REGLAJUL GENETIC

In condiii normale, nici o proprietate nu se manifest anarhic i nu dobndete

preponderen nejustificat n economia ansamblului. Genele nu funcioneaz
toate simultan i continuu pentru a determina sinteza tuturor proteinelor
codificate n structura lor, deoarece aceasta ar aduce perturbri grave ale
metabolismului celular.
Diferena dintre genotipul unei celule (potenialul fiziologic total) i fenotipul ei
(suma global a proceselor active la un moment dat) reflect intervenia
mecanismelor de reglare. Selectivitatea exprimrii fenotipice a potenialului
genotipic de sintez a organismelor implic existena unor mecanisme de
reglare fin care s declaneze sau s blocheze sinteza anumitor tipuri de
proteine. Importana capacitii de reglare, a naturii i nivelului biosintezei
proteice este uor de apreciat dac se ine seama de faptul c cele mai multe
proteine celulare au funcii enzimatice implicate n metabolismul energetic, n
sinteza constituenilor celulari i n replicarea materialului genetic
Mecanismele de reglare reprezint deci un sistem de coordonare prin care se face
selecia adecvat, n raport cu mediul, a informaiei genetice care urmeaz a fi
exprimat fenotipic. Mesajul selectat reprezint doar o parte din totalul
informaiei pstrat i transmis ereditar de genom, ceea ce nseamn c exist
molecule semnal care controleaz rata de transcriere a unor molecule specifice
de ARNm (control transcripional). Dup selecia genelor urmeaz transcrierea
informaiei genetice purtat de acestea n vederea sintezelor proteice dup un
program codificat de gene, apoi realizarea cantitativ echilibrat a acestor sinteze
i desfurarea reaciilor ce implic activitatea catalitic a proteinelor sintetizate
(control translaional).
Reglarea activitii genelor, intrarea lor n funciune dup un program
riguros controlat este evident att la procariote ct i la eucariote.
La eucariote, dezvoltarea i diferenierea celular este legat de
transcrierea selectiv a informaiei genetice de la nivel celular.
Intreaga dezvoltare ontogenetic a organismului este o complicat
epigenez n care are loc formarea "de novo" a esuturilor i
organelor, acestea nefiind preformate.
Existena unui program de funcionare a genelor, respectiv a unui
mecanism de reglare a exprimrii lor, este mai uor decelabil la
eucariote. La aceste organisme apar diferenieri celulare specifice ce
nu pot fi explicate dect admind c unele gene funcioneaz
permanent pe cnd altele funcioneaz difereniat, n locuri precise i
n momente specifice ale ontogenezei. Toate celulele unui organism
eucariot, derivnd prin diviziuni mitotice ale celulei-ou, motenesc
acelai numr de cromosomi i deci aceeai informaie genetic. Cu
toate acestea ele sunt difereniate (la om exist aproximativ 100 de
tipuri diferite de celule) att din punct de vedere structural, ct i
funcional. De exemplu, genele care dirijeaz sinteza pigmentului din
iris de la om sunt distribuite n toate celulele corpului, dar nu se
exprim fenotipic dect la nivelul celulelor irisului, n celelalte celule
genele respective sunt permanent represate.
In sinteza proteinelor exist, n principiu, dou tipuri
de control: control adaptativ i control programat.
Controlul adaptativ este dependent de condiiile de
mediu care determin activarea unei anumite pri din
mesajul genetic (nefolosit pn n acel moment) fcnd
s fie sintetizate enzimele necesare celulei n acel
moment i s fie blocat sinteza celor ce nu sunt
necesare n acelai moment.
Controlul programat se afl sub activitatea direct a
determinanilor genetici, fiind indirect influenat de mediu,
conducnd la funcionarea constant a genelor i la
sinteza de proteine n cantitate aproape constant tot
timpul vieii. Controlul adaptativ intr n logica funcionrii
economice, eficiente a sistemelor biologice, iar controlul
programat st la baza diferenierii celulare, mai ales la
eucariote, determinnd o ealonare n timp a sintezei
diferitelor proteine.
 Reglarea exprimrii genelor la procariote
Mecanismele de reglare a activitii genelor au fost cel mai
bine studiate la bacterii, acestea reprezentnd, de altfel,
un model experimental pentru realizarea unor cercetri
variate legate de structura i funciile genelor. In general,
se consider c mecanismele de reglare se exercit la
patru nivele principale, cu sensibilitate diferit. Primul
nivel, cel mai important, este cel al transcrierii genetice,
acesta implicnd decizia blocrii sau sintezei ARNm. Al
doilea nivel, cel mai impresionant, se refer la controlul
traducerii genetice ceea ce asigur producerea n
cantitile necesare i la momentul potrivit a proteinelor.
Un al treilea nivel, considerat ca fiind cel mai sensibil i
mai rapid, asigur modificarea direct a activitii
enzimelor existente la nivelul celulei, influenndu-se n
acest fel desfurarea diferitelor ci metabolice. Ultimul
nivel de reglaj celular este reprezentat de degradarea
proteinelor, proces n urma cruia rezult o parte a
aminoacizilor necesari sintezei altor proteine.
In funcie de mecanismele moleculare i de efectele acestora,
procesele de reglare pot fi grupate n dou mari categorii: reglarea
pozitiv i reglarea negativ. In cazul reglrii pozitive se consider
c exprimarea anumitor gene este stimulat n prezena unei
molecule efector care poate fi o protein, o molecul activator de
dimensiuni mici sau un complex molecular. Acest sistem necesit, n
anumite situaii, prezena AMPc i a proteinei CAP (proteina de
legare a AMPc) care iniiaz transcrierea genetic. In sistemele
reglate negativ exist un inhibitor care mpiedic transcrierea. Acest
inhibitor este represorul ce interacioneaz cu o anumit regiune
plasat n faa genelor reglate. Opusul represorului este inductorul
care este necesar pentru iniierea procesului de transcriere.
Genele la procariote sunt organizate n operoni, de aceea reglarea
activitii unei ci metabolice este nsoit de sinteza (sau blocarea
sintezei) unui set de enzime i proteine accesorii. Aceasta
nseamn fie c se sintetizeaz ntreg setul, fie nu are loc nici o
sintez. Fenomenul a primit denumirea de reglare coordonat i el
rezult din controlul sintezei unei singure molecule de ARNm
policistronic (ce poate ajunge pn la 10.000 nucleotide lungime). In
prezent, se cunosc doar puine exemple de blocare complet a
transcrierii deoarece, chiar i atunci cnd se consider c
transcrierea este n stare oprit, de fapt exist un nivel bazal de
transcriere ce const n unul sau dou evenimente per generaie.
Reglajul negativ Reglajul pozitiv
 Reglarea operonului lac

