisis de mercurio se ha realizado principalmente mediante espectroscopa de absorcin

atmica con vapor fro con inyeccin de flujo, y ms recientemente, por espectrometra de masas
con fuente de plasma de acoplamiento inductivo. Sin embargo, estos mtodos presentan algunas
limitaciones como la dilucin y la digestin de la muestra.
El objeto del presente trabajo es describir la metodologa a seguir para la validacin de un

mtodo directo desarrollado por el propio laboratorio para la determinacin de mercurio en

sangre por espectroscopa de absorcin atmica con descomposicin trmica y amalgamacin
aplicable a los laboratorios clnicos.

MATERIAL Y MTODOS:
INSTRUMENTACIN

Para el anlisis de mercurio se utiliz un espectrmetro de absorcin atmica con

descomposicin trmica y amalgamacin SMS 100 Perkin Elmer. Se us una celda de 250
mm y una lmpara de mercurio como fuente de alimentacin.

REACTIVOS
Para la construccin de la curva de calibrado se emplearon disoluciones estndares de

mercurio. La calibracin se realiz a partir de una disolucin madre de mercurio, cuyo valor
de referencia es 1 g/L. Las disoluciones patrn se prepararon por diluciones sucesivas de la
disolucin madre con agua bidestilada libre de metales.
Los reactivos qumicos utilizados son de alta pureza .Los reactivos utilizados para la

determinacin de mercurio en sangre fueron los siguientes:

cido ntrico (65%).
Agua destilada exenta de metales.
Antes de la utilizacin del material de vidrio, este se limpi por inmersin en cido ntrico

al 10% durante 24horas. Tras dicho lavado se enjuag el material con agua bidestilada
libre de metales.

MATERIAL DE REFERENCIA

Las muestras de referencia en sangre, cuyos valores de referencia son 1,50y 37,1 g/L,

respectivamente. Este material de referencia se encontraba liofilizado y se reconstituy

mediante la adicin de3 mL de agua bidestilada.

MATERIAL BIOLGICO

La extraccin sangunea se realiz en ayunas a primera horade la manana con mtodo

desechable obtenindose un tubo de sangre anticoagulada. La localizacin de la puncin

venosa se limpi con clorhexidina, un antisptico con funcin bactericida y fungicida.

CURVA DE CALIBRACIN

Hay controversia al realizar la curva si con patrones acuosos o con material de referencia.

Es recomendable el uso de distintas cantidades de material de referencia con matrices

similares a la muestra. Pero el mtodo descrito se utilizo patrones acuosos, teniendo en
cuenta que, tanto la preparacin como la medida de los patrnes acuosos, se realiz en el
momento del anlisis, ya que de lo contrario se produciran prdidas en la concentracin
demercurio al evaporarse con el transcurso del tiempo
.Las concentraciones de la curva de calibracin fueron de 25,50 y 100 g/L. El blanco de la

curva de calibracin se realiz empleando agua bidestilada libre de metales.

ANLISIS POR ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN ATMICA

CON DESCOMPOSICIN TRMICA Y AMALGAMACIN

Condiciones instrumentales empleadas en el anlisis de mercurio.

 Con el fin de conseguir la mayor sensibilidad analtica posible, se utilizaron las siguientes

condiciones:

 Etapa de secado a 400C para evaporar el agua de la muestra. Despues un calentamiento

a 650C en un horno rico en oxgeno para liberar todos los productos de descomposicin,
incluido el mercurio. Son transportados por una corriente de oxgeno ala seccin cataltica
del horno el vapor restante es transportado a la clula de amalgamacin, donde atrapa al
mercurio. En la clula libera vapor de mercurio, el cual se transporta por una corriente de
oxgeno hasta la celda de absorcin, donde se realiz la lectura.

