Sunteți pe pagina 1din 43

Organite implicate n sinteza i

turnoverul macromoleculelor

Biogeneza membranelor

Traficul vezicular intracelular

RIBOSOMII
RETICULUL ENDOPLASMIC
APARATUL GOLGI
LIZOSOMII i SISTEMUL ENDOSOMAL
RIBOSOMII
RETICULUL ENDOPLASMIC

APARATUL GOLGI
LIZOSOMII
Sinteza, sortarea i traficul intracelular
al macromoleculelor aspecte generale
Cea mai mare parte a proteinelor i lipidelor
membranare sunt sintetizate la nivelul RE.
Transportul proteinelor membranare ce au ca
destinaie RE, AG, lizosomii sau MP necesit prezena
unor secvene semnal specifice n structura
proteinei nou-sintetizate.
n absena unor secvene semnal, proteinele
sintetizate la nivelul RE urmeaz urmtorul parcurs:
REAGvezicule de secreiesuprafaa celular
Prin fuzionarea veziculelor desprinse din AG cu MP, n
structura acesteia se adaug fragmente noi de
membran. Pentru a mpiedica creterea suprafeei
celulare n urma proceselor de fuziune de membrane,
suprafaa celular este reciclat prin endocitoz.
RIBOSOMII (Corpusculii lui Palade)
Ribosomii reprezint componente celulare (complexe
macromoleculare ribonucleoproteice/organite nedelimitate
de endomembrane) la nivelul crora se desfoar sinteza
de proteine (translaia/traducerea informaiei din mARN).
Ribosomii maturi din citoplasma celulelor EK (80S) sunt
formai dintr-o subunitate mic (40S) i o subunitate mare
(60S).
Fiecare subunitate este un complex ribonucleoproteic format
la rndul su din diferite tipuri de ARN i proteine specifice:
Subunitatea 60S (GM 2.800.000 Da):
5S ARN (120 nucleotide)
5,8S ARN (160 nucleotide)
28S ARN (4700 nucleotide)
49 proteine
Subunitatea 40S (GM 1.400.000 Da):
18S ARN (1900 nucleotide)
33 proteine
- Premiul Nobel pentru Fiziologie i Medicin 1974 pentru
descopririle privind organizarea structural i funcional a celulei: Albert
Claude, Christian de Duve, George E. Palade (pentru descoperirea
ribosomilor)
- Premiul Nobel pentru Chemie 2009:
Venkatraman Ramakrishnan, Thomas A. Steitz, Ada E. Yonath, pentru
descrierea ribosomilor la nivel atomic


