ULTRASTRUCTURA

BACTERIILOR.
ELEMENTELE
PERMANENTE I
FACULTATIVE DE
STRUCTUR
 ELEMENTELE DE STRUCTUR
ALE CELULEI BACTERIENE
Elementele constante (permanente, obligatorii)
- Peretele celular
- Membrana citoplasmatic
- Citoplasma
- Nucleoidul
- Ribosomii
- Mezosomii
Elementele facultative (nepermanente,
neobligatorii)
- Capsula
- Sporul
- Flagelii
- Pilii/fimbriile
- Plasmidele
- Incluziunile celulare
PERETELE CELULAR (PC)

Reprezint un nveli rigid ce

nconjoar protoplastul bacterian.
Lipsete la micoplasme.
Se disting 2 mari grupe de bacterii n
funcie de structura PC:
1. Bacterii gram-negative (G-)
2. Bacterii gram-pozitive (G+)
(1884, savantul danez Christian GRAM).
Elementul comun al ambelor grupe
peptidoglicanul (PG).
 PEPTIDOGLICANUL (PG)
PG structur particular rigid a PC bacterian.
Structura PG:

Heteropolimer macromolecular reticulat, constituit

dintr-un component glicanic i unul peptidic.
Partea glicanic (polizaharidic) este constituit
din catene liniare paralele n care alterneaz N-
acetyl-glucozamina cu acidul N-acetyl-muramic.
Partea peptidic este reprezentat de uniti
tetrapeptidice (izomeri L i D de AA), fixate de
acidul muramic, care pot fi legate intre ele
direct (formand o structur bidimensional, la
bacterii G-) sau prin puni interpeptidice
(structur tridimensional, la bacterii G+).
 Acidul diaminopimelic, izomerii D ai AA i acidul
muramic se ntlnesc doar la celulele procariote.
Fragmente solubile de murein pot stimula
secreia excesiv a citokinelor de ctre
macrofage, prin legarea de receptorii toll-like
sau CD14, inducnd astfel simptome de oc
septic
PG reprezint inta de atac a unor substane:

1. Lizozimul, care taie legturile dintre N-AGA i

acidul N-AM (catena glicanic)
2. Unele antibiotice (beta-lactamine, glicopeptide,
fosfomicina), care perturb procesul de
transpeptidare (formarea punilor
interpeptidice).
PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAM-
POZITIVE
- Uniform
- Grosimea 20-80 nm (pn la 300 nm)
- Componentul major (40-80%) reprezint PG

(structur reticular tridimensional)

- Componente minore:

