GENETICA

Mgr. GIOVANNI ARAGON ALVARADO

Composicin y estructura del material
gentico
 NUCLEOSIDO

NUCLEOTIDO
Composicin y estructura de
los cidos nucleicos

.-.-.-..
 Reglas de Chargaff

1. Proporcin de purinas = Proporcin de pirimidinas

A+G=C+T

2. A=T

3. G=C
 1953. Ao culminante:
J. Watson y F. Crick resuelven la
estructura tridimensional del DNA
(Nature 171: 737-738)

Watson y yo hemos
encontrado el
secreto de la vida
Significado de las reglas de Chargaff

Complementariedad de las bases

Interpretacin del patrn difraccin de rayos X del DNA

Rosalind E.
Franklin

Crick
Doble hlice, formada La estructura se mantiene
por cadenas orientadas gracias a enlaces de
en direcciones opuestas hidrgeno entre las bases
(antiparalelas). nitrogenadas que se
encuentran orientadas hacia
el interior de las cadenas
 Desnaturalizacin del DNA
Separacin de las dos hebras por calor
Una mayor proporcin G-C tiene una mayor temperatura
de desnaturalizacin (fusin)
100

80
Porcentaje G + C

60

40

20

70 80 90 100 110
Temperatura de fusin (desnaturalizacin)
Hlices levgiras y dextrgiras
DNA-B dextrgira
El DNA
contiene informacin
digital cuaternaria en
secuencias unidimensionales
de monmeros A,T,G,C
(cristal aperidico)
 La estructura del DNA suministra una
explicacin asombrosamente
simple del fenmeno de la herencia
La estructura explica:

La naturaleza de la secuencia lineal de los genes

(informacin digital cuaternaria en secuencias
unidimensionales de monmeros A,T,G,C)
El mecanismo de replicacin exacta de los genes
La naturaleza qumica de las mutaciones
Por qu la mutacin, la recombinacin y la
expresin gnica son fenmenos separables a nivel
molecular
 Esencial a la relacin ntima
entre estructura molecular y
funcin gentica del DNA es
el concepto de molde

La complementariedad de las bases

nitrogenadas permite que la
secuencia de una cadena sencilla de
DNA acte como un molde para la
formacin de una copia
complementaria de DNA
(replicacin) o de mRNA
(transcripcin)
Los complejos Cdc28/Ciclina determinan una funcin de la
quinasa a lo largo del ciclo. Los complejos Cdc28/Ciclinas Cln
activan en G1 el paso por Inicio, la aparicin de la yema y la
degradacin de Sic1, un inhibidor de los complejos quinasa
Cdc28/Clb, de modo que inactivan la capacidad de las clulas
haploides de pararse en G1 como respuesta a las feromonas
sexuales, lo que proporciona
el carcter de irreversibilidad
a la entrada en el ciclo celular.
Los complejos Cdc28/Ciclinas
Clb activan el inicio de la
replicacin, regulan la
formacin de los husos
mitticos y la divisin
nuclear y el crecimiento
isomtrico de la
yema en G2 y M.
 El Modelo del Replicn, propuesto para E. coli (Bell et al., 1993) predice la
existencia de secuencias de ADN donde se inicia la replicacin. Posteriormente
fueron identificadas en S. cerevisiae y se conocen como Secuencias de
Replicacin Autnoma (SRA). Los cromosomas de eucariotas tienen varios
orgenes de replicacin. Los trabajos de Bell y Stillman de 1993 describieron el
Complejo de Reconocimiento del Origen (CRO). Estas protenas son esenciales
para la viabilidad celular, pero no suficientes, para iniciar la replicacin del
ADN. Otras protenas iniciadoras se descubrieron despus, del tipo de Cdc6, las
seis de la familia Mcm, la quinasa Cdc7 - y su ciclina Dbf4 - y Cdc45.
Se define un estado post-replicativo del origen durante las fases S, G2 y M (slo
permanecen unidas a los orgenes las protenas CRO) y un estado pre-
replicativo durante G1 (con el resto de las protenas iniciadoras formando parte
del complejo). Asi se encuentra el estado de complejo pre-replicativo (pre-RC) y
complejo post-replicativo (post-RC).
 Replicacin del DNA
Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una
nueva cadena
El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958)
demuestra que la replicacin es semiconservativa

