Genetica Bacteriana

ADN
 Conclusiones
El ADN es una doble
hlice, con las bases
dirigidas hacia el centro,
perpendiculares al eje de
la molcula y las unidades
azcar-fosfato a lo largo
de los lados de la hlice

Las hebras que la

conforman son
complementarias
Los Nucletidos
Uniones Fosfodiester

Estructura primaria
DNA: unin de 2 bandas antiparalelas:
doble helix

Estructura secundaria
EXPRESIN GNICA

REPLICACIN DEL ADN

 Replicacin
ADN ADN

Etapas
Inicio
Reconocimiento de Ori C por DNaA
Formacin de orquilla (DNaB o helicasa)
Formacin del primosoma y del replisoma
Elongacin
Trmino
Estructura de oriC de E. coli

Ordenamiento en
Sitios de fijacin de la protena DnaA
tndem de tres
cuatro secuencias de 9 pares de bases
secuencias de 13 pb

Secuencia consenso Secuencia consenso

GATCCTNTTNTTT TTATCCACA
Primosoma:
DNaB (helicasa)
DNaG (primasa)
Elongacin de la replicacin: DnaB

Replisoma
Cebador: 10-12
Fragmanto de Okasaki: 1000 nt
Terminacin de la replicacin

ter

Tus
Terminacin de la replicacin
Terminacin de la replicacin
Terminacin de la replicacin

TopoIV
En dependencia de la polaridad que presente la secuencia Ter y por
tanto la ubicacin de la protena Tus se detendr una u otra
horquilla de replicacin
 Control de la replicacin

En ori C 11 secuencias ricas en GATC , blanco de la enzima Dam metilasa

que metila el N6 de la Adenina
Solo se replida ADN metilado en ambas cadenas, un ADN hemimetilado no
La Dam metilasa convierte un hemimetilado en metilado completo 13
minutos despus
Sec A es una proteina de membrana que se une a ADN hemimetilado e
CIDO RIBONUCLEICO
(ARN)

Silvia Ara Rojas

 Caractersticas del ARN

Las uniones G-C y A-U forman pares

de bases complementarias unidas
por puentes de hidrgeno
(cannicas de Watson-Crick)

+ estables G-C (3 puentes H)

A-U (2 puentes H)
- estables G-U (1 puente H)
 ARN
estructura
Estructura primaria
 Estructura
secundaria del
ARN

Rnasa P de
E. coli
 Estructura Secundaria del
ARN
La estructura secundaria del ARN est compuesta
principalmente por regiones de ARN de doble cadena
originadas por plegamiento de la molcula lineal
sobre si misma.

Al combinarse regiones de simple y doble cadena, la

energa acumulada en las bases apareadas
incrementa la estabilidad energtica de la molcula
mientras que las bases libres la desestabilizan.

La estructura secundaria del ARN es la intermediaria

entre la molcula lineal y la estructura
tridimensional.
Estructura secundaria y terciaria
 Stem Loops (Hairpins)
al menos 4 bases libres para evitar el
impedimento estrico con las bases que
forman el tallo.
 Bulge Loops (Encorvado)
Ocurre cuando las bases de un lado
de la estructura no pueden
aparearse.
 Interior Loops
ocurren cuando a ambos lados de la
estructura, quedan bases libres.
 Junctions (Multiloops)
dos o ms regiones de doble cadena
convergen para formar una
estructura cerrada.
 Interacciones Terciarias

Tambin pueden existir interacciones

terciarias.

Se localizan usando anlisis de

covarianza.
 Kissing Hairpins
Bases desapareadas de dos hairpin
loops separados entre s por pares de
bases.
Pseudoknots
Interacciones Hairpin-Bulge
Sntesis de ARN

Transcripcin
ETAPAS
ENSAMBLAJ
E DE
RNApol E
INICIACIN
PROMOTORES
ELONGACI
N
 TERMINACIN
INDEPENDIENTE DE
RHO
 TERMINACIN
DEPENDIENTE DE
RHO
 Tipos de ARN
Mensajero
Transferencia
Ribosmico
Uracilo
De interferencia
 ARNm
Monocatenario
Vida media corta
Sintetizado por ARNpol
Proteccin
Procariotas
5PPP
 ARNt
73 90 nucletidos
25 000 daltons
45% ARN total
Forma
Trbol de 3 hojas (complementariedad intracatenaria)
Nucletidos poco usuales:
Pseudourdico
Inoslico
Timina
 Estructura ARNt

