Microbiologie cu Virusologie

i Imunologie

Valentina VOROJBIT
d. . m., confereniar universitar
ntroducere n microbiologie
Metodele microbiologice de
diagnostic
Clasificarea i nomenclatura
microorganismelor
Morfologia bacteriilor
Microbiologie (mikros bios logia mic,
via, studiu). Microbiologia studiaz
microorganismele, activitile lor i influena
lor asupra oamenilor i altor organisme.
Microorganisme / microbi organisme
microscopice, cu dimensiuni de ordinul m
(10-6 m) sau nm (10-9 m).
Mi/o reunesc bacteriile i alte tipuri de
organisme: alge, ciuperci microscopice
(fungi/micete), protozoare, virusuri i
agenti subvirali, de ex. prioni.
 Aspecte istorice
Din antichitate se presupunea existena mi/o
Robert Hooke a susinut existena
microorganismelor n 1660 n lucrarea sa Micrografia.
n 1676, Antonie van Leeuwenhoek a fost primul care a
demonstrat, cu ajutorul microscopului, existena mi/o (bacterii).
Louis Pasteur a reuit, n 1862, s infirme teoria generaiei
spontane, i s confirme teoria celular (sau teoria germenilor).
A pus bazele tehnicilor moderne de sterilizare.
Termenul microb a fost utilizat n 1878 de
chirurgul francez Charles-Emmanuel Sedillot.
n 1884, medicul german Robert Koch public
lucrarea sa, Postulatele lui Koch.
 LUMEA MICROBIAN

Vrsta (3,5 mlrd ani!!!)

Abundena i diversitatea
- 60% din biomas;
- ap, aer, sol - scoara terestr la 15 km!,
surse termale la 100 grade C;
- 9300 specii descrise mai puin de 1% din apr. 107 - 109
specii necultivabile n laborator
Informaia genetic
- genomul Pseudomonas aeruginosa - 5000 gene,
- diversitate genetic superioar eucariotelor, schimb
intens de material genetic
Sisteme eficiente de percepere a lumii, comunicare
i adaptare la condiii variate ale mediului
 Microbiologia studiaz:
forma mi/o
structura
nutriia
metabolismul
creterea i multiplicarea mi/o
urmrete relaiile mi/o cu
organismele-gazd i cu mediul
ambiant
 DE CE STUDIEM MICROORGANISMELE?
Studiul mi/o utile, inofensive
- Producerea antibioticelor
- Obinerea medicamentelor (streptokinaza, insulina),
aminoacizilor, vitaminelor, vaccinurilor, etc. prin
biotehnologii sau tehnologii de ADN recombinant
- Producerea alimentelor: pine, unt, brnz, cacaval,
chefir, yaurt, oet, alcool, cacao, cafea, etc.
- Rol de insecticide biologice
- Fabricarea plasticului biodegradabil
- Descompunerea deeurilor i metanului
- Extragerea metalelor din minerale (Cu, Au, Li, etc)
- Asigurarea rolului major n ciclurile geochimice, etc
Studiul mi/o patogene i oportuniste
- Prevenirea i controlul maladiilor infecioase
 Disciplinele microbiologice n raport cu:
Particularitile biologice ale mi/o:
Algologia, Protozoologia, Micologia, Bacteriologia,
Virologia, Parazitologia
Aplicaia practic: Microbiologia medical (umana,
veterinar), industrial, alimentar, agricol,
farmaceutic, biotehnologia microbian, etc
Habitatul: Microbiologia solului, Microbiologia
marin, Astromicrobiologia, Aeromicrobiologia, etc
Taxonomia microbian
Genetica microbian
Ecologia microbian
Microbiologia molecular
Nanomicrobiologia
 MICROBIOLOGIA MEDICAL

