The Prion Diseases

Disciplina: Bioqumica Mdica - 2016

Introduo
O que so doenas por prons?
Doenas neurodegenerativas fatais
caracterizadas por alteraes espongiformes,
gliomas astrocticos e perda neuronal decorrente
da deposio de agregados proteicos
insolveis nas clulas nervosas.
Introduo
As doenas por pron so doenas de
conformao da protena.

Figura 1. Estruturas de uma protena.

Protenas Uma viso
geral
Protelise
CONFIGURAO DE UMA PROTENA
Refere-se relao geomtrica entre um
determinado conjunto de tomos.
A interveno da configurao requer a ruptura
das ligaes covalentes.

Desnaturao
CONFORMAO DE UMA PROTENA
Refere-se relao espacial de cada tomo em
uma molcula.
A interveno entre os confrmeros ocorre sem
ruptura da ligao covalente.
Protenas Uma viso
geral
ESTRUTURA PRIMRIA: sequncia linear
dos aminocidos unidos por ligaes
peptdicas

ESTRUTURA SECUNDRIA: o dobramento

de segmentos curtos contguos do
polipeptdeo
Protenas Uma viso
geral
ESTRUTURA TERCIRIA: a reunio das
unidades estruturais secundrias em
unidades funcionais maiores

ESTRUTURA QUATERNRIA: o nmero e

os tipos de unidades polipeptdicas de
protenas oligomricas e seus arranjos
espaciais.
Figura 2. Explicao sobre as estruturas primria, secundria, terciria e quaternria de uma protena.
Protenas Uma viso
geral
ESTRUTURA SECUNDRIA

-HLICE
-hliceest presente na
estrutura secundria dos nveis de
organizao das protenas.
Se assemelha a uma escada em
espiral.
A estabilidade de uma alfa-hlice
se origina principalmente das
pontes de hidrognio.
Figura 3. Hlice-alfa
Protenas Uma viso
geral
Folhas Beta
Ao contrrio da estrutura compacta da alfa-hlice, o
esqueleto peptdico da folha beta altamente estendido.
Regies vizinhas da cadeia polipeptdica associam-se por
meio de ligaes de hidrognio resultando em uma
estrutura achatada e rgida.
Paralelas: mesma orientao das cadeias (terminal amino
e carboxlico)
Antiparalelas: orientao oposta das cadeias (terminal
amino e carboxlico)

Figura4. Folha-beta
Protenas Uma viso
geral
ESTRUTURA TERCIRIA

O
arranjotridimensional(ouconformao
) dos tomos da protena na estrutura
terciria de extrema importncia porque
geralmente coincide com a
chamadaestrutura nativa, a estrutura
que confere protenauma funo
biolgica especfica.
1. Num tubo de ensaio
adicionaramureia enzima
RNaseA. A ureia umagente
desnaturanteque promove a
destruio daestrutura
nativadasprotenas.

2. Aps verificarem a
desnaturao daprotena, o
que se manifestou pela perda
total de atividade biolgica,
retiraram a ureia de modo a
restaurarem o ambiente
qumico para condies
intracelulares normais.

3. Observaram ento
umrefoldingespontneoda
protena acompanhado Figura 5. Experimento de desnaturao proteica.
pelarecuperao total da
sua atividade enzimtica.
Toda a informao necessria para encontrar o estado nativo est
contida na sequncia de aminocidos que constitui a estrutura
primria da protena.

Comoa funo da protena depende estritamente da sua

estrutura nativabasta que esta ltima exiba uma pequena falha
para que a protena deixe de ser capaz de executar a sua funo
biolgica.
PRONS
A comunidade cientfica busca intensamente respostas a
cerca da patogenia das doenas por prons.
PRONS
As doenas por prons conhecidas, todas
fatais, so as vezes referidas como
encefalopatias espongiformes.

Essas doenas podem afetar diversos

animais, inclusive no homem.
PRONS
As doenas por prons podem se manifestar:
Distrbios infecciosos
Distrbios genticos
Distrbios espordicos
 Perda severa de coordenao e
Ovelhas
Scrapie tendncia a arrancar os prprios
e cabras
pelos/l
Encefalopatia
espongiforme
Perda de coordenao e estado de
bovina Bovinos
extrema apreenso
(doena da vaca
louca)

Figura 6. Animal apresentando Scrapie

Figura 7. Epidemia de
encefalopatia espongiforme bovina
na Gr-Bretanha
 Kur Perda de coordenao e Rituais de canibalismo na
Humanos
u demncia Papua Nova Guin

Os indivduos
provavelmente adquiriram
Kuru pelo ritual de
canibalismo: a tribo Forbe
honrava seus mortos
comendo seus crebros.