1. Acizii teichoici (polimeri de glicerol sau ribitol

fosfat), fixai de N-AGA. Traverseaz PG i
creeaz sarcin electric negativ la suprafaa
bacteriei, asigur transferul de ioni i fixarea
unor proteine, funcie antigenic. Pot activa
complementul pe cale alternativ i stimula
secreia citokinelor de ctre macrofage.
2.Acizii lipoteichoici: se fixeaz de MCP i
depesc stratul de PG.
Funcii: identic cu acizii teichoici, intervin n
adeziunea la celule i au un efect toxic
slab.
3. Proteine asociate peretelui celular:
proteina A, coagulaza legat (clumping
factor) i proteina fixatoare de
fibronectin la Staphylococcus aureus,
proteina M la Streptococcus pyogenes (rol
n adeziune la substrate, protecie de
fagocitoz)
4. La unele bacterii G+ (de exemplu:
Mycobacterium, Nocardia) peretele conine
o cantitate important de lipide sau ceruri,
la altele (ex.: streptococi) peretele conine
multe glucide.
PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR GRAM-
NEGATIVE
- Grosimea 10-12 nm
- Neomogen, format din straturi
distincte:
1. PG, stratul intern, constituie 1-10%
din masa uscat a peretelui celular.
Acizii teichoici lipsesc. Nu exista puni
interpeptidice (structur
bidimensional).
2. Membrana extern (ME) dublu
strat lipidic cu proteine nserate
Unele proteine majore - porine, unindu-se n
triplete, particip la formarea porilor,
altele (nonporine) au funcie de receptor
pentru bacteriofagi i pili sau asigur
adeziunea la receptorii celulelor-gazde.
Proteinele minore sunt enzime implicate in
captarea unor substane i transportul
specific transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici
molecule hidrofile i impermeabil pentru
molecule hidrofobe sau amfipatice
3. Lipoproteinele asigur legtura dintre ME
i PG
4. Lipopolizaharidul (LPZ) stratul extern al
peretelui
gram-negativ. Este format din:
- Lipidul A (endotoxin), glicolipid
ancorat n ME. Stimuleaz formarea
i secreia citokinelor. Determin efectul
toxic al bacteriilor G- manifestat n urma
lizei celulare.
- Polizaharide complexe, fixate pe
lipidul A. Particip n procese de penetrare
i transport a unor substane, confer specificitate
de gen (antigenul R)
- La exterior, subuniti oligozaharidice liniare
sau ramificate. Creeaz sarcin negativ la
suprafaa bacteriei (mpiedic fagocitoza,
accesul moleculelor toxice), confer specificitate
de specie sau tip (antigenul O)
Spaiul periplasmic este regiunea
dintre ME i MCP. Conine PG i
proteine-enzime implicate n
transport, digestia nutrienilor,
protecia contra substanelor toxice
(ex.: beta-lactamazele, care distrug
antibioticele beta-lactamice).
La bacteriile G+ aceste enzime sunt
secretate n mediul extern.
La unele bacterii G- se gsesc
proteine ale sistemelor de
secreie (I VI). Reprezint
cilindre proteice ce traverseaz
nveliurile celulei bacteriene.
Asigur transportul proteinelor
(toxine, enzime) din interiorul
celulei bacteriene spre exterior.
 FUNCIILE PERETELUI CELULAR
1. Confer forma bacteriilor
2. Barier osmotic i mecanic
3. Barier de permeabilitate selectiv
4. Funcie antigenic (Ag O i R)
5. Particip la procesele de cretere i diviziune
celular
6. Funcie de receptor
7. Responsabil de aderena specific la
substrate
8. Componente ale peretelui celular (lipidul A,
acizii lipoteichoici, fragmente de PG)
contribuie la producerea citokinelor i
activarea complementului pe cale alternativ
cu manifestarea ocului septic (endotoxinic)
9. Reprezint inta de atac a unor enzime i
antibiotice
Evidenierea peretelui celular: microscopia electronic,
metode speciale de colorare, plasmoliz (n mediu
hipertonic), plasmoptiz (n mediu hipotonic).
 Determinarea tipului peretelui
celular
COLORAIA GRAM (condiionat de structura i
compoziia chimic a peretelui celular)
1. Colorarea frotiului fixat cu violet de genian
(citoplasma bacteriilor se coloreaz n violet)
2. Splarea cu ap apoi tratarea cu soluie
Lugol (I2 +KI) fixeaz colorantul n celule
prin formarea complexului insolubil violet-
iodin
3. Decolorarea cu alcool 95%. Bacteriile G+
pstreaz colorantul, cele G- se decoloreaz.
4. Recolorarea bacteriilor G- cu fucsin apoas
Rezultat: bacteriile G+ apar colorate n violet,
bacteriile G- n rou.
 Mecanismul: Peretele G- este subire,
conine multe lipide (20%), care sunt
dizolvate de alcool, porii au diametrul
mare, pH citoplasmei este slab acid (se
decoloreaz cu alcool);
Peretele G+ este gros, nu conine lipide sau
foarte puine, alcoolul deshidrateaz
peretele i reduce diametrul porilor, pH
acid
(colorantul nu este splat din citoplasm)
Utilizarea practic a coloraiei Gram:

1. Diagnostic
2. Orientare n tratament (sensibilitate
diferit la antibiotice)
Acidorezistena bacteriilor
Unele bacterii G+ (Mycobacterium,
Nocardia) conin n componena
peretelui multe lipide, acizi grai i ceruri
(70% din greutatea peretelui). Aceasta le
confer rezisten important n mediul
extern i sensibilitate distinct la
antibiotice.
Coloraia Ziehl-Neelsen permite
diferenierea acestor bacterii dup
proprietatea lor de acido-alcoolo-
rezisten.
Peretele celular al bacteriilor
acidorezistente
 METODA DE COLORARE ZIEHL-
NEELSEN
Principiul: bacteriile acido-rezistente
colorate cu fucsin fenicat nclzit nu
pot fi decolorate cu acizi sau alcool.
1. Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat,
nclzind lama pn la apariia vaporilor
(repetare 2 - 3 ori)
2. Se cltete cu ap, apoi se trateaz cu
soluie de acid sulfuric de 5%
3. Dup splare frotiul se recoloreaz cu
albastru de metilen
Rezultatul: bacteriile acido-rezistente
rmn colorate n rou, cele acido-
nerezistente se decoloreaz, apoi se
recoloreaz n albastru
 In condiii de laborator dup ndeprtarea peretelui
celular cu ajutorul lizozimului, se obin protoplati
n cazul bacteriilor Gram pozitive i sferoplati n
cazul bacteriilor Gram negative, acestea
prezentnd inca resturi de perete celular.
Protoplatii bacterieni sunt sensibili la variaiile
presiunii osmotice, pstrnd ns o serie de
proprieti ale celulelor bacteriene, cum ar fi:
capacitatea de sintez proteic i a acizilor nucleici
i de reactii ale metabolismului energetic,
Viabilitatea lor se poate menine, fiind posibil chiar
procesul de diviziune, iar in anumite condiii poate
avea loc procesul de regenerare a peretelui celular
i trecerea la forma vegetativ normal.
Bacteriile care prezint un deficit n PG sunt numite
forme L (descoperite la institutul Lister). Ele se pot
forma in ma/o sub influena antibioticelor
betalactamice. Sunt instabile fa de variaii
osmotice i rezistente la betalactamice. Pot fi
reversibile sau ireversibile.
MEMBRANA CITOPLASMATIC (MCP)

Prezint o structur membranar

clasic: dublu strat fosfolipidic n
care sunt nserate proteine i
glicoproteine. Lipsesc sterolii.
La bacteriile gram-pozitive MCP
formeaz invaginaii, mezosomi
(septali, laterali), n care se
conin enzime, citocromi i
proteine ale sistemului
transportor de electroni.
Proteinele MCP:
1. PLP (Proteine de Legare a Penicilinei) -
PBP de la penicillin-binding proteins - (sunt
inactivate de penicilin i antibiotice beta-
lactamice). Reprezint enzime ce
catalizeaz legturile dintre catenele
peptidice din PG reacia de
transpeptidare
2. Componente ale sistemului de transport
(permeaze)
3. Proteine ale sistemelor de secreie (I VI)
(la bacteriile gram negative)
4. Proteine receptori
5. Enzime ale lanului respirator (in special
in mezosomi)
 Funciile membranei
citoplasmatice
1. Barier osmotic i de permeabilitate selectiv
2. Asigur transportul activ prin intermediul
permeazelor
3. Excreia enzimelor hidrolitice, toxinelor, etc
4. Sediul metabolismului energetic (mezosomi)
5. Intervine n diviziunea celular (mezosomi)
6. Particip n sinteza PG i a fosfolipidelor
7. Particip n chemotaxie prin receptori specifici
8. Asigur transmiterea informaiei din mediul
nconjurtor spre interiorul celulei bacteriene
 Evidenierea MCP
1. Microscopia electronic

2. Fenomene de plasmoliz (n mediu hipertonic

retracia citoplasmei) sau plasmoptiz (n mediu
hipotonic liza celulei, desprinderea MCP de
peretele celular)
 CITOPLASMA
- Necompartimentat
- Lipsesc organitele celulare
- Format din ap (80%), conine
nucleoidul, ribosomi (apr. 20 000 per
celul), incluziuni, plasmide, ioni, enzime,
deeuri, etc.
- Consistena dens (stare de gel) asigur
permanena mediului intern
- pH acid