Cel mai cunoscut exemplu de reglare a activitii genice este cel al operonului lactozei de
la E.coli, elucidarea acestui mecanism de reglare fiind legat de numele cercettorilor
francezi F.Jacob i J.Monod. La E.coli, pentru metabolizarea lactozei sunt necesare
dou enzime: -galactozidaza (cliveaz lactoza la glucoz i galactoz) i galatozid-
permeaza (molecul cru necesar trecerii lactozei prin nveliurile celulare i
acumulrii acesteia n interiorul celulei). Operonul lac este alctuit din trei gene
structurale i o serie de elemente reglatoare. Genele structurale sunt: lac Z (codific
-galactozidaza), lac Y (codific galatozid-permeaza) i lac A (codific tiogalactozid
transacetilaza care, n mod normal, acetileaz lactoza i alte -galactozide cu ajutorul
acetil-CoA). Dei sinteza tiogalactozid transacetilazei este corelat cu sinteza
celorlalte dou tipuri de enzime, aceast enzim nu are o funcie bine stabilit n
cadrul metabolismului celular; ea putnd aciona ca enzim de detoxifiere a
tiogalactozidelor.
Elementele reglatoare sunt reprezentate de: gena lac I (codific represorul), promotorul
(conine situsul de recunoatere a AMPc i situsul de legare al ARN-polimerazei) i
regiunea operator (lacO), situat n structura operonului, adiacent genei lac Z.
Regiunea operator nu este un cistron propriuzis deoarece nu codific sinteza vreunui
produs difuzibil; are o lungime de aproximativ 27 pb i funcioneaz ca un situs de
recunoatere i legare pentru represorul specific operonului. Prin transcrierea
operonului lac se formeaz o molecul de ARNm ce copiaz informaia de pe catena
sens. Acest ARNm policistronic conine mai multe semnale start pentru iniierea
traducerii, fiecare marcat, probabil, cu un codon AUG. Transcrierea genetic a
operonului lac este controlat att pozitiv, ct i negativ.
JACQUES LUCIEN MONOD (1910-1976)

Jacques Lucien Monod was born in Paris on February 9, 1910 but

he grew up in sunny Cannes, home to the Cannes Film Festival.
This may explain why Monod has been described as having an
actor's craving for attention.
Monod's father, Lucien, was a portrait artist, and his mother,
Charlotte Todd, came from Milwaukee, Wisconsin. As a child,
Monod climbed rocks, sailed yachts, hunted for fossils, and
dissected cats while learning to read Greek and play the cello.
By age 16, he decided to become a biologist to explain how
living things work in terms that did not violate the laws of
physics.
Monod returned to Paris in 1928 to study natural sciences at the
Sorbonne. He was convinced that genetics held the key to
explaining life in these terms. He received his degree in 1931
and started pursuing a Ph.D. During this time, Boris Ephrussi
took him to Caltech, the epicenter of genetics. In The Eighth Day
of Creation, Ephrussi complained, "I brought him to California to
study genetics. He made my life miserable."
Though Monod confessed he goofed off in California, he did impress
the local residents with his musical abilities. He conducted
concerts for American millionaires who tried to hire him for their
local orchestra.
Monod ultimately rejected a career in music and returned to Paris to
finish his degree. In 1938 he married the archeologist Odette
Bruhl and, in 1939, became the father of twin boys. In 1940 he
received his Ph.D. and joined the French Resistance.
 During the war, Monod was elevated to the chief of staff of
operations for the Forces Franaises de l'Interieur. In preparation for
the Allied landings, he arranged parachute drops of weapons,
railroad bombings, and mail interceptions. He also continued
working with bacteria, the little creatures he could manipulate like
chemicals.
The work Monod did with bacteria during the war eventually grew
into the famous PaJaMo experiment - Arthur Pardee, Franois
Jacob, and Monod's study that showed bacteria make an inhibitor to
keep beta-galactosidase production turned off.
By the time the lac operon system was worked out, Monod switched
his curiosity to allostery. Monod called the concept - in which an
enzyme's active site changes shape when it binds an effector
molecule - the second secret of life.
In the latter part of his career, Monod interpreted the findings of
molecular biology for the general public in his book, Chance and
Necessity, and directed the Institut Pasteur. Monod died on May 31,
1976 of leukemia; his last words were "Je cherche a comprendre" (I
am trying to understand.)
FRANCOIS JACOB (1920-)