VALIDACIN DEL MTODO ANALITICO

Los parmetros del mtodo analtico se determinaron por medidas de blancos y disoluciones estndar

a diferentes concentraciones. Siguiendo parmetros: lmite dedeteccin y cuantificacin, rango de

linealidad, masa carac-terstica, especificidad y exactitud, recuperacin y estudiode precisin.
Para el lmite de deteccin se analizaron 30 blancos acuosos y se tom como valor del mismo el triple

de la relacin entre la desviacin tpica de las absorbancias de los blancos y la pendiente de la

calibracin acuosa, se realiz una curva de calibracin con patrone sacuosos de 3 puntos, con
concentraciones desde 25 hasta100 g/L.
Para la ausencia de interferencias se emple el mtodo de adiciones estndar sobre varias mezclas de

muestras reales, se realiz una curva de calibracin por dicho metodo, adicionando a un pool de
sangre cantidades demercurio necesarias para alcanzar una concentracin finalde aproximadamente
12,5; 25; 50 y 100 g/L.
La veracidad se expres en trminos de sesgo o inexacti-tud (bias) y se calcul hallando la diferencia

entre la media aritmtica de las concentraciones halladas y el valor de referencia aceptado.

La inexactitud del mtodo se analizaron 2 controles internos con concentraciones crecientes de

mercurio durante 10 realizando todos los das una calibracin y se aplic la frmula:
Inexactitud = [(VR VL)/VR] 100

 Donde VR y VL son el valor de referencia y el valor de laboratorio, respectivamente.

Para el sesgo expresado en trminos de recuperacin se calcul la media terica que

tendra que dardependiendo de la cantidad de estndar anadida y se aplic la frmula

siguiente:

Las concentraciones empleadas para el clculo de larecuperacin fueron de 12,5; 25; 50 y

100 g/L.

RESULTADOS
Los lmites de deteccin y cuantificacin fueron de 0,103 y0,313 g/L, respectivamente.
La relacin entre la absorbancia y la concentracin, fue prxima al 5% (5,80%), por lo que la

calibracin entre 0 y 100 g/L se puede considerar lineal. La recta de regresin pasa por el origen
al estar incluido este valor dentro del intervalo de confianza al 95% del valor de la ordenada en el
origen (b = -0,022- 0,036).
El coeficiente de correlacin al cuadrado de la recta de regresin fue 0,993.
La sensibilidad obtenida fue de 12080 Abs/ng Hg, dentro del intervalo establecido por el

fabricante:8000 - 20000 Abs/ng Hg.

La pendiente de la recta de regresin de las adiciones estndar (0,001962 absL/ g), cuyo

coeficiente de correlacin al cuadrado fue 0,999, est incluida dentro del lmitede confianza al
95% de la pendiente de la regresin dela curva de calibracin realizada con los patrones
acuosos(0,001546---0,002577 absL/ g), por lo que podemos afirmarque no existe efecto matriz y
que se pueden utilizar patronesacuosos para obtener la curva de calibracin.

 Los resultados obtenidos para evaluar la inexactitud .Se hall una recuperacin media de

un 97,36%

Resultados referentes a la repetibilidad

 Presicion Intermedia

DISCUSIN
El mtodo evaluado es lineal en las concentraciones estudiadas, que comprenden desde 0

g/L hasta100 g/L.

Se estableci como lmite aceptable una concentracin total de mercurio en sangre de6,4

g/L12. Por ello, los resultados obtenidos en cuanto a sensibilidad, lmite de deteccin y
lmite de cuantificacin, nos indican que se trata de un mtodo muy sensible incluso para
muestras con concentraciones sanguneas de mercuriomuy bajas.
Es un procedimiento preciso y exacto utilizando mate-rial de referencia as como muestras

biolgicas de sangre.
El mtodo evaluado es eficaz para el anlisis de mercurio en sangre, lo que resulta de gran

inters para los laboratorios clnicos para biomonitorizar la concentracin de metilmercurio en muestras biolgicas como indicador de riesgo para la salud humana.