Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
hematologie
2015-2016
Hematopoieza Celule
suse
MADUVA BFU-E
OSOASA
CFU-E
Tpo
reticulocite megacariocite
SANGE
trombocite monocite eozinofile B T
eritrocite
neutrofile bazofile limfocite
macrofage
Investigatiile utilizate in
hematologie
SANGE
Hemograma
Frotiul sanguin
MADUVA OSOASA
GANGLION (adenopatie) Mielograma
Punctie gg Biopsie medulara
Biopsie gg
BIOPSII
Chirurgicale sau cu trocar
Tehnici utilizate in hematologie
CITOMETRIE IN FLUX
CITOLOGIE sau
Citochimie IMUNOFENOTIPARE
HISTOLOGIE CITOGENETICA
sau
ANATOMO-PATOLOGIE
BIOLOGIE
MOLECULARA
Hemograma
Hemograma este examenul elementelor figurate din
s^nge (leucocite, eritrocite, trombocite). Hemograma se
realizeaz\ `n dou\ etape una cantitativa [i alta calitativ\ :
Num\r\toarea elementelor figurate din s^nge se
realizeaz\, `n prezent, `n mod automatizat permi]^nd
ob]inerea unei hemograme cu formula sanguin\.
Hemograma con]ine
num\rul de leucocite cu formula leucocitar\,
num\rul de trombocite [i
num\rul de hematii al\turi de hemoglobin\, hematocrit
[i indicii eritrocitari.
La Numration Formule Sanguine (NFS)
Derulare
Anestezie locala
Punctie
Trocar tip Realizare frotiu
Mallarm Trocar tip
Jamshidi
Bilant medular
Mielograma
Analiza microscopic\ a frotiului de s^nge medular se
desf\[oar\ `n c^teva etape care urm\resc:
Num\r\toarea de megacariocite : num\r\toarea de
megacariocite pe 50 de c^mpuri succesive cu obiectibul 10.
Evaluarea bog\]iei celulare a m\duvei osoase (apreciat\ prin
densitatea celular\ pe c^mp cu un obiectiv microscopic de
100 m\duva normal\ se incadreaz\ `n clasele II-III).
Propor]ia diferitelor linii celulare.
echilibrul `ntre diferitele stadii de maturare `n cadrul
fiec\rei linii celulare, adic\ raportul `ntre celulele tinere (mai
putin numeroase) [i cele mai mature (cele mai numeroase).
Prezen]a de celule str\ine (nonautohtone) `n m\duv\.
Prezen]a de celule blastice, `n propor]ie important\ `n
leucemiile acute.
MB Linia granulocitara neutrofilica
Mieloblast
PML
Promielocit
ML
Mieocit
MML
Metamielocit
PN
Polinuclrar neutrofil
PROER
Proeritroblast
Linia eritroblastica
ERB
Eritroblast bazofil
ERP
Eritroblast
policromatofil
ERA
Eritroblast acidofil
Biopsia osteomedulara (BOM)
Biopsia osteomedular\ reprezint\ prelevarea unui
fragment osos cilindric care con]ine m\duv\ osoas\,
cu ajutorul unui trocar de la nivelul spinei iliace
postero-superioare permi]^nd un studiu histo-
citologic.
Se realizeaza in spina iliaca posterosuperioara
Indicatii
Numeroase
Diagnostic si Bilatn de extensie
Analize specializate
Contra-indicatii
Rare
Tulburari grave de coagulare
Trombopenii severe, trombopati
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Bilant medular
Adenograma
Organe limfoide
Explorarea liniilor limfoide
Punctia ganglionara
Frotiu
Chirurgicale
Masa tumorala (limfoame)
Ganglion : biopsie ganglionara
Cu acul
Sub scanner
Biopsia Osteo-Medulara (BOM)
Biopsia ganglionara
Prelevarea ganglionului intreg prin tehnica
chirurgicala
Morfologie, cupe histologice
Imunomarcaj pe lame
imunohistochimie
Suspensii de celule
Examen citogenetic
Examene de biologie moleculara
Mieloperoxidaza
Esteraza nespecifica/Dubla
esteraza
Acidul periodic Schiff
Definitie :
Citometria de flux permite studiul precis al celulelor izolate antrenate intr-un flux lichid.