Francois Jacob grew up in Paris feeling deprived. He wanted a

sibling and thought his parents unjustly denied him the
accomplice and playmate he was entitled to. He decided to get
one for himself but knew they weren't available in stores.
He studiously watched kissing couples after hearing that kissing
causes a baby to grow in the mother's stomach. He was
convinced that the mother had to bite off a fragment of the father
but he never witnessed the bloody process he imagined and he
gave up. (Jacob later produced four children with his wife Lise in
the normal fashion.)
As a teenager, Jacob describes himself as "a shade backwards with
girls." He didn't have much success with the boys either,
constantly getting into fights with right-wing bullies who objected
to Jacob's Jewish background. He continued fighting though he
rarely won. Jacob excelled in school but he resented the
compartmentalization of the subjects.
After finishing school, Jacob was attracted to the field of medicine
because surgery reminded him of sorcery. The sight of the
human body and the religious aspect of the silent operating room
transfixed him. Jacob attended medical school until the
impending German invasion forced him to flee to England in
1940.
In England, Jacob joined General de Gaulle's army, the Free French.
He chose artillery, his family's branch, but was forced to move to
the medical corps. Jacob served in North Africa and participated
in the invasion of Normandy in 1944.
 The shrapnel that pierced his side during the invasion killed his dream of
becoming a surgeon. Nevertheless, he finished medical school after being
released from the hospital. To complete school, he searched for a quick and
easy thesis project. He studied the properties of a new antibiotic, tryothicin,
but describes his research technique as "Charlie Chaplin goes to the lab."
Despite his clumsiness and advanced age, Jacob was drawn toward a
research career in genetics. Several times Jacob approached Andre Lwoff
and his colleague, Jacques Monod, for a fellowship only to be rejected every
time. Finally, on Jacob's last attempt, Lwoff was in a good mood and
suggested Jacob start work on "the induction of the prophage." Jacob had
no idea what this meant but he accepted the project.
Jacob emerged from his first seminar on lactose induction dazed but
fascinated. The scientists alternately told jokes and grilled each other with
tough questions. "This was not the cold, studious, stiff, slightly sad, slightly
boring world one often imagines," he recalled in his autobiography.
After obtaining his doctorate in 1954, Jacob remained in Lwoff's lab and
worked on phage. Jacques Monod worked downstairs on bacteria. After
Jacob realized that they were actually studying the same thing - repression -
Jacob and Monod began their Nobel Prize-winning collaboration, uncovering
the switch that turns beta-galactosidase synthesis off and on.
Jacob and Monod's unraveling of the lac operon not only introduced the new
concept of regulatory sites on DNA, but also the concept of mRNA. The
researchers had to hypothesize the existence of an intermediary molecule
between DNA and protein to account for the rapid production of the
enzyme's production. Jacob worked with Sydney Brenner during a brief stay
in California to verify the hypothesis.
 Controlul negativ este mediat de represorul
codificat de gena lac I care se leag specific de
regiunea operator, mpiedicnd transcrierea n
absena lactozei. Dac lactoza (sau un alt
inductor, cum ar fi IPTG = izopropil--D
tiogalactopiranozid) este prezent n mediu, ea
se cupleaz cu represorul inactivndu-l, astfel c
genele structurale sunt transcrise la ARNm, deci
operonul funcioneaz.
Schema reglajului regativ al operonului lac
Sinteza represorului de ctre gena lac I se face fr variaii, fiind
constitutiv. Rata exact a acestei sinteze este o funcie a structurii
promotorului genei reglatoare. In mod normal, promotorul acestei
gene funcioneaz cu o rat sczut, ceea ce determin prezena
doar a ctorva molecule de ARNm pentru represor, suficiente ns
pentru a bloca funcionarea operonului n absena inductorului
 Represorul codificat de gena lac I (sau represorii, n
general) nu este limitat n recunoaterea i legarea doar
la moleculele de ADN care poart informaia genetic
pentru sinteza proprie, ci el poate aciona ca element de
control i asupra altor molecule de ADN (asupra
operonilor similari din alte celule). Spre exemplu,
mutaiile din gena lac I (pentru represor) afecteaz gena
lac Z att din acelai cromosom ct i din ali
cromosomi. De asemenea, funcia genei cromosomale
lac I mutant poate fi suplinit de represorul codificat de
o gen lac I localizat la nivelul unei plasmide. Datorit
modului specific de aciune, represorii pot fi considerai
ca elemente de control ce acioneaz n poziie trans
(trans-acting control elements). In contrast, pe baza
studiului mutaiilor punctiforme la nivelul promotorilor
care au drept consecin blocarea sintezei de ARNm, se
consider c secvenele promotor sunt elemente de
reglare ce acioneaz n poziie cis, afectnd doar genele
structurale ale operonului din care face parte.
 Controlul pozitiv al funcionrii operonului lac.
Represia prin catabolit