STUDIAZ:
Relaiile dintre microorganisme i gazda lor
uman
Capacitile patogene ale mi/o
Capacitile antiinfecioase ale gazdei
Principiile i metodele diagnosticului
etiologic al infeciilor
Bazele terapiei antimicrobiene
Bazele profilaxiei antimicrobiene
 METODELE MICROBIOLOGICE
DE DIAGNOSTIC
DIAGNOSTICUL DIRECT
Const n detectarea agentului
patogen, a componentelor lui sau a
unui produs (ex. toxina)
n prelevate de la bolnav sau din mediul extern
1. Examenul microscopic - studierea mi/o n
stare vie/nativ sau n frotiuri colorate. Este o
metod de orientare. Informeaza despre
prezena bacteriilor, forma lor, structura,
numrul.
2. Examenul bacteriologic izolarea
pe medii nutritive a culturilor pure de bacterii,
care vor fi identificate i testate la sensibilitate
fa de antibiotice

3. Depistarea antigenelor microbiene

solubile n lichide biologice
(ser sangvin, LCR, urin)
4. Examenul biologic (metoda experimental)
inocularea directa a produsului patologic la animale de
laborator receptive.
Mi/o se multiplic provocnd maladia
tipic. Din lichide biologice sau esuturi
afectate bacteria poate fi izolat i
identificat.

5. Identificarea ADN sau ARN microbian prin tehnici de

biologie molecular
 DIAGNOSTICUL INDIRECT (imunologic)

1. Serodiagnosticul depistarea i titrarea

anticorpilor specifici n serul bolnavului. Ei apar
peste 7-10 zile de la debutul maladiei si persist
deseori dup vindecare
2. Intradermoreaciile (metoda alergic)
ntroducerea pe cale epidermic sau intradermic
a alergenului microbian i apariia, peste 2-4 zile,
a unei reacii celulare locale (eritem, infiltrat).
Reacia pozitiv semnific o stare
de hipersensibilitate specific (ntlnire
repetat cu acest agent)
 CLASIFICAREA I NOMENCLATURA
MICROORGANISMELOR

Lumea microbian este extrem de divers,

ceea ce determin necesitatea aranjrii lor n
grupe conform asemnrii lor.
Se disting 3 noiuni:
1. Taxonomie tiina despre clasificare
2. Clasificare aranjarea organismelor n grupe
sau taxoni n funcie de asemnri sau nrudiri
3. Nomenclatura numirea tiintific a grupelor
taxonomice conform unor reguli internaionale
 Clasificarea fenotipic (prima tentativ Carl von
Linne n sec. XVII) - reunirea mi/o n baza
caracterelor fenotipice comune (caractere
morfologice, de cultur, fiziologice, biochimice,
antigenice, etc)
Clasificarea genotipic/molecular
- Gradul de omologie a secvenelor nucleotidice ale
ADN microbian. Tulpinile cu gradul de omologie de
cel putin 70 % aparin unei specii, de 30 % -
aceluiai gen, etc
- Gradul de omologie a secvenelor nucleotidice ale
ARN ribosomal
- Coninutul relativ de guanin+citozin (GC%) al ADN
purificat. La bacterii variaz ntre 25 i 75 %.
Clasificarea filogenetic
Determin locul mi/o ntr-un arbore filogenetic i se
bazeaz pe studiul fosilelor sau al HLA.
Principalele grupe taxonomice (taxoni)
-Domeniu
-Regn
-Tip
-Clas
-Ordin
-Familie
-Gen
-Specie (unitate fundamental)
n cadrul speciilor pot fi delimitai taxoni
infraspecifici (subspecii variante / tipuri), care
prezint diferene minore n activitatea biochimic
sau fiziologic (biovar), n structura antigenic
(serovar), n gradul de patogenitate (patovar), n
sensibilitatea la bacteriofagi (lizovar) sau la
antibiotice (antibiovar).
Pot fi utilizai ca markeri epidemiologici pentru
descifrarea unor focare epidemice (infecii
nozocomiale, toxiinfectii alimentare, etc)
Culturile microbiene ce aparin unei specii, dar sunt
izolate n laborator din diverse prelevate sau n
perioade de timp diferite reprezint tulpini
bacteriene (sue). Tulpinile corespund n general
caracterelor de specie, dar pot manifesta variaii
nesemnificative.
Clasificarea internaional a microorganismelor:
International Journal of Systematic Bacteriology,
Bergey's Manual of Systematic Bacteriology
Se disting (Carl Woese, 1977):
I. Forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni)
II. Forme celulare, repartizate n 3 domenii:
- Bacteria procariote (bacterii adevrate)
a) Bacterii cu perete celular fin, gram-negative;
b) Bacterii cu perete celular gros, gram-pozitive;
c) Bacterii lipsite de perete celular (micoplasme)
- Archaea procariote, perete celular fr
peptidoglican, cu habitat n condiii extremale
- Eukarya eucariote. Include regnurile Fungi,
Animalia (subregnul Protozoa) i Plantae
 Nomenclatura mi/o

