PROCEDIMIENTOS PARA LA

REALIZACION DEL ANTIBIOGRAMA

VALORES CRTICOS DEL ANTIBIOGRAMA
Los valores de las concentraciones y de los dimetros crticos que delimitan las categoras (S, I, R), son la integracin
de un conjunto de elementos: la distribucin de las CIM para diversas poblaciones de cepas sensibles y resistentes,
las concentraciones sricas y tisulares de los antibiticos.

PROCEDIMIENTO DE CATEGORIZACIN
Para los principales antibiticos, los valores crticos de las concentraciones bajas (c) y altas (C) y de sus dimetros correspondientes (d,
D), permiten la categorizacin segn los siguientes criterios.
 PREPARACIN DEL AGAR MUELLER HINTON

Autoclavar y dejar enfriar en bao de agua hasta que alcance los 45C - 50C.

Una vez esterilizado y solidificado, medir el pH del agar .

El valor del mismo debe encontrarse entre 7,2 y 7,4 a temperatura ambiente.

Repartir en placas Petri 150 mm o 100 mm de manera que el grosor del agar en la placa sea de 4 mm.

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote. Estas placas utilizadas deben ser, luego,
descartadas.
 PREPARACIN DEL ESTNDAR (0,5 MC. FARLAND)
PARA EL INCULO

Se prepara una suspensin de sulfato de bario (0.5 de la escala de Mac Farland: 0,5 ml de cloruro de
bario 0.048 M y 99,5 ml de acido sulfrico 0.18M en constante movimiento para mantener la suspensin.
Verificar la densidad correcta del estndar en fotocolormetro , cuya absorbancia a 625 nm es 0,08 a 0,10.
Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca , similares a los que se usarn para preparar el
inculo.
Conservar en oscuridad, a temperatura ambiente y anotar fecha de preparacin.
Antes de ser usado agitar vigorosamente de preferencia, en un agitador mecnico
Verificar mensualmente la densidad y cambiar cuando sea necesario.
 SELECCIN DE LOS DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA

Los antibiticos han sido realizado teniendo en cuenta los siguientes criterios:
a. Eficacia clnica documentada.
b. Representatividad de una familia de antibiticos.
c. Disponibilidad de criterios tcnicos fiables para la determinacin in vitro de su
eficacia clnica.
d. Estabilidad de la molcula en los discos para antibiograma.
e. Presencia en el mercado nacional.
f. Importancia para la vigilancia de la resistencia bacteriana.

DISTRIBUCION EN 2 GRUPOS:

GRUPO 1 : Antibitico de base ( OBLIGATORIO )para orientar en tto de las infecciones.

Grupo 2: Antibiticos complementarios (OPCIONAL) depende de los esquemas vigentes en
cada hospital y de la epidemiologa local de la resistencia bacteriana.
DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA ANTIBIOGRAMA PARA ENTEROBACTERIACEAE

Grupo I Grupo II
Ampicilina Cefoxitina
Cefalotina Aztreonam
Ampicilina / Sulbactam o Amoxicilina / cido Clavulnico. Ceftazidima

Cefuroxima Cefixima
Cefotaxima o Ceftriaxona Cefoperazona/Sulbactam
Gentamicina Cefepime o Cefpirome
Amikacina Imipenem o Meropenem
cido Nalidxico Cloramfenicol
Norfloxacina Ofloxacina
Ciprofloxacina
Cotrimoxazol (Trimetoprim/Sulfametoxazol)

Nitrofurantona

Disco utilizado para infecciones de las vas urinarias

 PREPARCION DEL INOCULO

De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h, preparar una suspensin directa
en solucin salina fisiolgica y ajustar a 0,5 de Mc. Farland.
Inoculacin de las Placas
Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez , sumergir un hisopo estril y rotarlo presionando por la
pared interior del tubo remover el exceso de inculo.
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton, estriando con el hisopo en 3 direcciones
para asegurar una distribucin uniforme del inculo.
Dejar secar la placa 3-5 minutos a T ambiente para el exceso de humedad sea absorbido.
APLICACIN DE LOS DISCOS

los discos deben estar distribuido de 25 mm .

No ms de 12 discos en una placa de 150 mm, ni ms de 6 en una placa de 100 mm.

para evitar la superposicin de las zonas de inhibicin.

Incubar a los 15 minutos posteriores de colocado los discos.

 INCUBACIN

Incubar lar placas en posicin invertida a 35C dentro de los 15 minutos posteriores a la
aplicacin de los discos.

Las placas de Haemophilus spp y Streptococcus spp, deben ser incubadas en

atmsfera del 5% de CO2.

Despus del tiempo recomendado de incubacin examinar cada placa y medir los
dimetros de los halos de inhibicin alrededor de cada disco. En los casos de
Staphylococcus spp y Enterococcus spp el tiempo de incubacin debe prolongarse por
24 horas
 LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Medir los dimetros de inhibicin usando una regla o calibrador.

Lectura de placas 15 18 hrs.
Sera reportado como sensible (S),intermedio (I) o resistente (R ).
 Resistencias Naturales
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina, Oxacilina, Macrlidos, Clindamicina y Glicopptidos.

Klebsiella spp R Aminopenicilinas

Citrobacter freundii, Enterobacter R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas,

cloacae y Enterobacter aerogenes Cefalosporinas 1era generacin y Cefuroxima.

Serratia marcescens R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas,

Cefalosporinas de primera generacin y Cefoxitina.

Proteus mirabilis R Nitrofurantona.

Proteus vulgaris R Aminopenicilinas, Cefalosporinas 1era generacin,
Cefuroxima y Nitrofurantona.
Morganella morganii R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas,
Cefalosporinas 1era generacin, Cefuroxima y
Nitrofurantona.

Providentia stuartii R Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas,

Cefalosporinas 1era generacin, Gentamicina (bajo nivel) y
Nitrofurantona.