Mathew Meselson Frank Stahl

 Replicacin del DNA
Enzimas que sintetizan (replican) el DNA
E. coli
DNA polimerasa I (rellena huecos y repara)
DNA polimerasa II y III (funcin principal en la
sntesis)
Aade bases en ambas cadenas en la direccin
5 3
Requiere un 3 OH final
Eucariotas
5 polimerasas
y principal en replicacin
, y exonucleasas
Correccin de pruebas: actividad 3 5
exonucleotdica. Sustituye bases mal emparejadas
(10-5) por correctas (10-7)
 3 5
Las polimerasas
conocidas aaden
nucletidos
solamente en la
direccin 5 3
 Replicacin del DNA
Replicacin: continua (cadena adelantada) y
discontinua (cadena retrasada)

Discontinua
Cebador (pequeo RNA 2-60 nucletidos
aadido por enzima primasa o RNA pol que
provee 3 OH)
Fragmento de Okazaki por DNA pol III
(1500 bp en procariotas y 150 en
eucariotas)
Pol I elimina cebador 3 -> 5 y llena huecos
(gap)
Ligacin (DNA ligasa, enlace fosfodister)
Polimerasa III

Polimerasa I
 Replicacin del DNA
Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en
eucariotas Horquilla
La replicacin es bidireccional replicacin
En el modelo del crculo
rodador una endonucleasa
corta una de las hlices
(hlice externa en el
esquema) y el extremo 5' se
fija a la membrana. El
extremo 3'OH producido por
el corte lo utiliza la ADN
polimerasa como cebador
para ir aadiendo nucletidos
y copiando la otra hlice
(hlice interna en el
esquema). Por el otro
extremo de la hlice cortada
(el extremo 5') tambin se va
sintetizando una nueva hebra.
 Replicacin del DNA

El replisoma: complejo enzimtico de la

replicacin que coordina la sntesis de las dos
cadenas
Primosoma: formado por dos enzimas
Primasa
Helicasa (desenreda el DNA)
Protena de unin a cadena sencilla, ssb (Unin
Y, estabiliza el DNA de cadena sencilla)
Topoisomerasas tipo I y II -DNA ligasa-
(relajacin del superenrollamiento)
En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orgenes
de replicacin (~500 en levaduras y 60000 en
mamferos). Cada unidad de replicacin es un replicn.
La replicacin es bidireccional
 Replicacin en procariotas
ADN Pol I ADN Pol II ADN Pol III

Estructura 109.000 90.000 900.000

PM (dalton)
Constitucin Monmero Monmero Multmero asimtrico
N Polimerasas/clula
400 Desconocido 10-20

Actividad/Funcin
Polimeras 5'-3'
SI SI SI
/Elongacin
Exonucleasa 3'-
SI SI SI
5'/Correctora
Exonucleasa 5'-
SI NO NO
3'/Reparacin
 Replicacin en eucariotas
ENZIMA FUNCIN

Sntesis Hlice retardada. Sntesis del

ADN Pol cebador: 10 bases de ADN y 25 de
ARN.

ADN Pol Sntesis de la Hlice conductora.

Polimerizacin de las Piezas de

ADN Pol
Okazaki.

Unin de los fragmentos de Okazaki

ADN Pol
( de aproximadamente 250 pb).

ADN Pol Sntesis ADN mitocondrial.