La E.coli s-a observat c prin cultivarea pe un mediu ce conine att glucoz

ct i lactoz, bacteriile utilizeaz n mod preferenial mai nti glucoz, iar
lactoza rmne nemetabolizat pn cnd nu mai exist glucoz n mediu,
fenomenul primind denumirea de diauxie. Aceasta nseamn c genele lac
sunt inactive atta timp ct glucoza se gsete n mediu, mecanismul
reglator fiind numit represie prin catabolit. Prin urmare, pentru iniierea
transcrierii ARNm policistronic, pe lng prezena inductorului mai este
nevoie de nc un element. Activitatea acestui element este legat de
concentraia glucozei, efectul inhibitor al glucozei asupra exprimrii genelor
lac fiind indirect.
Natura elementului suplimentar necesar iniierii transcrierii operonului lac
(dar i a altor sisteme) a fost stabilit recent, acesta fiind reprezentat de
proteine implicate n reglarea pozitiv a genelor. Spre exemplu, n cazul
operonului lac, cnd glucoza este absent, n celul exist o cantitate mare
din molecula de reglare denumit AMPc. Acest element exist i n celulele
eucariote, mai ales la animale unde regleaz aciunea a numeroi hormoni.
AMPc este sintetizat prin aciunea enzimei adenil-ciclaza codificat de gena
cya. Cnd glucoza este prezent n mediu, nivelul AMPc este sczut. De
asemenea, dac n mediu se afl glicerol sau alt surs de carbon care nu
poate intra pe calea metabolic de utilizare a glucozei (calea glicolitic),
nivelul AMPc din celul este ridicat.
Tulpinile de E.coli (i multe alte specii de
bacterii) sunt capabile s sintetizeze o
protein specific ce are rolul de receptor
pentru AMPc (proteina CRP) codificat de
gena crp. Proteina CRP, mpreun cu
AMPc, formeaz un complex AMPc-CRP
care se leag la promotorul operonului
lac, la nivelul unui situs specific i
activeaz transcrierea.
Sinteza ARNm are loc doar n absena
represorului i n prezena complexului
AMPc-CRP legat la o secven din
regiunea promotor. In celulele ce conin
mutaii n genele crp sau cya nu se poate
iniia sinteza ARNm chiar dac
respectivele celule conin i mutaii lac I-
(deci nu se sintetizeaz represor) sau
mutaii la nivelul regiunii operator care
determin sinteza constitutiv a -
galactozidazei. Cu toate acestea, s-a
dovedit c transcrierea genelor operonului
lac se realizeaz i n condiii bazale, cu
o rat foarte sczut dar activitatea
maxim a acestuia necesit ndeplinirea
condiiilor menionate anterior
Controlul procesului de traducere al mesajului genetic
Cercetrile efectuate asupra operonului lac au evideniat faptul c
exist unele diferene n ceea ce privete traducerea informaiei
purtate de ARNm policistronic, ceea ce sugereaz existena i la
procariote a unei reglri la nivelul procesului de tranducere. Astfel,
s-a remarcat faptul c biosinteza celor trei enzime (-galactozidaz,
permeaz i acetilaz) se face n raport molar de 1:1/2:1/5,
diferenele datorndu-se reglrii la nivelul traducerii. Fenomenul se
poate realiza pe dou ci:
gena lac Z este tradus prima. Se pare c, n cazul moleculelor de
ARNm policistronic, imediat dup sinteza polipeptidului codificat de
prima gen are loc separarea de ribosomi, urmnd s se formeze un
nou complex de iniiere la nivelul codonului AUG al celei de-a doua
gene. Frecvena cu care se realizeaz acest proces este corelat cu
probabilitatea reiniierii la fiecare codon AUG urmtor. Astfel, se
formeaz un gradient n cantitatea de polipeptide sintetizate de la
captul 5 spre cel 3 al ARNm. Aceste efect, numit polaritate, se
realizeaz n cazul majoritii moleculelor de ARNm policistronic.
toate moleculele de ARNm sunt degradate la nucleotide dup cteva
runde de traducere. Degradarea este nceat dar uneori ncepe imediat
dup primul eveniment de traducere. Degradarea ARNm policistronic
ncepe, cel mai frecvent, la nivelul genei lac A, apoi continu cu gena
lac Y i, abia la sfrit, cu gena lac Z. Consecina acestui fenomen este
c, la un moment dat, sunt mai multe copii ale genei lac Z dect lac Y i,
evident, cu mult mai multe dect lac A.
 Represia enzimatic
Atunci cnd bacteriile sunt cultivate pe un mediu de cultur, acesta trebuie s
conin, pe lng sursa de carbon (reprezentat de glucide) i o serie de
aminoacizi (sau o surs de azot) necesari pentru sinteza proteinelor
specifice. In cazul n care mediul nu conine un anumit aminoacid, bacteria
este capabil s suplineasc absena aminoacidului din mediu prin sinteza
sa intracelular. Aceasta nseamn c operonul ce codific enzimele
implicate n calea metabolic de sintez a aminoacidului respectiv este activ
deoarece represorul produs de gena reglatoare este sintetizat ntr-o form
inactiv = aporepresor (conformaia sa spaial nu este potrivit pentru
interaciunea cu operatorul).
Sinteza produsului de interes (a aminoacidului) are loc n mod continuu, pn
cnd concentraia intracelular a acestuia este prea mare. In acest fel, dac
funcionarea operonului lac este indus de prezena lactozei, funcionarea
operonilor de tipul menionat mai sus este blocat atunci cnd concentraia
produsului final (substana sintetizat) atinge un anumit nivel. Se realizeaz,
ceea ce se numete, represia sintezei enzimei, iar produsul final al cii
metabolice a primit denumirea de corepresor. Rolul corepresorului este de
a interaciona specific cu aporepresorul, activndu-l prin modificarea
conformaiei moleculare (modificare alosteric), astfel nct acesta se leag
la operator i blocheaz transcrierea genelor structurale.
 Retroinhibiia enzimatic

Supraproducia de intermediari metabolici cu greutate molecular mic

(aminoacizi, baze azotate purinice i pirimidinice) poate deveni toxic pentru
celula bacterian productoare. Depirea acestei situaii este asigurat prin
mecanisme specifice dintre care, cel mai frecvent utilizat este inhibiia
activitii enzimelor. Mecanismul respectiv a primit denumirea de inhibiie prin
produs final, retroinhibiie sau inhibiie prin feedback, fiind cunoscut i ca
efectul Novick-Szilard. Inhibiia prin feedback este un mecanism foarte
sensibil i rapid dect reglarea transcripional care permite modularea
cantitii de produs final al unei ci metabolice.
Cel mai cunoscut exemplu, la E.coli, este cel al biosintezei L-izoleucinei pornind
de la L-treonin printr-o cale metabolic format din cinci etape, catalizat
fiecare de cte o enzim specific. Astfel, dac o tulpin de E.coli este
cultivat n prezena L-izoleucinei, acest aminoacid blocheaz activitatea
primei enzime, L-treonin-deaminaza, a cii metabolice care, n mod normal
asigur transformarea L-treoninei n -cetobutirat. Inactivarea enzimei
respective mpiedic formarea produsului intermediar menionat i, n felul
acesta, restul enzimelor din lanul respectiv sunt lipsite de produii
intermediari asupra crora acionau, iar calea de biosintez este, n felul
acesta, blocat.
Activitatea cii metabolice respective rmne blocat atta timp ct exist L-
izoleucin n mediu; atunci cnd acest aminoacid lipsete, enzima L-treonin-
deaminaza este activ, determin producerea primului produs intermediar, iar
celelalte enzime continu procesul de biosintez rezultnd aminoacidul de
interes.
 Reglarea exprimrii genelor la eucariote