Estructura secundaria de los

ARNt:
Brazo aceptor
extremo 5' y el extremo 3
secuencia CCA, cuyo grupo
-OH terminal sirve de lugar
de unin con el
aminocido.
El bucle (o brazo)TC
acta como lugar de
reconocimiento del
ribosoma.
El bucle (o brazo) D
cuya secuencia es
reconocida de manera
especfica por uno de los
veinte enzimas, llamados
aminoacil-ARNt sintetasas .
El bucle del anticodn
 ARNr
El ms abundante
Monocatenario con zonas de doble
hlice
Estructura secundaria y terciaria
Funcin: sntesis proteicas
ribosomas
Tipos
Procariotas
5S, 16S, 23S
 Alteracin de la
informacin gentica

Mutaciones
Transferencia gentica
Recombinacin

SILVIA LILIANA ARA

 Mutaciones
Definicin
Cambios
Alteracin
Transmisible

Clasificacin
Por origen
Espontaneas
Inducidas
Por amplitud de efecto
Gnicas
Cromosmicas
Genmicas
Por su consecuencia
 Tipos de Mutaciones
Mutaciones Gnicas (Puntuales)
Sustitucin de nucletidos Transiciones
Transversione
s
Adicin o supresin puntuales frameshift
Afecta pocos nucletidos pero no en mltiplo de 3

Mutaciones cromosmicas
Grandes delecciones (o borraduras)
Inversiones
Translocaciones
Duplicaciones en tndem
Mutaciones insercionales por elementos
transponibles
Una mutacin por sustitucin de una base es un
cambio de un nico par de bases por otro par
diferente
Mutaciones difieren en sus efectos sobre la
estructura y funcin de las protenas

ADN CTC CTT CTA CAC ATC

ARNm GAG GAA GAU GUG UAG

aa Ac.Glut. Ac.Glut. Ac.Asp. Valina ALTO

Mutaciones son materia prima de la evolucin

 Las sustituciones de nucletidos pueden ser:

Transiciones.- sustituciones de una purina por otra

purina (A, G) de una pirimidina por otra
pirimidina (C, T)

Transversiones.- sustituciones de una purina por

una pirimidina o viceversa (C T ya sea por A G
viceversa)
Por su consecuencia
Neutra
De sentido alterado o missense
Silenciosa
Inestabilidad estructural
Perdida de actividad
Inactivacin
Sin sentido
UAG UAA UGA
 REVERSIBILIDAD
REVERSION O RETROMUTACION
Restaura el genotipo original

SUPRESION
Indirecta
i) Se abre una nueva va para la sntesis del producto afectado

por la 1 mutacin.
ii) El producto mutado de la 2 mutacin puede sustituir al

producto de la primera.
iii) Se provoca un cambio en el medio intracelular, que hace

que el producto alterado de la primera mutacin vuelva a ser

funcional.

Directa
Intragnica
Intergnica
 Mutaciones inducidas
Agentes fsicos
Radiacin UV
Radiacin ionizante
Agentes qumicos
Anlogos de bases
5-BrU, 2-AP
Agentes desaminantes o hidroxilantes
Acido nitroso, hidroxilamina
Agentes alquilantes
Gas mostaza, EES, EMS, NTG
Agentes intercalantes
Naranja de acridina, bromuro de etidio, proflavina
A. bloqueadores de emparejamiento de bases
benzo-a-pireno, aflatoxina B1
 Agentes Mutagenicos
Agente Accin Efecto
Anlogos de Base
5 Bromouracio Se incorpora como T: a veces A- T G C
aparea con G
2 Aminopterina Se incorpora como A: a veces A- T G C
aparea con C
Reaccin con DNA
cido nitroso Deamina A, C A- T G C
Hidroxilamina Reacciona con C G - C A- T
Agentes alquilantes
Etilen etanosulfonato Inserta metilo en G G - C A- T
Mostazas nitrogenadas, Entrecruzamientos de hebras Mut. Punt. y delecc.
.. NTG
Acridinas, bromuro Colorantes intercalantes Cambio del marco de
de .. .. etidio lectura
Radiaciones
UV Formacin de dmeros Reparacin c/s delecc
Ionizantes Reparacin c/s delecc
Formacin de radicales libre
Mutagnesis
 Tasa de mutacin
expontnea
Mide frecuencia de mutacin
Requiere grandes poblaciones
Hace uso de tcnicas especiales
Formula
Nmero de
mutantes
N de Wild Types