 Sntesis de RNA
1-Reconocimiento del molde: unin de la RNA
polimerasa al DNA en la regin del promotor. La
burbuja de transcripcin se origina por
desenrollamiento iniciado en el sitio de unin de
la RNA polimerasa.
2-Iniciacin: La enzima permanece en el
promotor mientras sintetiza los primeros nueve
enlaces, termina cuando la enzima comienza a
alargar la cadena y abandona el promotor.
3-Alargamiento de la cadena: la enzima se
mueve a lo largo del DNA y desenrolla la hlice
de DNA Los nucletidos se aaden al extremo 3
OH y se forma un hbrido DNA-RNA en la
regin desenrollada.
4-Terminacin: implica el reconocimiento del
punto que determina el final de la adicin de
bases a la cadena. La secuencia de DNA
necesaria se denomina terminador.
 Transcripcion en procariotas
La RNA polimerasa de E.coli de 465 kDa holoenzima con
varias subunidades proteicas: Existen varios tipos de factores
sigma que reconocen tipos de promotores diferentes relacionado
con la regulacin de la transcripcin, se identifican por su peso
molecular.
Para las etapas de iniciacin y
terminacin se requieren de
unidades adicionales. Algunos
de estos polipptidos pueden ser
requeridos por todos los genes,
otros solo son requeridos por
genes particulares; a estas unidades
se les conoce como factores de
control auxiliar.
SECUENCIAS DE CONSENSO propia de los sitios reguladores (promotores)
tanto en procariticos como eucariticos. En los promotores bacterianos se han
identificado tres elementos (para s 70): Sitio de iniciacin: generalmente una
purina. Es frecuente que sea la base central de la secuencia CAT.
Secuencia -10 (caja TATA o secuencia Pribnow): de 6 bp en casi todos los
promotores. Permite al complejo la conversin de la forma cerrada a la abierta. Que
sea exclusivamente A-T facilita el proceso de fusin del DNA. La regin de fusin
incluye el extremo derecho de la secuencia -10 y se extiende hasta justo pasado el
sitio de iniciacin.
T80 A95 T45 A60 A50 T96 ( Cada subndice indica el por ciento de aparicin de la
base encontrada con mayor frecuencia).

Secuencia -35: se encuentra a 35 bp corriente arriba del sitio de inicio. Su funcin

recae en proporcionar la seal para el reconocimiento por la RNA polimerasa
T82 T84 G78 A65 C54 A45
Transcripcin en eucariotas
En las clulas eucariotas los genes nucleares son transcritos por
tres tipos de RNA polimerasas en diferentes lugares especficos
del ncleo. Son protenas grandes, como agregados de 500 kDa
o ms con forma tpica entre 8 y 14 subunidades. Cada una
reconoce promotores con caractersticas especficas y el
requerimiento en nmero y tipo de factor de transcripcin
tambin es caracterstico de la enzima en cuestin. Las RNA
polimerasas de mitocondrias y cloroplastos son menores y se
asemejan ms a la RNA polimerasa bacteriana.
 TRADUCCION SINTESIS DE
PROTEINAS
Interactan: RNAm, RNAt, Ribosomas, enzimas.
Existen 31 tipos diferentes de ARNt: de 61 probables,
slo son 31.Unos pueden reconocer a ms de un
codn.
El codn de iniciacin es el triplete AUG. Existen 20
amnoacil ARNt sintetasas diferentes.
La sntesis de las protenas se divide en tres etapas,
llamadas de iniciacin , de alargamiento y de
terminacin
CODIGO GENTICO
dihidrouridinas asa D.
La asa T, l trinucletido
Ty C. La letra T
simboliza a la
ribotimidina y la y a la
seudouri dina.
Sntesis de Protenas
REPLICACION DEL DNA