Organizarea complex a organismelor eucariote n ansamblul lor ca i

diferenele de structur ale materialului genetic al acestora comparativ cu
organismele procariote conduc la observaia c exprimarea genelor la
eucariote este supus unui control extrem de complex ce se manifest la
diferite nivele. De asemenea, reglarea funcionrii genelor eucariote se
poate realiza pe termen scurt, la nivelul transcrierii, al prelucrrii ARNm, al
transportului acestuia n citoplasm, al sintezei proteinelor, al degradrii
ARNm, la nivelul cromatinei sau la nivel cromosomal, precum i pe termen
lung, prin evenimente ce conduc la diferenierea celular. In plus, la
eucariotele superioare, n mecanismele de reglaj genetic intervin i o serie
de substane de tip hormonal care activeaz sau, din contr, inhib
exprimarea specific a genelor.
La eucariote, genele nu sunt organizate n operoni, motiv pentru care reglarea
genetic se realizeaz la nivelul genelor individuale. Ca urmare, fiecare
molecul de ARNm poart mesajul genetic pentru o singur caten
polipeptidic, el fiind monocistronic. Conformaia spaial, tridimensional a
nucleohistonelor joac un rol important n funcionarea ADN ca matri
pentru ARN, superspiralizarea fibrei de cromatin mpiedicnd transcrierea
genetic. Ca regul, cromatina condensat nu poate fi transcris, pe cnd
cea difuz permite funcionarea ADN ca matri pentru sinteza ARN.
 ADN de la eucariote este permanent complexat cu
histonele care, pe lng rolul lor structural (asigurarea
stabilitii fibrei de cromatin) joac i rol de represori
nespecifici generalizai; ca urmare, genele se afl n
permanent stare represat. Pentru a funciona, genele
trebuie s fie activate, fenomenul avnd loc atunci cnd
necesitile celulei reclam sinteza produilor pe care
gena i specific.
Activarea genelor eucariote se realizeaz cu ajutorul
proteinelor nonhistonice. Dat fiind faptul c la eucariote
majoritatea genelor din genom sunt inactivate n orice
moment, reglajul genetic se realizeaz nu prin blocarea
activitii lor (represie), ci prin activarea unor anumite
gene (inducie), activarea i inactivarea avnd un
caracter reversibil.
Reglarea activitii genice se poate realiza la mai multe nivele, evidente n cursul
citodiferenierii: replicarea ADN, transcriere, posttranscriere, traducere,
posttraducere.
Reglarea la nivelul replicrii ADN se poate realiza prin replicare difereniat, prin
extrareplicare (amplificare) sau prin subreplicare, iar la nivelul transcrierii prin
transcriere difereniat ceea ce nseamn c genele ce codific proteine
specifice unui anumit tip celular sunt transcrise preferenial. Cercetrile efectuate
asupra cromosomilor politeni din celulele glandelor salivare ale larvelor de
Drosophila melanogaster au permis evidenierea a zonelor din cromosomi ce
sunt intens transcrise. Aceste zone pot fi observate chiar i la microscopul optic,
fiind cunoscute sub numele de inele Balbiani sau pufe.
In organismele pluricelulare, n fiecare celul se exprim doar o parte din informaia
genetic existent, manifestndu-se o variaie dependent de stadiul de
dezvoltare i de condiiile de mediu. Uneori, produii de transcriere ai anumitor
gene sunt prelucrai n mod diferit, n diferite celule. Deoarece acest model de
exprimare este transmis descendenilor, la fel ca i genele, nseamn c el este
codificat n molecula de ADN. In acest fel, fiecare gen posed nu numai
informaii structurale ci i "instruciuni" pentru corecta sa exprimare n spaiu i
timp.
De asemenea, n reglarea funcionrii pot interveni att compui endogeni (factori
de transcriere, hormoni etc) ct i exogeni, care activeaz sau inhib exprimarea
anumitor gene.
 Reglarea la nivelul procesului de transcriere
Controlul transcripional determin care dintre gene este transcris la un
moment dat i rata cu care procesul de transcriere se realizeaz. Genele de
la eucariote conin secvena promotor i, de cele mai multe ori, o secven
activatorare (enhancer), ele reprezentnd elemente reglatoare majore .
Majoritatea genelor de la eucariote sunt inactive (tcute) pn n momentul n
care ele sunt activate n mod specific. O prim condiie pentru ca procesul
de transcriere s poat fi iniiat este ca nucleosomii s fie ndeprtai de la
nivelul regiunii de interes.
Histonele, la rndul lor pot influena proprietile de transcriere ale ADN prin
modificri chimice precum fosforilarea, acetilarea, metilarea, fiind astfel
afectat interaciunea ADN-histone. Se consider c histonele represeaz
transcrierea genelor prin faptul c particip la asamblarea nucleosomilor la
nivelul regiunii TATA de la nivelul promotorilor. Activarea genelor devine
posibil atunci cnd anumite proteine se leag la nivelul secvenei
enhancer i determin dezasamblarea nucleosomilor de la nivelul cutiei
TATA, ceea ce permite altor proteine s se lege la nivelul elementelor
promotorului i s iniieze transcrierea
Proteinele nonhistonice ndeplinesc rolul unor activatori specifici ai genelor
asigurnd transcrierea difereniat a genelor, ele interacionnd cu histonele
pe care le ndeprteaz de la nivelul genelor ce urmeaz s intre n
funciune.
Reglarea transcrierii genelor la eucariote se mai poate realiza prin
procesul de metilare al ADN. Astfel, imediat dup replicare, o parte
dintre bazele azotate (citozina n special) sufer un proces de
metilare (prin intervenia unei metiltransferaze), gradul de metilare al
citozinei (5-metilcitozin) variind n funcie de specie. Spre exemplu,
70% din ADN de la mamifere este metilat. De asemenea, gradul de
metilare al citozinei este corelat cu activitatea genelor: genele
metilate nu sunt transcrise, ele fiind n acest fel represate. Utilizarea
unor analogi ai citozinei, de tipul 5-azacitidinei, mpiedic metilarea
citozinei i determin activarea anumitor gene care, n mod normal
nu funcioneaz. In general, genele mamaliene active sunt mai puin
metilate dect cele inactive. Cu toate acestea, se pare c procesul
de metilare nu reprezint un mecanism universal de reglare a
activitii genelor la eucariote, deoarece exist organisme eucariote
(Drosophila melanogaster, de exemplu) la care ADN nu este metilat.
In plus fa de metilare (sau n absena ei), existena conformaiei Z a
moleculelor de ADN, ce se intercaleaz n mod natural cu
conformaia B (vezi tranziia BZ) poate fi implicat n reglarea
exprimrii anumitor gene (cum ar fi cele din cromosomii celulelor
glandelor salivare ale larvelor de Drosophila melanogaster).
Un alt moment al reglrii exprimrii genelor la eucariote este cel al prelucrrii
ARNm. Acest tip de reglare acioneaz n sensul formrii ARNm matur pornind de
la ARNm pre-mesager. Dou evenimente reglatoare exemplific acest nivel de
reglare: alegerea situsului de poliadenilare (adugarea cozii poliA) i a celui de
eliminare a intronilor i asamblare a exonilor.Datorit structurii discontinue a
genelor de la eucariote (exoni + introni), n urma transcrierii lor se sintetizeaz
ARN premesager (ARNm precursor) ce conine att secvene informaionale ct
i non-informaionale. Prelucrarea acestei molecule (fenomenul de splicing)
pentru a obine ARNm matur, funcional presupune mai multe etape n care sunt