In 1955 Palade, i colaboratorul su
Philip Siekevitz, au identificat
granulele ataate la RER ca fiind
ribosomi, i ulterior au artat natura
lor ribonucleoproteic. In colaborare
cu ali cercettori Palade a identificat
funcia ribosomilor (sediul sintezei
proteinelor celulare). Palade a avut o
contribuie important n investigarea
George Emil Palade funciei ribosomilor i a altor
componente celulare. In 1974 i-a fost
decernat Premiul Nobel pentru
Fiziologie i Medicin (alturi de Albert
Claude and Christian De Duve).
Comparaia dintre ribosomii procariotelor i
eucariotelor -
se remarc organizarea molecular mai complex a
ribosomului eucariotelor.
Ribosomii celulelor eucariote
Prin asamblarea celor dou subuniti rezult un
edificiu multimolecular (organit nedelimitat de
endomembran), cu geometrie sferoidal, cu
dimensiunea de 22 nm x 32 nm ce reprezint sediul
biosintezei proteinelor.
n organizarea spaial a ribosomului, rezultat prin
asocierea funcional a celor dou subuniti, se definesc
4 elemente:
un canal pentru acomodarea lanului acidului ribonucleic
mesager;
un sit A (A de la aminoacid) care primete (ca urmare a
unei interaciuni de mare specificitate ntre codonul din
ARNm i anticodonul din ARNt) acidul ribonucleic de
transport care poart aminoacidul.
un sit P care acomodeaz lanul polipeptidic n alungire,
care pe masur ce crete este mpins ctre citosol (sau
ctre orificiul transloconului, n cazul ribosomilor ataai la
membrana reticulului endoplasmic), depind limitele
ribosomului (sit P, cu P de la peptid);
un sit E (E de la exit) n care ajunge ARNt din situl P,
dup ce pierde lanul peptidic n curs de alungire; ajuns
aici interaciunea ARNt liber (necomplexat cu peptidul n
cretere) cu componentele moleculare care organizeaz
suprafeele spaiului sitului E devin att de slabe nct
ARNt liber prsete ribosomul ajungnd n citosol i
poate intra ntr-un nou ciclu prin recomplexare cu
aminoacidul specific.
Ribosomii din celulele eucariote de tip 80S sunt
localizai n citoplasm. Ei pot fi separai din punct de
vedere spaial n 2 tipuri de populaii: ribosomi liberi,
neataai de membrane (se numesc liberi, n ciuda
faptului c sunt asociai de componente ale
citoscheletului) i ribosomi ataai de membrana
RE (pe faa citoplasmatic).
ntre cele 2 tipuri de populaii de ribosomi nu exist
diferene structurale, ntruct fac parte din acelai
stoc intracelular.
Factorul care decide dac un ribosom va fi ataat la
membran sau va fi liber nu are legtur cu anumite
caracteristici ale ribosomului, ci cu secvena de
aminoacizi din structura proteinei la a crei sintez
particip ribosomul respectiv.

n celulele EK, un alt tip de ribosomi (70S) sunt


localizai n matricea mitocondrial i sunt responsabili
de sinteza proteic la nivel mitocondrial.
ribosomi ataai de RE poliribosom

Proteinele sintetizate de ribosomii ataai de


membrana RE includ: proteinele transmembranare
din MP, proteinele din RE, complexul Golgi, endosomi,
proteinele lizosomale, precum i proteinele de
secreie.
Ribosomii liberi sunt responsabili de sinteza
proteinelor din citosol, a proteinelor membranare
periferice i a unor proteine ce au ca destinaie
RETICULUL ENDOPLASMIC
RETICULUL ENDOPLASMIC
RE este un organit delimitat de endomembran,
structurat sub forma unor cisterne ce prezint
numeroase anastomoze i tubuli nreelai, a crui
funcie de baz este aceea de a produce
macromolecule eseniale organizrii i funcionrii
celulelor:
Biosinteza i modificarea-post translaional a
proteinelor (att a proteinelor destinate diferitelor
compartimente celulare, ct i a proteinelor ce sunt
eliminate n mediul extracelular denumite proteine
de secreie).
Biosinteza lipidelor membranare
n celulele animale membranele RE pot reprezenta
mai mult de 50% din totalitatea endomembranelor.
Reeaua de membrane ale RE a fost evideniat
pentru prima oar de ctre Porter i colab. (1953) prin
OBSERVATIONS ON A
SUBMICROSCOPIC BASOPHILIC
COMPONENT OF CYTOPLASM
J Exp Med. 1953 May 1; 97(5):
727750.

KEITH R. PORTER PH.D.


(From the Laboratories of The
Rockefeller Institute for Medical
Research)