Funcii: sediul tuturor proceselor

metabolice
Evidenierea: prin orice metod de
colorare
 NUCLEOIDUL BACTERIAN
- Constituit din ADN bicatenar circular, uneori
liniar, plasat liber n citoplasm. ADN este
repliat n bucle i stabilizat prin ARN i
proteine. Fiecare bucl este hiperspiralizat
sub aciunea ADN-girazei i topoizomerazei
IV (se ntlnesc doar la bacterii). Pe ADN
sunt fixate enzime de sintez (ADN - , ARN
polimeraze)
Funcii: dirijeaz activitatea celulei (procesele
de sintez, creterea, multiplicarea,
diferenierea celulei, replicarea proprie, etc)
Evidenierea:
- Microscopia electronic
- Metode speciale de colorare (Feulgen)
Feulgen: HCl.aldehida.react.
Shiff.culoare rosie
 PLASMIDELE
- Elemente genetice (ADN) extracromosomiale,
capabile de replicare autonom. Confer
bacteriei caractere suplimentare. Se transmit
celulelor-fiice
la diviziunea bacteriei. Plasmidele conjugative
F se transmit prin conjugare.
Episom - plasmida integrat n cromosom
- Tipuri de plasmide:
1. F factor de fertilitate (sinteza pililor F, cu rol
n conjugare).
2. R rezisten la antibiotice
3. Ent producerea enterotoxinei
4. Hly producerea hemolizinei
5. Col producerea de bacteriocine
Utilizarea practic: n tehnologii de ADN-
recombinant
 CAPSULA
- nveliul extern neobligator al unor bacterii.
Reprezint polimeri organici sintetizai n mediul natural
de via al bacteriilor (exemplu: n macroorganism).
Se disting:
- Capsula adevrat (peste 0,2m), vizibil la
microscopul optic
- Microcapsula, detectat la microscopul electronic
- Capsula flexibil (slime, glicocalix), o reea lax de
fibre polizaharidice, care difuzeaz n mediu. Nu se
evideniaz microscopic. Asigur formarea
biofilmelor bacteriene ansamblu structurat de
celule bacteriene nglobate ntr-o matrice de polimeri
de origine bacterian, care poate adera la suprafee
inerte (ex.: cateter, stimulator cardiac, endoproteze,
sonde de intubare, etc) sau esuturi vii.
 Compoziia chimic a capsulei: ap
i substane organice (polizaharide,
mucopolizaharide, peptide)
Bacillus anthracis acid glutamic

Neisseria meningitidis, Streptococcus

pneumoniae polizaharide
Streptococcus pyogenes acid
hialuronic
 Funciile capsulei:
- Barier de permeabilitate pentru substane
toxice (antibiotice, ioni metalici)
- Barier protectoare faa de factori
antiinfecioi (complement, fagocite),
bacteriofagi, protozoare
- Rezerv nutritiv
- Asigur aderarea bacteriei la substrate
esuturi sau suporturi inerte (placa
dentar, biofilm pe catetere, proteze,
instrumente, etc)
- Specificitate antigenic de specie sau tip
(Ag K)
 Evidenierea capsulei
Coloraia Burri-Gins (metod negativ)
- Pe lam se amestec suspensia bacterian
cu tu de China, se etaleaz, se usuc
- Frotiul se fixeaz cu alcool
- Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas

Rezultatul: capsula apare ca un halou

incolor pe fondul negru. Citoplasma
bacteriilor se coloreaz n rou.
Coloraia Giemsa (capsula se coloreaz n
roz) coloraie pozitiv a capsulei
 SPORUL BACTERIAN

- Reprezint o difereniere celular care

asigur supravieuirea bacteriei n condiii
nefavorabile ale mediului extern.
Bacterii sporogene Bacillus, Clostridium.
Aceste mi/o se prezint sau sub form
vegetativ, metabolic activ, sau sub form
inert metabolic sporul.
Procesul de formare a sporului este numit
sporogenez, sporulare. Este declanat n
special de carene nutritive sau condiii
nefavorabile ale mediului extern.
 Stadiile sporogenezei (durata 36-72 ore)
Stadiul I se formeaz filamentul axial, compus
din ADN
Stadiul II divizarea asimetric a citoplasmei
printr-un sept, formarea presporului, care
conine un filament de ADN. MCP nglobeaz
presporul.
Stadiul III nglobarea complet a presporului,
care este limitat de 2 membrane
Stadiul IV formarea cortexului de PG ntre cele 2
membrane
Stadiile V-VI formarea tunicii proteice la exterior
i maturarea sporului. Uneori se formeaz un
nveli extern suplimentar - exosporiu
Stadiul VII sporul matur este eliberat iar celula-
mam se dezintegreaz
 Proprietile sporului
- Inactiv metabolic
- Coninut sczut de ap liber
- Coninut mare (pn la 10%) de
dipicolinat de calciu
- Rezistent la temperaturi i pH
extreme, desicare, radiaii, ageni
chimici i fizici