implicate, pe de o parte, molecule de ARNsn i, pe de alt parte i anumii factori
proteici. Mutaiile care afecteaz mecanismul corect de prelucrare al ARNm pot
determina, la om cel puin, efecte fenotipice grave. Acesta este cazul -
talasemiei, boal datorat afectrii catenei a hemoglobinei din cauza unor
modificri intervenite n prelucrarea corect a ARNm precursor. Mai mult, s-a
dovedit c, prin apariia unor mutaii la nivelul unor introni ai unor gene oncogene
procesul de transcriere al genei respective crete de peste 10 ori.
De asemenea, s-a evideniat faptul c, n mod normal, n anumite situaii, prelucrarea
ARNm precursor se poate realiza ntr-o asemenea manier nct permite o
"asortare" variat a exonilor din aceeai gen, procesul fiind denumit prelucrare
alternativ (alternative splicing). Consecina acestui fenomen este apariia unor
forme diferite ale aceleiai proteine, cu funcii mai mult sau mai puin similare,
necesare fie n diferite stadii ale dezvoltrii organismului, fie n celule diferite. Un
exemplu n acest sens este reprezentat de imunoglobulina M care poate prezenta
dou forme (datorate asamblrii variate a exonilor): una secretat i o alta legat
la membran (la nivelul limfocitelor B). Cele dou forme de anticorpi, codificate
de aceeai gen, se datoreaz asamblrii diferite a exonilor n cursul procesului
de maturare al ARNm.
Odat prelucrat, ARNm iese din nucleu, la nivelul porilor din membrana
nuclear, procesul de transport al moleculelor de ARNm fiind specific.
Mecanismul exact al transferului ARN din nucleu n citoplasm nu este nc
pe deplin clarificat. Studiile de microscopie electronic efectuate asupra
transportului ARNm la Chironomus sp. au indicat faptul c la extremitatea 5
a ARNm (secvena cap) se leag o protein specific (CBC=cap binding
complex), iar complexul rezultat interacioneaz cu porul nuclear (cu
nucleoporine) asigurnd translocarea moleculei de ARNm n citoplasm. De
asemenea, se pare c exportul ARNm n citoplasm este mediat i de alte
proteine de transport mpreun cu care molecula de ARN formeaz un
complex ribonucleoproteic.
Experimentele realizate la diferite grupe de eucariote (plante, nematode,
ciuperci) au permis observaia c, n anumite condiii, are loc inactivarea
anumitor gene (gene silencing) printr-un mecanism special ce se
manifest la nivelul ARN: degradarea specific a anumitor molecule de
ARNm (RNA silencing). Date recente arat c acest mecanism este
implicat n aprarea celular antiviral i n inactivarea transpozonilor.
Procesul de inactivare/degradare a ARNm implic participarea mai multor
componente celulare: o ARN-polimeraz dependent de ARN (RdRP) care
determin sinteza unor molecule de ARN antisens; proteine cu funcii
similare RN-azelor i o helicaz. In ceea ce privete mecanismul major al
degradrii ARNm la eucariote, acesta implic ndeprtarea secvenei cap
de la extremitatea 5 i deadenilarea captului 3, rezultatul fiind degradarea
n sensul 5-3.
Rolul hormonilor n reglarea activitii genelor
In cazul eucariotelor se poate vorbi de o reglare pe termen scurt i o reglare pe
termen lung. La eucariotele superioare, reglarea pe termen scurt (la nivelul
transcrierii genetice) este n cea mai mare parte mediat de hormoni i
factori de cretere. Hormonii pot avea drept int una sau mai multe tipuri de
celule, fiecare tip rspunznd diferit la aciunea aceluiai hormon. Unii
hormoni regleaz activitatea genelor influennd transcrierea, traducerea
sau funcionarea unor enzime, cum este adenilat-ciclaza.
O parte dintre hormoni i factori de cretere i exercit efectele biologice n
urma interaciuniii ce receptori situai la nivelul suprafeei celulare. De
exemplu, glucagonul, insulina sau factorul epidermal de cretere determin
efecte intracelulare dup ce se leag la nivelul receptorilor membranari; ei
stimuleaz activitatea adenilat-ciclazei care convertete ATP la AMPc
capabil s stimuleze transcrierea genelor ca i n cazul bacteriilor.
In cazul altor hormoni, cum sunt cei steroizi, aciunea lor se exercit dup
ptrunderea n interiorul celulei int. Acesta este cazul hormonilor de tipul
estradiolului, a progesteronului, testosteronului sau cortizolului care
traverseaz membrana plasmatic i se leag mai nti la nivelul unor
receptori intracelulari (localizai n citosol). Complexul hormon-receptor
format migreaz apoi n nucleu unde se leag la nivelul unor situsuri
specifice ale ADN, determinnd activarea sau represia transcrierii unui set
specific format din 50-100 gene, fr intervenia AMPc.
 In cazul vitaminei D3, un derivat steroidic, s-a evideniat c aceasta
acioneaz prin legarea la nivelul unui receptor nuclear similar
receptorilor pentru hormonii steroidici. Vitamina D3 joac un rol
important n reglarea metabolismului calciului i n diferenierea
oaselor. Receptorii pentru tiroxin i acid retinoic sunt localizai n
nucleu i sunt, n mod surprinztor, foarte asemntori cu receptorii
pentru hormonii steroizi dei hormonii au structuri chimice diferite:
tiroxina, hormon produs de glanda tiroid, este un derivat iodat al
tirozinei, iar acidul retinoic este format prin oxidarea vitaminei A
(retinolul). Ambele substane sunt morfogenetice, adic induc sau
controleaz diferenierea celular. Tiroxina induce transformarea
mormolocilor n broate, iar acidul retinoic determin axul antero-
posterior n cursul dezvoltrii membrelor.
Un alt hormon steroid, ecdisonul, identificat la insecte, inclusiv la
Drosophila, interacioneaz cu receptori nucleari i controleaz
procesul de metamorfoz (transformarea larvei n adult).
 In cazul plantelor au fost identificate numeroase substane care au
diferite roluri n controlul creterii i dezvoltrii, ele fiind denumite
hormoni vegetali. Hormonii vegetali sunt de cinci tipuri: etilena, acid
abscizic, auxine,citokinine i gibereline. Ei sunt responsabili de
realizarea unor activiti variate: de exemplu, etilena induce
coacerea fructelor, maturarea florilor i senescena plantelor, pe
lng alte activiti. Printre cei mai caracterizai hormoni se numr
i giberelinele. La fel ca i hormonii steroizi animali, giberelinele
stimuleaz transcrierea i, n acest fel, determin creterea
cantitativ a anumitor proteine specifice implicate n anumite
procese majore de formare i difereniere celular. Atunci cnd sunt
aplicate plantelor giberelinele produc o serie de efecte, aa cum
sunt cele observate n cazul plantelor pitice(dwarf) la care
determin creterea n nlime. De asemenea, aceti hormoni
stimuleaz procesul de germinare al anumitor tipuri de semine.
Dei aciunea giberelinelor a fost intens studiat, pn n prezent nu
s-au evideniat receptori pentru aceti hormoni iar mecanismul
molecular nu este pe deplin clarificat
Efectul giberelinelor asupra germinrii seminelor de orz. Ziua 1: Giberelinele sunt
produse de embrion i difuzeaz n stratul de aleuron; Ziua 2: In stratul de aleuron se
secret enzima -amilaza care degradeaz amidonul din endosperm, elibernd
nutrieni; Ziua 3: Utiliznd nutrienii eliberai prin degradarea endospermului, embrionul
se dezvolt; Ziua 6: Endospermul a fost consumat dar plntua poate acum realiza
singur fotosinteza, obinnd astfel nutrienii necesari.
 Reglajul genetic la nivelul cromatinei