(Received for publication, December


2, 1952)
The cytoplasmic ground substance of
animal tissue cells grown in vitro has
been found by electron microscopy to
contain, as a part of its
submicroscopic structure, a complex
reticulum of strands, to be referred to
as the endoplasmic reticulum. It has
aliile structurale privind organizarea RE au fost obinute prin microscopie electron
Abordarea experimental n studiul funciilor
RE
Izolarea microzomilor provenii din RER i REN prin
centrifugare n gradient de densitate.
Funciile reticulului endoplasmic
Biosinteza i depozitarea lipidelor
RE particip la biosinteza i depozitarea lipidelor.
Sinteza lipidelor membranare (triacilgliceroli,
fosfogliceride, colesterol, ceramide) are loc att la
nivelul RER ct i la nivelul REN. Lipidele membranare
sunt sintetizate direct, n forma final sau ca
precursori ce urmeaz s fie prelucrai n aparatul
Golgi.
Detoxifierea celular
REN este implicat n reacii de detoxifiere ce au ca
scop transformarea unor compui toxici liposolubili
(fiziologici, patologici sau farmacologici) n compui
netoxici (metabolii hidrosolubili) prin aciunea
citP450/NADPH citP450 reductazei.
Depozit dinamic de Ca2+
Reticulul endoplasmic - depozit dinamic
de Ca2+
REN conine proteine ce funcioneaz ca pompe
pentru ionii de Ca2+ ce particip la transportul i
stocarea ionilor de Ca2+ n lumenul reticulului
endoplasmic. Aceast rezerv de calciu este eliberat
n citosol ca rspuns la diverse semnale.
REN din fibrele musculare poart numele de reticul
sarcoplasmic i se dispune sub form de tubuli
(sarcotubuli) aezai n iruri, ce mbrac ca nite
manoane miofibrilele. Reticulul sarcoplasmic este
implicat n procesul de contracie-relaxare a fibrelor
musculare. Dinamica acestui proces se realizeaz prin
cooperarea mai multor componente moleculare. O
componente important este calsechestrina,
protein cu mare afinitate pentru ionii de calciu, aflat
Calsechestrina
n cantitate mare n lumenul organitului.
(monomer 40kDa;
~400 aa)
Reticulul sarcoplasmic dispoziia sub form
de tubuli ce mbrac ca nite manoane
miofibrilele.
RS funcioneaz ca depozit dinamic de Ca2+
n cursul procesului de contracie-relaxare.
Ionii de Ca2+ sunt eliberai din RS pentru a iniia contracia
fibrei musculare i sunt pompai din nou n lumenul RS n
momentul relaxrii fibrei musculare.
Funciile prii rugoase a RE
Principalele funcii ale RER se refer la:
Biosinteza proteinelor:
(i) proteine membranare (transmembranare)
(ii) proteine destinate s funcioneze n RE, n
aparatul Golgi, sau lizosomi
(iii) proteine destinate exportului (proteine de
secreie)
Prelucrarea a proteinelor nou-sintetizate n RE:
transformri asupra proteinelor care au loc
concomitent cu translaia (modificri co-
translaionale). Un exemplu l constituie iniierea
glicozilrii proteinelor care const n grefarea unor
secvene oligozaharidice pe resturi de Asn ale
catenei polipeptidice n curs de sintez (legturi
N-glicozidice).
Transformri dup terminarea translaiei
(modificri post-translaionale); de ex.
ancorarea GPI.
Sortarea proteinelor i transportul vezicular
Sinteza proteinelor de ctre ribosomii ataai
de membrana RER - Rolul secvenei semnal n
transferul ribosomilor angajai n traducere
ctre membrana RE.

Translocon

SRP signal recognition particle


Fixarea ribosomului de translocon determin lrgirea porului central
acestuia de la 9-15 pn la 40-60 .
Sinteza proteinelor de ctre ribosomii
ataai de membrana RER ndeprtarea
secvenei semnal de ctre peptidaza
semnal.
Modificri co-translaionale:
Iniierea glicozilrii proteinelor n RER
secvena consens Asn-X-Ser(Thr)- .... unde X este orice aa cu
excepia Pro