1) Ori (Origen de replicacin): O

2) Term (Sitio de terminacin): T
Ori

Ori
Virus
y
Bacterias

Ter
 REPLICACION DEL DNA

Telmero Telmero

T O T O T O T O T
Eucariotas
Replicn R R
Caractersticas:
1. Bidireccional
2. Hebra continua Hebra discontinua
3. Semiconservativa
4. Direccin 5 3
5. DNA polimerasa I / II / II : procariotas
6. DNA polimerasa / / : eucariotas
7. Una batera de molculas accesorias
8. Fases: Iniciacin, Elongacin, Terminacin
 REPLICACION DEL DNA

1. Iniciacin

1) Dna A (Relaja)

B Helicasa (abre )
C

DNA B + C
SSB
J
K SSB SSB B+C

SSB: Protenas de unin a cadena SSB

sencilla (Single strand binding)
 REPLICACION DEL DNA

J
Primasa
K 5 3 Dna G
(ARN pol)
B+C 3 5
3 5

Ojal de Replicacin

2. Elongacin

5 3
GIRASA
5 3 5
Topoisomerasa I
5 3 Girasa
GIRASA
3 5
 REPLICACION DEL DNA

DNA pol III + Dna G + Girasa

(Primasa) o ARN - pol - DNA
Dirigida o Iniciador (Primer)
+
Topoisomerasa I
Replisoma
3
5

3 3

5
 REPLICACION DEL DNA

SSB Hebra continua

3
DNA POL - III
5
3

5 RNA RNA RNA

5 3 5 3 5 3
3
5
1000-2000 pb 1000-2000 pb

Hebra discontinua
 REPLICACION DEL DNA

DNA Pol III

RNA
(Nick translation)
Corta y cambia:RNA
por DNA
DNA POL - I
 REPLICACION DEL DNA

3. Terminacin

DNA LIGASA
Dependiente de ATP
 ELONGACION DE LA TRANSCRIPCION
EN PROCARIOTES
a) INICIACION
+1

-35 -10
La subunidad ( ) se disocia del promotor
nun

-10
b) ELONGACION 5
5 Movimiento de la enzima 3
 OJAL DE LA TRANSCRIPCIN
EN PROCARIOTES
Movimiento de la enzima
5 3
Cadena que codifica al DNA

Punto de enrollamiento Punto de desenrollamiento

Cadena molde de ADN

Sitio de unin al RNA Hbrido RNA-DNA

 ELONGACIN DE LA TRANSCRIPCIN
EN PROCARIOTES

Burbuja de Transcripcin
en la RNA polimerasa

Movimiento de la
5 3 polimerasa

La cadena de RNA crece

 ASAS DE TERMINACIN DE LA
TRASCRIPCIN EN PROCARIOTES

Estructura secundaria

Regin de unin
de
doble hlice

Unin en forma de asa Unin en forma de pinza

de cabello
 TRANSCRIPCION DEL DNA
EUCARIOTAS
citoplasma

Ncleo PROCARIOTAS
DNA Exn intrn

RNA Transcripcin DNA

Transcripcin
Empalme ARNm
RNA Traduccin
Protena

RNAm
Traduccin

Protena
 TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

ADN

Transcripcin

ARNhn inicial 5 3
Clivaje inicial
Transcrito (ARNhn) 5 3

polirribonucleotidil adenosin sintetasa

ARNhn - Poly A 5
Fragmento 5 Procesamiento
+
ARNhn - Poly A Nucleasas
7mG
ARNm - Poly A con Cap 7mG
+
Fragmentos 5degradados 5cap
QUE ES UN GEN INTERRUMPIDO?

Es una secuencia de palabras y sus

silencios o espacios conectores; escritas con un
alfabeto de solo cuatro letras A, T, C, y G y con los
cuales se escribe el mensaje cifrado de nuestra
herencia. As, a cada palabra le llamamos EXON
(E) y a cada silencio le llamamos INTRON (I)

E I E I E I E

GEN
 QUE ES UN GEN?