Celulele aliniate una dupa cealalta sant analizate una cate una in timp ce defileaza cu
mare viteza (> 30Km/h) dprin fata unei surse luminoase (un laser).
Interesul:
Este o tehnica rapida care permite caracterizarea :
- individuala a fiecarei celule
- cantitativa (interes statistic)
- calitativa (morfologia celulei si fenotipul sau)
Cluster of differenciation
Clusters of
differenciation (CD)
sunt antigene exprimate
de populatiile celulare ale
sistemului imunitar
determinand tipul de
celula si eventual functia
sa
Citometria in Flux
Sistem fluidic
Amestec celular heterogen si complex
injectarea suspensiei celulare
Lichid din teaca sub presiune
Intinderea venei lichide
Alinierea si trecerea celulelor una cate una prin camera de analiza
Parametri optici
In camera de analize: impact cu un fascicol LASER
Lumina monocroma coerenta
iluminarea celulelor
Talie relativa: Forward Scatter ou FSC
Complexitate citoplasmatica: Side Scatter SSC
Excitatarea fluorocromilor cu emisia de fluorescenta
Producerea anticorpilor
monoclonali
Antigen
Fuzionarea
celulelor
HIBRIDOM Mielom
Plasmocite
producatoare de Ac Testarea clonelor
Cultivarea
hibridoamelor
Hibridoamele se Clonele
separa si se cultiva dorite se
cultiva sau
se
Mentinerea congeleaza
hibridoamelor in
soareci
Anticorpii monoclonali
sunt purificati
Fluorocromii
AcM sunt conjugai cu fluorocromi
Spectru de absorbie (excitaie)
Spectru de emisie
Pentru 2 parametri 2 AcM cuplai cu 2 fluorocromi
cu spectre de emisie diferite:
Izotiocianat de fluorescein (FITC)
Phycoeritrin (PE)
Citometru
Aplicatii
Analiza subpopulaiilor limfocitare
Diagnosticul hemopatiilor maligne
Biologie celular
Identificarea unor molecule HLA
Determinarea unor autoanticorpi
Studiul ciclului i al funciilor celulare
Diagnosticul, evoluia, prognosticul tumorilor maligne
solide
Microbiologie
Citogenetica
Cariotip
Cultura celule
Mitoze
Clasare cromozomi
FISH
Hybridation in situ cu sonde fluorescente
LMC citogenetica
conventionala
Examenul citogenetic (ET)
Biologie Moleculara
PCR : Polymerase Chain Reaction secventiere
pe ADN
pe ADN complmentar RT-PCR
X2
X2 n Cicluri
=
X2 2n copies
Biologie Moleculara
14q32
Cautarea unui echivalent
molecular al translocatiei VH DH JH
IgH-Bcl1 si t(11;14)
PRAD1/BCL1/CCND1
IgH-Bcl2 si t(14;18) 11q13
120kb
75
50 EEC
N
25 PFCP
PV
0
0 0,001 0,01 0,1 0,2 0,5 1 5
CFU-E
EEC = endogenous erythroid colonies
Sdr mononucleozic
Limfom T
Citometrie de flux Monotipie
indoielnica
CD19+5+ CD19+5-
monotipie Monotypie
LNH Foliculair
LNH de manta LNH Zona marginala
LLC SLPC CD5+ Lcu tricoleucocite
tipic : (LLC atipic sau altul) LSLV
diagnostic Lmnh limfoplasmocitar
pozitiv L. Prolymphocytaire B (Galton)
Imuno-
fenotipic
Teste globale
Timpul de liza a cheagului prealabil diluat
Timpul de liza a euglobulinelor (von Kaula)
Teste specifice
Dozarea plasminogenului
Dozarea activatorilor (t-PA)
Dozarea inhibitori plasmatici ai activatorilor (PAI-1)
Teste indirecte
Dozarea PDF serici
Dozarea D-dimeri Dozarea fragmentelor D, E
Dozarea complexelor plasmina- alfa2-antiplasmina