dolichol-difosfat-
oligozaharid

-
(GlcNAc)2Man9Gl
c3
Dolicholul este o structur poli-izoprenoidic;
funcioneaz ca ancor membranar pentru formarea
secvenei oligozaharidice -(GlcNAc)2Man9Glc3 n cursul
procesului de modificarea co-translaional a proteinelor prin
N-glicozilare.
La vertebrate dolicholul
conine 18-20 uniti
izoprenoide.
Sinteza precursorului oligozaharidic
pe carrierul lipidic (dolichol)
Dol-P-P-oligozaharidul se
sintetizeaz la nivelul membranei
RE, cu consum de energie, prin
adugarea secvenial a mono-
zaharidelor.
Modificri post-translaionale:
ancorarea proteinelor de lipidele
membranare n RE (gliparea) ancor
glicozilfosfatidilinozit
olic (GPI)
Structura ancorei
glicozilfosfatidilinozitolice (ancora
GPI)
Proteinele ancorate prin GPI sunt
lipsite de domeniul
transmembranar.
Familia de proteine ancorate prin
GPI include:
Enzime asociate de membran
Molecule de adeziune
Markeri de difereniere
Antigene de activare a
sistemului imunitar
Proteinele ancorate prin GPI sunt
localizate la nivelul plutelor
lipidice, pe faa extern a
Plutele lipidice (engl. lipid rafts) sunt
microdomenii membranare bogate n
glicosfingolipide i colesterol, care servesc drept
platforme pentru diverse funcii celulare (ex.
traficul vezicular, traducerea semnalelor). Aceste
microdomenii au o fluiditate mai sczut dect
bistratul lipidic care le nconjoar. Existena lor a
fost pus n eviden datorit faptului c sunt
insolubile la 4oC n prezena detergentului neionic
Triton X-100.
Asistarea proteinelor n RE pentru
plierea corect

n lumenul RE sunt condiii oxidante, mediu ce


favorizeaz formarea punilor S-S-.
Adoptarea structurii teriare a proteinelor prin
formarea de puni S-S- este mediat de enzima
numit protein disulfid izomeraza.
Asistarea plierii corecte a proteinelor este
realizat de proteine chaperone.
Proteina chaperone cu cea mai larg sfer de
aciune din RE este proteina de legare
(prescurtare BiP, binding protein; denumire
alternativ Grp78), aparinnd familiei de
proteine HSP70.
BiP complexeaz proteinele nou-sintetizate
translocate n lumenul RE i le elibereaz numai
dup definitivarea plierii corecte (conformaia
care asigur funcionalitatea proteinei
respective).
- BiP complexeaz proteinele nou-sintetizate translocate n
lumenul RE i mediaz plierea lor corect, proces care necesit
hidroliza ATP.
- Proteinele pliate incorect sunt returnate de BiP transloconului i
sunt expulzate n citosol, intrnd (dup deglicozilare i marcare
prin poliubiquitinare) n procesul de degradare proteolitic
mediat de proteasom.

Domeniul ATP-azic complexat


cu ADPdou domenii structurale importan
BiP prezint
pentru exercitarea funciei de chaperone: un
domeniu NH2-terminal responsabil de funcia
ATP-azic i un domeniu COOH-terminal
implicat n legarea substratului peptidic.

BiP este responsabil i pentru controlul nchiderii/deschiderii transloconului.