Numirea mi/o este stabilit de ctre Comitetul

Internaional de Bacteriologie Sistematic.
Nomenclatura taxonilor are la origine un substantiv
grec sau latin, care definete cel mai evident caracter
al mi/o studiate, la care se adaug un anumit sufix
latin.
Ordinul Actinomycetales, Spirochaetales
Familia Enterobacteriaceae, Spirochaetaceae
Genul Staphylococcus, Leptospira, Clostridium,
Pseudomonas
Specia denumire binar (Gen + specie):
Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
Mycobacterium tuberculosis, etc.
EXEMPLU:

Specia Escherichia coli

Genul Escherichia
Familia Enterobacteriaceae
Ordinul Enterobacteriales
Clasa Gammaproteobacteria
Tipul Proteobacteria
Domeniul - Bacteria
 BACTERIOLOGIA GENERALA.
CELULA BACTERIAN

Bacteriile sunt organisme unicelulare

procariote autonome, cu dimensiuni ntre
0,2 i 10 m (Spirochaeta 250 m) i
care difer esenial de celulele eucariote
animale sau vegetale.
 0
Mycoplasma genitalium 0,4 m
Staphyloccocus aureus 0,9 m
2
Haemophilus influenzae 1,2 m

Escherichia coli 1,5 m

4

Bacillus megaterium 4,0 m

6

10
Eritrocite 8,0 m

12
 Celula eucariot Celula procariot
Aparatul nuclear nucleu cu nucleoli, Molecul de ADN dublucatenar
nconjurat de membran nuclear circular,
lipsa membranei nucleare
Cromozomi cu structur complex, Cromozom unic, structur
histone asociate, set diploid simpl
Celula se divide prin mitoz sau meioz Diviziune binar

Lipsa peretelui celular (n caz de prezen Prezena peretelui celular ce

conine chitina sau celuloza) conine obligator peptidoglican

Membrana citoplasmatic conine Absena carbohidrailor i

carbohidrai i steroli sterolilor n MCP
Prezena organitelor celulare Absena organitelor celulare,
citoplasma omogen, ne-
compartimentat
2 tipuri de ribosomi n citoplasm i n Toi ribosomii sunt identici
mitocondrii sau cloroplaste
Coeficientul de sedimentare al 70 S (50S , 30 S)
ribosomului: 80 S (citoplasma)
70 S (mitocondrii)
 MORFOLOGIA BACTERIILOR

Morfologic se disting 4 grupe de bacterii:

Forme sferice (coci)
Forme alungite, cilindrice (bastonae)
Forme ncurbate/spiralate
Bacterii polimorfe: Actinomyces, Rickettsia,
Chlamydia, Mycoplasma
Formele sferice (coccus)
n funcie de planurile de diviziune i poziia
celulelor-fiice dup diviziune, cocii prezint
urmtoarele moduri de grupare:
- Diplococi (Diplococcus) perechi (neisserii -
bob de cafea, pneumococi - lanceolati)
- Streptococi (Streptococcus) - lanuri
- Tetracoci (Micrococcus) cte 4 celule
- Sarcine (Sarcina) pachete din 8-16-32 coci
(sarcio a lega)
- Stafilococi (Staphylococcus) grmezi
neregulate de coci (staphyle - ciorchine)
 Formele alungite, cilindrice
(bastonae)
1. Bacterium bastonae cu capetele rotunjite,
nu formeaz spori (Mycobacterium,
Corynebacterium, enterobacterii, etc)
2. Bacillus bastonae mari cu capetele retezate,
formeaz spori ce nu depesc diametrul celulei
(ex.: Bacillus anthracis). Posibil aranjarea n
lanuri - streptobacili
3. Clostridium bastonae cu capetele rotunjite,
formeaz spori ce depesc diametrul celulei
(ex.: Clostridium tetani, Clostridium botulinum,
C. perfringens, etc)
Bacterium
Bacillus
Clostridium
 Formele ncurbate (spiralate)
1. Vibrio (de la cuv. lat. vibrio - tremurtor)
bastonae ncurbate (1/2 spir, aspect
de virgul) (ex.: Vibrio cholerae)
2. Spirillum celule spiralate rigide
-Campylobacter, Helicobacter 2 spire,
aspect de pasre n zbor (ex.:
Campylobacter jejuni)
3. Spirochaeta celule spiralate, cu 5-25
spire, flexibile (ex.: Treponema,
Leptospira, Borrelia)
Vibrio
Spirillum
Spirochaeta
 EXAMENUL MICROSCOPIC