Figura 8. Papua Nova-Guin.

Criana portadora de kuru
no colo do pai o abandono
do canibalismo ritual a
partir de meados dos anos
50 levou reduo
progressiva do nmero de
casos da doena entre os
Figura 9. Criana com Kuro e grfico de incidncia. Fore, como mostra o
Fonte: Cincia Hoje v o l . 3 3 n 1 9 4
grfico.
 Espordico (1: milho)
Sndrome de
Demncia, perda de 10-15% hereditrio
Creutzfeldt- Humanos
coordenao Forma infecciosa (80
Jakob
casos)

As formas iatrognicas se deram, provavelmente

por:
Transplante de crnea
Implantes de dura-mter ou eletrodos no crebro
Instrumentos cirrgicos contaminados
Injeo de hormnio de crescimento derivado de pituitrias
humanas (antes da criao do hormnio recombinante)
 Sndrome de
Gerstmann- Perda de coordenao
Humanos Mutao no gene da PrP
straussler- seguida de demncia
scheinker

Problemas para dormir e

Insnia familiar distrbios do sistema
Humanos Mutao no gene da PrP
fatal nervoso autnomo, seguido
de insnia e demncia

Figura 10. Documentrio exibido na Discovery

Channel que conta a histria de uma famlia
com Insnia Familiar Fatal.
Distrbios Infecciosos
DOGMA: a transmisso de doenas
infecciosas requer material gentico,
composto de cido nucleico (DNA ou RNA),
para estabelecer a infeco no hospedeiro.
Vrus
Bactrias

Figura 11. Material gentico de vrus e bactrias.

Mas ento como doenas
causadas por mudanas
conformacionais em
protenas podem ser
infecciosas?
Definindo a ausncia de material
gentico em doenas por prons
Agente transmissor mostrava extrema
resistncia a todos os mtodos conhecidos
de destruio de vrus e bactrias.

Tikvah Alper: o agente

causador da scrapie pode no
ter cido nucleico.

Figura 12. Grfico do potencial

infeccioso pela sobrevivncia
aps radiao ultravioleta
Definindo a ausncia de material
gentico em doenas por prons
Stanley Prusiner: a transmisso devia-se a
uma partcula composta apenas por
protena e deram a ela o nome pron.

Procedimentos de desnaturao ou degradao

proteica reduziram a capacidade de infectar novos
hospedeiros.

Os prons da Scrapie continham

apenas uma protena, a PRION
PROTEIN - PrP

Figura 13. Stanley Prusiner.

 Onde as instrues
especficas para a
sequncia de aminocidos
da PrP estariam?
Definindo onde residia a
instruo para a sntese de PrP
Stanley Prusiner: identificao de 15
aminocidos da sequncia final da Prp
permitiu descobrir que o gene que codifica
a PrP estava presente em clulas de
hamster, camundongos e humanos.

PrP era produzida, na maioria das vezes,

sem levar esses mamferos a desenvolver a
doena.
PrP e suas formas
Concluiu-se que a PrP era sintetizada em duas
formas no organismo, uma normal e uma
patognica.

Protena normal: celular PrP (PrPc)

Protena patognica: scrapie PrP (PrPsc)

PrP celular abundante no crebro e encontrada

em outros rgos (membrana plasmtica).
codificada por um gene situado no cromossomo 20
humano.
 Mas como uma protena
normal do organismo pode
causar ou transmitir uma
doena?
A resposta est em sua conformao a distribuio espacial dos
aminocidos que a compem. A sequncia de aminocidos a mesma
nas formas normal e patognica: a diferena est apenas na
conformao da protena.

Figura 14. Na PrP patognica, h mais arranjos do tipo beta (azul) do que hlices alfa (verde)
PrP scrapie
rica em folhas beta
com muitas cadeias
laterais com aminoacil
hidrofbico expostas ao
solvente.
Como as PrPsc se
associam firmemente por
meio de suas regies
hidrofbicas expostas,
as unidades de PrPsc que
se acumulam, coalescem
para formar agregados
insolveis. Figura 15. PrPc e PrPsc estrutura.
PrP e suas formas
A forma patognica tem tendncia
a se agregar, formando partculas
insolveis e muito resistentes a
enzimas proteolticas (que
degradam protenas).

Os agregados insolveis
depositam-se no crebro e, de
forma ainda no esclarecida,
produzem as encefalopatias
espongiformes.
Figura 16. Tecido cerebral com
placas de Scrapie.
Doenas por prons e sua
capacidade de serem herdadas
Gene da Protena PrP
CDON 102

Pacient LEUCINA
e
saudv
el

Paciente
com
PROLINA
Creutzfeldt-
Jakob

Figura 17. Mutao de ponto aplicada mutaes em prons.