Organizarea complex a cromosomilor eucariotelor prin cuplarea ADN

cu proteinele histonice i formarea cromatinei determin existena
unor mecanisme suplimentare implicate n reglarea activitii
genelor la aceste organisme. Experimentele realizate n cursul
timpului asupra fibrei de cromatin au artat c, pentru a se realiza
transcrierea anumitor gene are loc mai nti un proces de
decondensare selectiv a cromatinei. Aceast decondensare
presupune, pe de o parte, o legare mai slab a histonei H1 la
nivelul ADN (i deci o cantitate mai mic din aceast histon care, n
mod normal determin condensarea fibrei de cromatin) i, pe de
alt parte, o acetilare a histonelor de la nivelul nucleosomilor din
zona supus transcrierii. In plus, n procesul de activare selectiv a
genelor eucariote sunt implicate proteinele nonhistonice i
ubiquitina, protein ce se leag covalent la aproximativ 1/10 dintre
moleculele de histone H2A.
La nivelul cromosomilor eucariotelor exist dou tipuri de heterocromatin, constitutiv i
facultativ, care sunt implicate n activitatea genelor. Astfel heterocromatina
constitutiv se gsete la nivelul regiunilor care nu sunt niciodat exprimate
(transcrise); acestea includ sateliii i au un rol structural pentru cromosom. Deseori,
secvenele condensate sunt concentrate la nivelul unor regiuni specifice, de obicei n
jurul centromerului, ele pstrnd aceeai configuraie n toate celulele organismului
respectiv. Heterocromatina facultativ reprezint cromatina condensat doar n
anumite celule, n timp ce n alte tipuri de celule regiunile corespunztoare sunt
decondensate. S-a dovedit faptul c, n celulele embrionare cantitatea de
heterocromatin facultativ este mic n timp ce n celulele specializate proporia sa
crete foarte mult. Aceasta nseamn c n cursul procesului de dezvoltare
individual (ontogenetic) are loc inactivarea prin heterocromatinizare a unui numr
mare de gene.
Cel mai cunoscut exemplu de reglare prin heterocromatinizare de tip facultativ este
cromatina sexual ce reprezint unul dintre cromosomii X de la femelele de mamifere
care se inactiveaz la ntmplare (fie cel de origine matern, fie cel de origine
patern), n mod definitiv. Astfel, organismul femel poate fi considerat ca fiind un
mozaic de clone celulare, fenomenul fiind evident n cazul unor gene mutante
localizate pe cromosomul X: n cazul unor celule gena mutant se manifest
fenotipic, n timp ce n altele nu (cele ce conin cromosomul X heterocromatinizat). Un
exemplu este cel al pisicilor calico la care femelele au blana cu pete galbene i
negre, fiind heterozigote (Cy/CB), genele pentru culoarea blnii fiind localizate pe
cromosomii X. In cursul dezvoltrii ontogenetice n unele celule este inactivat
cromosomul X pe care se gsete gena Cy n timp ce n alte celule se inactiveaz
cromosomul X ce conine gena CB. Rezultatul este apariia unor pisici cu blana cu
pete galbene i negre. La masculi, din cauz c exist un singur cromosom X,
fenomenul nu se realizeaz, ei fiind fie complet negri fie galbeni
Exemplul prezentat mai sus constituie un model de reglare
pe termen lung la eucariote; aceasta se realizeaz prin
heterocromatinizarea sau condensarea mai pronunat a
cromatinei ceea ce conduce la o reducere sau chiar o
blocare a funcionrii ADN ca matri pentru sinteza
ARN. Heterocromatina puternic condensat este
prezent mai ales n celulele nalt difereniate care
sintetizeaz foarte puine proteine, comparativ cu
celulele nedifereniate. Un exemplu suplimentar pentru
afirmaiile de mai sus este cel al leucocitelor normale n
care apar mase mari de heterocromatin sub forma unor
blocuri puternic condensate la periferia nucleului, n timp
ce n cazul leucemiilor aceste aspecte sunt absente,
celulele trecnd n starea nedifereniat, cu sinteze
proteice intense i capabile de diviziuni celulare rapide.
 Reglarea pe termen lung. Citodiferenierea
Procesul de difereniere celular sau citodiferenierea este specific organismelor
eucariote pluricelulare, el referindu-se la modificrile structurale i funcionale pe care
le sufer celulele ce rezult (n urma unor diviziuni mitotice repetate) din celula-ou
sau zigot. La organismele eucariote, coninutul n ADN este acelai, indiferent de tipul
celular, ceea ce nseamn c diferenierea celular i dezvoltarea organismului
reprezint rezultatul unei cascade de evenimente programate genetic ce determin
activarea sau represia genelor. Studiile efectuate asupra dezvoltrii ontogenetice la
Drosophila melanogaster i la nematodul Caenorhabditis elegans au permis
elucidarea unor aspecte legate de genetica dezvoltrii.
Fenomenul diferenierii celulare se realizeaz ntr-o ordine cronologic strict, dup un
program extrem de riguros a crui nerespectare conduce la modificri anormale ale
organismului. De exemplu, la om unde exist aproximativ 1013 celule, n cursul
dezvoltrii ontogenetice are loc diferenierea a peste 150 tipuri diferite de celule,
deosebite ca form, mrime, structur sau funcie.
Studiul diferenierii celulare la mamifere este dificil, motiv pentru care cercettorii au ales
un sistem model la care dezvoltarea embrionar s poat fi urmrit cu uurin.
Acesta este cazul dezvoltrii embrionare la Drosophila melanogaster, avantajele
alegerii datorndu-se urmtoarelor caracteristici:
genom de dimensiuni mici