Expresin
Mutantes/clula/generacin
 Usos
Gentica de poblaciones

Estudios de evolucin

Determinacin del efecto de mutgenos

Mecanismos de reparacin del
ADN

Mecanismos prerreplicativos

Mecanismos posreplicativos
 Mecanismos prerreplicativos:

Reparacin de bases modificadas (sitios AP,

metilacin o alquilacin)
Hidrlisis de unin azucar-purina
Perdida de una purina
Intervienen ExoIII (xth), Endo IV (nfo) DNA
glicosilasa (fpg) y/o DNA glicosilasa I (tag)
Reparacin fotoenzimtica o
fotorreactivacin,
Fotoliasa, Luz visible (300 a 500 nm)
Reparacin por escisin y resntesis
Escinucleasa: Uvr[A2BC
ADNpol I, Helicasa II (uvrD) y ligasa
Reparaci
n
de bases
modificada
s
 Luz UV

Reparacin
por Dmero
de
fotoreactivaci timina

n
Fotolias
a

Luz
visible
 Escicin por
UvrA2BC

Reparacin
por Remosin del
escisin y segmento daado por
UvrD (helicasa)
resntesis

DNApol I

Ligasa
 Mecanismos posreplicativos:
Reparacin por recombinacin directa
RecA
Exonucleasas V (recBCF) y exonucleasa I
(sbcB)

Reparacin del apareamiento (Mismatch)

DNApolimerasa
Metilasa de DNA
Proteinas mut (helicasas, etc)

Reparacin inducible de emergencia (SOS)

Inducible y propenso a error
Protena RecA*
Hiperactivacin de recA, uvrA, B, C, umuDC
REPARACION POR RecA
RECOMBINACION recBCF
sbcB
Reparacin
por
recombinacin
replicativa

Intervienen los genes: dam

(metilasa), mutH, mut L,
mutS (de reconocimiento)
uvr D (helicasa)

Reparacin
de
apareamien
to errneo
Reparacin
SOS
 Consecuencias
Aumentan los niveles de RecA
(reparacin por recombinacin)
Aumentan los niveles de la
escinucleasa (reparacin por escisin-
resntesis)
Se expresan los genes umuDC
(aumento de la mutagnesis). Hay
una sntesis de emergencia de
ADN que acarrea la frecuente
introduccin de bases incorrectas
Mecanismos que introducen
variabilidad en el genoma

Recombinacin
Transferencia de Informacin
Transferencia de material
gentico
Transformacin
ADN
CROMOSMICO
Transduccin

ADN
Conjugacin EXTRACROMOSMICO
 Transformacin
Factores que afectan
Tamao del ADN donador (5x105 d)
Nucleasas ambientales
Competencia del receptor
Factor de competencia
Tipos
Natural
Inducida (CaCl2)
Etapas
Toma de ADN
Recombinacin homloga (recA, B y C)
 Transduccin
Vector: fago
Tipos
Generalizada
Cualquier gen del donador
Fagos lticos
Especializada
Determinados genes
Fagos lisognicos o temperados
Transduccin
Generalizada
Transducci
n
Especializad
a
 Conjugacin
Requisitos
Contacto fsico entre las clulas
Tipos celulares
Donador Factor F

Receptor Falta de
Factor F

Estados fisiolgicos del Factor F

Autnomo (F+)
Integrado (Hfr)
Autnomo con genes bacterianos (F)
F+ x
F-
Hfr x
F-
F x F-
Regulacin Gnica