Doenas por prons e sua
capacidade de serem herdadas
Mutaes no gene PrP resultam em protenas
mais susceptveis a alterar sua conformao
de maioria alfa-hlice para maioria folha-beta.

Mutaes de insero ou substituio podem

ocasionar a troca de uma aminocido nas
hlices da protena, desestabilizando-as e
facilitando sua reconformao em folhas-beta.
Experimento
Camundongo carregando mutao no gene PrP

Se a presena do gene alterado no animal

transgnico levasse, sozinha, ao
desenvolvimento da doena, e se o tecido
cerebral fosse capaz de causar doena em
outros animais saudveis, haveriam evidncias
slidas que a protena codificada pelo gene
mutante seria a responsvel pela transmisso
da doena.
Figura 18. Experimento de Stanley Prusiner.
Experimento
Quando uma molcula de PrP scrapie entra
em contato com uma molcula PrP celular,
ela induz a protena normal a mudar de
conformao, tornando-a patognica.

Assim, ocorre a proliferao da protena

mutante sem que haja material gentico
envolvido.
Figura 19. Mtodo de proliferao das PrPsc.
O mistrio das cepas
Algumas variantes de prons causavam
sonolncia nos animais, e outras
hiperatividade.

De forma semelhante, algumas levavam

rapidamente doena e outras eram
formas lentas de infeco.
O mistrio das cepas
EXPLICAO:
Os prons podem ser capazes de adotar
mltiplas conformaes.
Variante X conformao altamente eficiente com
curto prazo de incubao.
Variante Y conformao menos eficiente, com
longo prazo de incubao.

A preferncia por diferentes reas do crebro

pode explicar o porqu dos diferentes
sintomas.
Barreira entre espcies
Conceito: o grau de similaridade na
sequncia de aminocidos das protenas
pron interfere na habilidade de haver
infeco entre as espcies.

Figura 20. Encefalopatia espongiforme bovina e sua transmisso para humanos.

Barreira entre espcies
PrP-Syrian Hamster / PrP-Mice: diferem em 16 cdons de 254

SAUDVEL
Inoculao
de
Scrapie Camundongo
(Syrian (PrP- Camundongo+)
Hamster)

Syrian Hamster
(PrP-Syrian Hamster
+) DOENTE

Camundongo
transgnico
(PrP-Syrian
Figura 20. Experimento de quebra de barreiras entre espcies. Hamster +)
Barreira entre espcies
Concluso: a barreira reside na sequncia de
aminocidos da PrP.

Quanto mais a sequncia de uma protena PrP scrapie se

assemelha a sequncia PrP do hospedeiro, mais
provavelmente o hospedeiro ir desenvolver a doena
por pron.

PrP scrapie interagem melhor com PrP celular

homloga. Scrapie Scrapie
Camungond Camungond
o o
Scrapie Scrapie
Hamster Hamster
PrP-Camundongo
PrP-Syrian Hamster
Figura 21. Experimento de interao entre PrPs homlogas.
Barreira entre espcies
Mas como explicar, ento, a epidemia
de doena da vaca louca na
Inglaterra graas aos suplementos
contaminados com carne de cabras?

Chance de Chance de
transmisso transmisso
alta baixa

Seq. PrP Seq. PrP

CABRA VACA HOMEM
Diferem em 7 posies Diferem em mais de 30 posies

Figura 22. Transmisso das doenas por prons depende da similaridade entre sequncia
de aminocidos entre a PrPc e a PrPsc.
Barreira entre espcies
Algumas partes da molcula de PrP so
mais importantes que outras em relao
quebra de barreira entre espcies.

Se a molcula de PrP bovina e a humana

foram semelhantes nessas partes, o risco
de transmisso podem ser mais altos do
que se imagina com a comparao de
aminocidos.
Barreira entre espcies

Protena Hbrida

Camundongo
transgnico

PrP humano
PrP murino

Figura 23. Camundongo transgnico apresentando o gene da PrP humana

flanqueado pelo gene da PrP murina. O produto desse gene uma PrP
hbrida humana/murina.
 Tecido cerebral de
pacientes que
morreram de doenas
ro na? por prons humanas
ha pe
C

Camundongo transgnico Camundongo transgnico

Ficaram doentes muito Ficaram doentes depois dos

mais rpido camundongos com
sequncia flanqueada
Figura 24. Resposta contaminao de camundongos transgnicos de acordo com
a similaridade de segmentos gnicos, e consequentemente, proteicos.