Forma sporului (sferic, oval) i poziia

n celul (central, subterminal,
terminal) sunt caractere utile n
identificarea bacteriilor.
n condiii favorabile sporul germineaz,
dezvoltndu-se forma vegetativ.
Evidenierea sporilor: colorarea dup AUJESZKY
(sporul se coloreaz n rou, iar citoplasma n
albastru)
 GRANULAIILE DE VOLUTIN
Reprezint polimeri anorganici de
polimetafosfati. Servesc n calitate de rezerv
de fosfai i pot interveni n metabolismul
energetic.
Interesul medical: la agentul difteriei,
Corynebacterium diphtheriae, granulele de
volutin se localizeaz la extremitile celulei,
iar la corynebacterii nepatogene sunt
repartizate neuniform n citoplasm.
La tratarea cu unii colorani bazici granulele de
volutin se coloreaz n alt culoare, de ex. n
rou-violet la colorarea cu albastru de metilen
fenomenul metacromaziei.
Evidenierea: metoda Loeffler (cu albastru de
metilen), metoda Albert
 Coloratia Albert
1. Frotiul fixat se coloreaza cu solutia Albert A
(toluidin albastru, verde de malahit, acid
acetic, alcool etilic) 5 min
2. Se inlatura colorantul si fara a spala se
aplica sol Albert B (sol apoasa de I2+KI) 2
min
3. Se inlatura reactivul, se spala, usuca si se
examineaza

Rezultat: Citoplasma verde, granulatiile

albastru-inchis
 FLAGELII
structuri filamentoase proteice, ntlnite la
bacterii, bacili, spirili i spirochete.
Funcii: intervin n mobilitatea bacterian,
reprezint Ag H al bacteriilor.
Structura flagelului:
- Filamentul, structur helicoidal constituit
din fibrile proteice (flagelin) rsucite
- Corpul bazal, constituit dintr-un ax rigid i
mai multe inele ce servesc la fixarea
flagelului (la nivelul MCP i PC).
- Crligul de articulaie

Mobilitatea bacteriei este asigurat de

rotaia flagelului (30 70 micrometri/s).
Tipurile de bacterii dup
numrul i poziia flagelilor:
Bacterii monotriche

Bacterii lofotriche (un mnunchi de

flageli la o extremitate)
Bacterii amfitriche (cte un flagel
sau un mnunchi de flageli la
fiecare extremitate)
Bacterii peritriche (flageli pe toat
suprafaa celulei)
La spirochete flagelii se plaseaz n
spaiul periplasmic flageli interni,
periplasmatici.
 Evidenierea flagelilor
I - metode directe
- Microscopia electronic

- Coloraia special Loeffler (mordansarea cu

tanin, sruri de aluminiu, Fe, apoi colorarea cu fucsin sau
albastru de metilen)
II metode indirecte
(studierea mobilitii
bacteriilor)
- Studierea preparatelor native
pictur suspendat sau
ntre lam i lamel
(microscopia cu contrast de
faz sau pe fond negru)
- nsmnarea culturii bacteriene n medii
semisolide (se observ turbiditate)
- Creterea culturii n vl pe suprafaa
mediului solid
FIMBRIILE / PILII
Pilii comuni (fimbriile) elemente
proteice
fine, rigide, scurte repartizate pe
suprafaa celulei bacteriene G - n special.
Sunt formate din subuniti proteice
identice (pilina), implantate n ME.
Numrul fimbriilor per celul: zeci sute

Funcii: asigur adeziunea bacteriilor la

suprafee inerte, la celule sau alte
bacterii, reprezint antigenul F
 Pilii
conjugativi structuri capiliforme
de natur proteic, prezeni n numr
de 1-10 per celul (numai la
bacteriile ce gzduiesc plasmide
conjugative F).
Funcii: transferul de ADN prin
conjugare, receptori pentru unii
bacteriofagi
Evidenierea pililor: microscopia
electronic