numr mic de cromosomi (patru perechi) i existena cromosomilor politeni
prezint mai multe stadii larvare, dezvoltarea fiind prin metamorfoz (ou-larv-pup-adult),
ntregul proces de metamorfoz (dezvoltarea de la ou la adult) dureaz aproximativ nou
zile.
Cercetrile realizate asupra dezvoltrii la
D.melanogaster au artat c, nainte ca
ovulul s fie fertilizat, la nivelul su se
formeaz un gradient de molecule ce vor
interveni ulterior n procesul de dezvoltare.
Astfel, la polul posterior al celulei ou
citoplasma conine mici granule polare de
ARN i proteine specifice, n timp ce
pronucleul femel este situat central. Dup
fecundare, zigotul se divide rapid, avnd
loc nou cicluri de diviziune care nu sunt
urmate i de citochinez. Rezult n acest
fel o structur multinucleat numit sinciiu,
dup care nucleii migreaz spre periferia
embrionului. Dup alte trei diviziuni, fiecare
nucleu este nconjurat de membrana
plasmatic formndu-se blastodermul.
Acesta este alctuit din aproximativ 6000
celule somatice identice din care se vor
forma dou categorii de celule: unele din
care se vor dezvolta esuturile larvei i
altele ce vor servi la diferenierea celulelor
adultului. Acestea din urm formeaz
grupuri de celule nedifereniate ce rmn
n aceast stare n cursul stadiilor larvare.
Fiecare dintre aceste grupuri de celule
nedifereniate a primit denumirea de disc
imaginal, ele formnd ulterior cte un
organ specific al adultului.
 In ceea ce privete reglarea procesului de
citodifereniere, aceasta se realizeaz la niveluri
diferite: la nivelul cantitii de ADN i a replicrii
materialului genetic, al transcrierii i traducerii la nivel
cromosomal sau al ntregului genom. Astfel, dei se
consider c toate celulele unui organism conin aceeai
cantitate de ADN, s-a dovedit c exist unele variaii ce
se datoreaz unor procese de replicare difereniat:
suprareplicare a anumitor regiuni cromosomale i
subreplicarea altora (mai ales a regiunilor
heterocromatice). De exemplu, la plante exist diferene
ntre cantitatea de ADN din meristeme i cea din diferite
organe: la nivelul celulelor meristematice cantitatea de
ADN este mai mic n timp ce n alte organe, cum sunt
cotiledoanele care sunt alctuite din celule nalt
difereniate, cantitatea de ADN este mai mare.
In aceea ce privete genele implicate n controlul dezvoltrii la D.melanogaster,
acestea au fost identificate i studiate pe baza mutaiilor produse la nivelul lor,
care au condus fie la apariia unor structuri anormale fie la moartea
organismului. Aceste gene pot fi incluse n cel puin trei grupuri
gene de origine matern: se exprim n cursul ovogenezei i sunt responsabile de
gradientul de proteine ce apare la nivelul oului i care sunt implicate organizarea
spaial a embrionului timpuriu. ARNm rezultat prin transcrierea genelor materne
este sintetizat la nivelul celulelor ce nconjoar ovocitul (celulele granuloasei) i apoi
este transportat n acesta. De asemenea, ovulul primete de la organismul matern
i o serie de ribozomi, care mpreun cu ARNm motenit iniiaz sinteza unor
proteine cu distribuie polar. Se pare c genele materne acioneaz la nivelul a trei
regiuni ale embrionului: regiunea anterioar, regiunea posterioar i regiunea dorso-
ventral. Dintre genele materne implicate n dezvoltarea embrionar menionm
gena bicoid, necesar pentru dezvoltarea normal a segmentelor anterioare i gena
nanos responsabil de dezvoltarea normal a segmentelor posterioare ale larvei.
Mutaiile la nivelul genei bicoid determin formarea unor embrioni lipsii de cap i
torace.
gene de segmentare: sunt exprimate dup fecundare la nivelul zigotului i
determin numrul i organizarea segmentelor corpului.
genele homeotice: se exprim dup genele segmentare i determin identitatea
fiecrui segment individual. Mutaiile la nivelul acestor gene determin dezvoltarea
unor structuri normale la nivelul unor segmente incorecte. Au fost identificate dou
grupuri de gene homeotice (gene Hox): complexul Antennapedia i complexul
bithorax. Genele din complexul Antennapedia controleaz identitatea segmentelor
anterioare n timp ce genele din complexul bithorax sunt implicate n particularitile
segmentelor posterioare. Mutaiile la nivelul genelor din complexul Antennapedia
determin apariia de picioare n loc de antene, n timp ce mutaii la nivelul
complexului bithorax conduc la formarea unei perechi suplimentare de aripi.
Diferenierea celular ce apare n cazul organismelor
multicelulare se datoreaz nu numai interveniei genelor
menionate ci i unor mecanisme specifice de comunicare
i semnalizare ce se realizeaz ntre celule. In aceste
mecanisme sunt implicate o serie de proteine ce
interacioneaz cu receptori caracteristici aflai la suprafaa
celulelor int. In urma interaciunii dintre semnalul
molecular i receptorul su specific sunt generate alte
semnale intracelulare care informeaz nucleul asupra
necesitii stimulrii proliferrii celulare, fenomenul primind
denumirea de proces de transducie a semnalelor. In
realizarea acestui proces particip o serie de factori cu
funcii distincte: factori de cretere celular (de exemplu,
factorul de cretere epidermic), receptori membranari
proteici, transmitori citoplasmatici fosforilani, factori
nucleari de transcriere. O mare parte a acestor factori este
determinat de o categorie aparte de gene denumite proto-
oncogene.