Concluso: a similaridade na regio central do gene que codifica a

PrP deve ser mais crtica que a similaridade entre outros segmentos.
E a lista deve crescer...
Pesquisadores perceberam que
camundongos de idade avanada que
produziam altas quantidades de PrP celular
(normal) desenvolveram doenas
neurodegenerativas e destruio de
msculos e nervos perifricos.

Pode ser uma forma de explicar o

surgimento da Doena de Creutzfeldt-Jacob
espordica.
Evoluo e tratamentos
Em culturas celulares, o PrP scrapie se acumula
dentro dos lisossomos.
No crebro, os lisossomos repletos de PrP scrapie
sofre lise e danifica as clulas.
Com a morte dos neurnios, e a consequente
formao de cavidades no crebro, os prons so
liberados para atacar outras clulas neuronais.

Figura 23. Creutzfeldt-jakob disease Image

(www.primehealthchannel.com/)
Evoluo e tratamentos
Os agregados de PrP so sinais teis de uma infeco
prinica, porm no parecem ser a maior causa das
complicaes da doena.

Por isso, o entendimento da estrutura tridimensional da

PrP scrapie pode levar ao desenvolvimento de terapias.

Esto sendo realizados ensaios de imunoterapia

experimental com anticorpos capazes de deter o
processo de transformao da protena pron celular na
forma patognica.
Figura 24. Imunoterapia no tratamento de doenas por prons.

Os fragmentos de PrP scrapie

se acumulam em placas no
crebro.
Evoluo e tratamentos
Acreditava-se que a protena PrP celular no era essencial para a
sobrevivncia, uma vez que camundongos nocaute no
apresentavam deficincias visveis, entretanto, hoje se sabe que a
PrP celular apresenta diversas funes e o silenciamento do gene
como terapia apresentaria efeitos adversos. Ela est relacionada
com:
Proteo contra danos oxidativos
Alteraes na excitabilidade cerebral
Diferenciao celular
Interao de STI-1 com a PrP celular desencadeia respostas
intracelulares que levam proteo parcial contra a apoptose
Ativao de macrfagos.
Evoluo e tratamentos
No h tratamento recomendado para as doenas prinicas. Para as
adquiridas, preveno essencial

Tem sido proposto o emprego de quinacrina e flupirtina para a DCJ,

principalmente, mas os efeitos so muito discretos e/ou duvidosos

Quinacrina, muito usada para prevenir e tratar a malria, impede a

agregao de prons em culturas de clulas in vitro. Ainda no se sabe se a
quinacrina ter o efeito desejado nos pacientes.

Flupirtina, usada para dores de origem neurolgica. Analgsico no-

opiide com efeito citoprotetor in vitro e in vivo sobre neurnios que foram
induzidos apoptose.

Clorpromazina, medicamento antipsictico usado para tratar a

esquizofrenia, que tambm evita a agregao de prons em culturas de
clulas.
Similaridades com
outras doenas
Doena de Alzheimer;
Mal de Parkinson e
Esclerose Lateral
Amiotrfica
Doena de Alzheimer
Redobramento ou dobramento errneo de outra
protena endgena ao tecido cerebral humano, o
beta-amiloide.

A protena beta-amiloide, produzida pela

clivagem de uma protena maior, sofre uma
transformao conformacional a partir de um
estado solvel, rico em alfa-hlices, para um
estado rico em folhas-beta e propenso
autoagregao.
Figura 27. Comparao entre o tecido cerebral normal e de uma pessoa com a Donea de
Alzheimer. Fonte: (www.intechopen.com)
Mal de Parkinson

Figura 28. Sinais de uma pessoa com Mal de Parkinson.

Esclerose Lateral Amiotrfica
(ELA)

Figura 29. Indivduos conhecidos que apresentam ELA.

Similaridades
Doenas de meia idade idade avanada
Podem ser espordicas ou aparecerem em uma
famlia
Patologia similar:
Degenerao de neurnios
Depsito de protenas em placas no crebro
Crescimento das clulas da glia em resposta ao
dano neuronal

Em nenhuma dessas doenas os glbulos brancos

infiltram o crebro. Se algum vrus estivesse
envolvido na fisiopatologia dessas doenas, seria
certa a reao dos sistema imunolgico.
Obrigado
Referncias Bibliogrficas

Murray; Bender; Botham; Kennelly; Rodwll; Weil; Harper, Bioqumica

Ilustrada, 29 Edio.

THE PRION DESEASES, by Stanley B. Prusiner, Scientific American,

January 1995.

DOENAS POR PRIONS, Cincia Hoje, Junho de 2003.