Studiaz morfologia i structura bacteriilor,

precum i caracterele lor tinctoriale.
Examenului microscopic pot fi expuse lichide
biologice sterile (snge, LCR, lichid pleural),
precum i prelevate nesterile din cile respiratorii,
tubul digestiv, aparatul uro-genital, tegument,
urechi, ochi, etc
Examenul microscopic poate fi efectuat:
1. n stare nativ (preparate umede, necolorate:
ntre lam i lamel, pictur suspendat).
Studiaz morfologia, mobilitatea bacteriilor,
unele activiti (ex.: sporogeneza)
2. n frotiuri (preparate fixate i colorate)
 Prepararea frotiului

1. Etalarea materialului microbian (produs

patologic, cultur microbian) n strat subire pe
suprafaa unei lame de sticl degresat
2. Uscarea
3. Fixarea (termic, chimic). Omoar microbii i
marete afinitatea lor pentru colorani
4. Colorarea. Asigur contrastul dintre microbi i
fondul preparatului
5. Examinarea frotiului la microscopul optic cu
imersie
Caracter tinctorial capacitatea bacteriilor
de a fixa diferii colorani
Coloranii bazici (violetul de genian sau
de metil, fucsina bazic, albastrul de metilen,
vezuvina, chrizoidina, etc) au afinitate pentru
structurile acide ale celulei bacteriene
Tipuri de coloraii: simple, complexe
(difereniale, speciale)
ETAPELE ISTORICE DE EVOLUIE
A MICROBIOLOGIEI
I EMPIRIC (pn n sec. XV)
Hippocrate considera c maladiile infecioase sunt cauzate de
modificarea aerului prin miasme
Girolamo Fracastoro, de la Universitatea din Padua, a presupus
existena unei seminaria contagiosus , mi/o infectante, capabile s
se multiplice

II MORFOLOGIC (sec. XVI XVIII)

Antonie van Leeuwenhoek, 1673 prima observare i descriere a
mi/o

III - FIZIOLOGIC (sec. XIX)

Theodor Schwann i Frantz Schultze discrediteaz teoria generaiei
spontane. Louis Pasteur, Robert Koch confirm teoria germenilor.
Louis Pasteur a demonstrat specificitatea
proceselor fermentative (bolile vinului), a
identificat agenii cauzali ai bolii viermilor de
mtase, a preparat vaccinuri eficiente pentru
prevenirea turbrii, antraxului, holerei ginilor, a
susinut necesitatea sterilizrii instrumentelor,
bandajelor, etc.
Robert Koch a utilizat frotiul, a ntrodus
mediile de cultur solide, a izolat agentul
antraxului i al tuberculozei. Autor al teoriei de
confirmare a rolului etiologic al unui mi/o
(postulatele lui Koch)
Ilia Mecinicov argumenteaz rolul antagonist al
florei intestinale normale, a descoperit fagocitoza
i rolul inflamaiei n aprarea antimicrobian.
Alexander Fleming descoper penicilina
Emil Roux propune mediul de cultivare a agentului
difteriei, obine i utilizeaz serurile imune antitoxice
contra difteriei, fondator al imunitii umorale
Victor Babe fondator al microbiologiei n Romnia,
autor al primului manual de microbiologie. Studiaz
rabia.
Ion Cantacuzino a studiat patogeneza holerei,
tuberculozei, vaccinul i vaccinarea antiholerica.
Fondatorul colii de microbiologie din Romnia

http://www.1tv.ru/doc/pro-nauku/bakterii-voyna-mirov-dokumentalnyy-film