Silvia L. Ara Rojas

 Operones
Clasificacin
De expresin constitutiva
Transcripcin permanente
Operones para ADN y ARN pol, protenas de
CTE, protenas ribosmicas, etc
Ejem.: metabolismo de glucosa
De expresin regulada
En funcin de condiciones ambientales
Clasificacin
Expresin inducible (opern lac)
Expresin reprimible (opern trp)
EL OPERON
 Regulacin
Mecanismos: a nivel
Transcripcional y sobre el ARNm
Inicio
Durante
Nivel Traduccional
Post traduccional
Sistemas globales de regulacin
Reguln
1. A nivel transcripcional y sobre el
ARNm
A nivel del inicio de la transcripcin
Sustitucin del factor de la ARN-polimerasa
Interaccin de protenas regulatorias sobre el Operador:
(1) Induccin o Represin gnica
(2) Mecanismos de control positivo o negativo

Terminacin prematura de la transcripcin:

Atenuacin de la transcripcin

Sistemas de regulacin de dos componentes

Procesamiento de ARN
 Sustitucin de factores :

25- 70
37C

45- 32 o H
50C

Escherichia coli NH3 54o N

Nutrien 38
tes

Medio 28 o F
lquido
Regulacin por interaccin
con protenas
Tipos
Negativa por represores
Positiva por activadores
Control Negativo con inductor
 REGULACIN DEL OPERN lac DE E. coli

(lac
I)

Transcripcin
galactosidasa bloqueada
galactosido
repres permeasa
or galactosido
transacetilasa

Ocurre la
transcripcin

lactos Represor
a
Inductor
Represor Lac: unin al ADN

-5 +1 +2
1
Control negativo con correpresor
EL CASO DEL OPERN trp DE E. coli
Control positivo

Opern lac
Opern ara
Reguln
Opern gal CAP

Opern mal
Represin catablica o efecto
glucosa

Regulaci
n positiva
 Elementos del control
positivo del opern lac
CRP o CRP-AMPc
Gen crp CAP
apoinduct inductor
or
AMPc

Adenilato ciclasa
Gen cya
ATP

Opern lac:
EIIaGlc~
P (+)
Operon arabinosa
Operon Arabinosa: zonas de
regulacin
Regulaci
n del
opern
arabinosa
Sitios de Unin a AMPc-CRP

Clase I
61 pb
Promotor

Clase II 41 pb
Promotor

Clase III >90 pb

Promotor

TGTGA - N6 -
TCACA
Opern lux
Atenuacin de la
transcripcin:
Opern trp
 N

C
Sistemas de
regulacin de dos
componentes

C
Ejemplos:
CbrAB de Ps. Putida (aas como nica fuente de C)
cbrA sensor
cbrB regulador de respuesta
Sistema Ntr
Responde ante los niveles de amonio
Permite el uso de fuentes alternativas de N 2
Sistema de respuesta ante osmolaridad
Aumento de presin osmtica detectado por
EnvZ, que fosforila a
OmpR que controla las proporciones relativas de
dos porinas, OmpC y OmpF
Haciendo que predomine la porina de poro ms
pequeo (OmpC).
2. A nivel traduccional

Regulacin de la sntesis de las

protenas ribosmicas
Regulacin por ARN antisentido, que
interfiere con la traduccin del ARNm

3. A nivel Post traduccional

Degradacin de protenas
Modificacin covalente de protenas
Regulacin alostrica por
retroalimentacin (Feed-back)
Regulacin Feed-back
Redes de regulacin global

Represin catablica AMPc-

CAP
SOS
Choque trmico
Control estricto
 SOS

En respuesta a
daos en el ADN
RecA adquiere
actividad proteasa,
degrada a LexA
(represor de todo
el sistema) y lo
inactiva
Choque trmico

En respuesta a un
aumento de temperatura
(condiciones de estrs)
se incrementa la
produccin de un factor
sigma alternativo de la
ARNpol ( 32) que
compite con 70 por el
ncleo enzimtico
Se detienen la
transcripcin de ciertos
genes y se transcriben
nuevos genes
 Control estricto
Cuando el aporte de
aminocidos es
insuficiente la bacteria
responde reduciendo al
mnimo la actividad
metablica.
La seal es la presencia de
un ARNt vaco en el sitio
A de un ribosoma.
La protena RelA (factor
estricto) unida al
ribosoma cataliza la
sntesis de guanosina
tetrafosfato (ppGpp), que
acta como efector.