E I E I E I E

VAMOS A LA CASA

ATCTCGGTTAAATGCGG TACAGGTATAGGACAG
A LA
BARAJAMIENTO (SPLICING) DIFERENCIAL DE EXONES

E1 I E2 I E3 I E4

VAMOS A LA CASA
E1 E2 E3

VAMOS A LA
E2 E3 E4

A LA CASA
E2 E4

A CASA
E1 E3

VAMOS LA
 TRADUCCION A PROTEINAS

Componentes de iniciacin Subunidad ribosomal pequeo

(30s o 40s)

P A Subunidad ribosomal grande

Sitio P Sitio A (50s o 60s)

Subunidad Subunidad
AUG RNAm pequea C AUG RNAm pequea
30S 40S
IF1 IF2 IF3 Factores de iniciacin 1a 2 3 4a 4b 5 Factores de iniciacin

Subunidad Subunidad
grande grande
50S 60S

fMet tRNA fMet GTP

fMet tRNA fMet
GTP
fMet Met ATP
TRADUCCION A PROTEINAS 3 RNA SINTETASA
A
A
C
Aminocido
5 C
G A Brazo aceptor
G C
G C
C U
mG G G
Asa D U U Asa TCG
G A U G C
D U G C G A G G C C U U A
C G
G G C G C U C C G G T C
G D A
C G A C
U A G D
m2G C G G
C G
C G
U ml
Asa anticodn U
I G C
Anticodn

C C G Codn
3 3 2 1 5
RNAm
 TRADUCCION A PROTEINAS

AUG. CGU. AGA. GCU. UGA. GAU

Subunidad Grande RNA mensajero

Sitio aminocil N R C

Sitio peptidil R
N R R C
UCU UCU
Polipptido
RNA de transferencia
Subunidad pequea con y sin aminocido

Ribosoma
N FC

INICIACION
UAC
Adaptado de Rothamsted Experimental Station,
1997,1998 AUG CGU AGA. GCU. UGA. G
 TRADUCCION A PROTEINAS

Paso No 1 de Elongacin

A B
N F C N F CN RC

UAC UAC GCA

AUG CGU AGA. GCU. UGA. AUG CGU AGA. GCU. UGA

Adaptado de Rothamsted Experimental Station, 1997,1998

 TRADUCCION A PROTEINAS

Paso No 2 de Elongacin

C D
UAC
F R RC
N F RC N CN

GCA GCA UCU

AUG CGU AGA GCU. UGA. GAU AUG CGU AGA GCU . UGA. GAU

Adaptado de Rothamsted Experimental Station, 1997,1998

 TRADUCCION A PROTEINAS

Paso No 3 de Elongacin

E F
GCA
GCA AC
N
F R R N F R R A
N C
CN C

CGA
UCU UCU CGA
AUG. CGU AGA GCU UGA. GAU AUG. CGU AGA GCU UGA. GAU

Adaptado de Rothamsted Experimental Station, 1997,1998

 TRADUCCION A PROTEINAS

TERMINACION

N F R R A
CN C

CGA
AUG. CGU AGA GCU UGA UUC. GAU

Adaptado de Rothamsted Experimental Station, 1997,1998

 TRADUCCION A PROTEINAS

Cadena de crecimiento aa1

aa2 aa3 Ribosoma
del polipptido aa4
aa5 aa6 aa7

tRNA RNA4
Saliendo
CCC CAG
aa7 tRNA7
RNAm llegando
U U U A G C

G G G A AA U C G G U C
Movimiento del ribosoma

Codon Codon Codon Codon Codon Codon Codon

aa1 aa2 aa3 aa4 aa5 aa6 aa7
RESUMEN DE LOS PROCESOS

(a) Transcripcin
RNA

mRNA
Membrana
nuclear

Ribosoma mRNA

(b) Traduccin
 BIBLIOGRAFIA
LODISH, H; Baltimore, y col. Molecular Cell Biology. Third Edition. Scientific
American Books New York, 1997.
LEWIN, Benjamin. Genes VII. International Student Edition. Oxford University.
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