Controlul calitii proteinelor
nou-sintetizate n RE.
Controlul calitii - Homeostazia proteinelor
(proteostasis)
Proteinele celulare sunt sintetizate i degradate continuu de
ctre celule. Dei la prima vedere dinamica acestor procese
pare s determine o risip a resurselor celulare, n realitate
asigur o limitarea a perioadei n care proteinele sunt expuse
la aciune nociv, denaturant, exercitat de diveri ageni
din mediul intracelular cum sunt de exemplu agenii oxidani.
Aadar, funcionalitatea proteinelor celulare este asigurat
de un sistem integrat care asigur adoptarea i
protecia conformaiilor native, funcionale ale
proteinelor, sistem denumit reea de proteostaz. Aceast
reea complex, responsabil de homeostazia proteinelor
(proteostasis), include, alturi de alte componente,
proteinele chaperone i sistemul ubiquitin-proteazom.
Proteazomul 26S reprezint un
complex multimolecular (~ 2.500 kDa)
cu activitate proteolitic, ce funcioneaz
ca instrument specializat n degradarea
proteinelor pe cale non-lizozomal.
Proteasomul 26S este localizat att n
nucleu ct i n citosol. Substratul proteic
ce este destinat degradrii proteolitice
este recunoscut datorit modificrii sale
Inserarea n bistratul lipidic al
proteinelor transmembranare (topologia
proteinelor TM)
Topologia proteinelor inserate n bistratul lipidic prin
segmente TM cu conformaie de -helix este determinat
de combinaii ale unor secvene de aminoacizi hidrofobi
(sau preponderent hidrofobi) start-transfer i stop-
transfer, ce alterneaz n structura primar a proteinei
cu secvene de aminoacizi hidrofili.
Procesul este controlat la nivelul transloconului din
membrana RE (reglarea nchiderii i deschiderii porului
transloconului).
Inserarea n bistratul lipidic al unei
proteine cu 7 segmente
transmembranare
Biogeneza membranelor n RE
Rennoirea membranelor necesit sinteza de noi
molecule lipidice. n celulele animale la nivelul RE sunt
sintetizate clasele majore de lipide membranare
(fosfogliceride, colesterol) sau precursori ai unor lipide
membranare ce sunt ulterior prelucrai n aparatul Golgi
(ceramide - precursori ai sfingomielinelor i
glicosfingolipidelor).
Biosinteza fosfolipidelor se desfoar n mai multe
etape catalizate de enzime membranare, numai la
nivelul feei citosolice a membranei RE.
Pentru a echilibra compoziia n fosfolipide a celor dou
straturi moleculare ale bistratului membranei RE, la
nivelul acesteia acioneaz un traslocator
fosfolipidic (scramblaza) ce mediaz transferul
fosfolipidelor de pe un strat molecular pe cellalt
(micri de flip-flop), echilibrnd distribuia
fosfolipidelor pe cele dou straturi moleculare ale
bistratului lipidic (transferul are loc cu o frecvena de
100.000 de ori mai mare dect micarea de flip-flop
spontan).
RE AG
AG

Ceramidele sunt sintetizate n RE din sfingozin (aminoalcool cu


18 atomi de C a crei grupare NH2 formeaz o legtur amidic
cu gruparea COOH a unui acid gras). Ulterior, n aparatul Golgi
din ceramide se sintetizeaz alte sfingolipide, ca de exemplu
sfingomielina i glicosfingolipidele (cerebrozide i gangliozide).
Translocatori fosfolipidici: scramblaza din
membrana RE i flipaza din membrana
plasmatic
Distribuirea lipidelor nou sintetizate
ctre sistemele membranare din
celul
Lipidele sintetizate la nivelul RE sunt distribuite
endomembranelor (aparat Golgi, lizosomi) i
membranei plasmatice pe calea transportului
vezicular.
Pentru nveliul nuclear distribuirea lipidelor se
face prin difuzie lateral.
n cazul mitocondriilor i peroxizomilor importul
lipidelor membranare se desfoar prin
intermediul unor proteine de transfer (engl.
lipid transfer proteins). Acestea sunt proteine
hidrosolubile ce au capacitatea de a transfera
moleculele individuale de fosfogliceride ntre
membrane. Ele pot extrage un fosfoglicerid dintr-o
structur membranar i l pot elibera altei
membrane. Proteinele de transfer sunt specifice
pentru un anumit tip de fosfoglicerid ntruct
interacioneaz specific cu capul polar al acestuia.
Lipidele sintetizate la nivelul RE
ajung la Transportul vezicular
nivelul membranei plasmatice pe
calea
transportului vezicular.
Distribuia asimetric a lipidelor
n
membrana plasmatic este creat i
meninut de flipaze i flopaze, cu
consum de energie.
Distribuia asimetric a lipidelor
Transportul lipidelor nou-sintetizate mediat de
proteinele de transfer
(engl. lipid transfer proteins, LTP). Ele pot extrage o molecul
individual
dintr-o structur membranar i o eliberez unei membrane
acceptor (sau pot face schimbul cu alt molecul lipidic a
membranei acceptor).
Distribuirea lipidelor nou sintetizate n RE ctre
nveliul nuclear se face prin difuzie lateral.